不同培养基上羊肚菌菌株产无性孢子观察.pdf

2 0 1 9 年 第 4 1 卷 第 1 期 d i b l e f u n g i 2 0 2 1 年 第 4 3 卷 第 2 期 育 种 驯 化 d i b l e f u n g i 羊 肚 菌 隶 属 子 囊 菌 门 盘 菌 纲 盘 菌 目 羊 肚 菌 科 是 一 类 世 界 性 分 布 食 药 兼 用 的 珍 稀 菌 类 1 4 文 献 记 载 1 9 9 0 年 V O L K L E O N A R D 5 描 述 了 羊 肚 菌 无 性 孢 子 并 指 出 羊 肚 菌 可 能 经 历 两 种 不 同 的 生 活 史 途 径 2 0 0 7 年 P I L Z 6 报 道 并 描 绘 了 羊 肚 菌 的 无 性 孢 子 的 形 态 但 缺 乏 更 加 详 尽 的 影 像 资 料 直 到 2 0 1 0 年 M A S A P H Y 通 过 电 子 扫 描 显 微 镜 观 察 并 首 次 报 道 了 红 褐 羊 肚 菌 M o r c h e l l a r u f o b r u n n e a 的 无 性 孢 子 7 但 迄 今 为 止 国 内 关 于 羊 肚 菌 无 性 孢 子 的 相 关 研 究 仍 然 较 少 笔 者 所 在 团 队 自 1 9 9 9 年 起 开 始 研 究 羊 肚 菌 多 年 来 积 累 了 一 定 的 羊 肚 菌 种 质 资 源 和 技 术 成 果 8 1 2 羊 肚 菌 人 工 栽 培 及 其 他 试 验 过 程 中 均 出 现 无 性 孢 子 的 现 象 即 菌 霜 但 国 内 针 对 羊 肚 菌 无 性 孢 子 的 研 究 和 微 观 描 述 目 前 较 少 且 是 否 所 有 羊 肚 菌 均 能 够 产 生 无 性 孢 子 尚 不 清 楚 为 此 笔 者 随 机 观 察 记 录 了 5 株 不 同 来 源 的 羊 肚 菌 菌 株 在 3 种 培 养 基 上 菌 丝 生 长 产 孢 情 况 及 孢 子 的 微 观 特 征 期 望 有 助 于 我 国 羊 肚 菌 的 人 工 栽 培 技 术 研 究 和 商 业 化 开 发 1 材 料 与 方 法 1 1 供 试 菌 株 羊 肚 菌 菌 株 随 机 选 自 陕 西 省 微 生 物 研 究 所 秦 岭 菌 物 标 本 馆 S X I M 分 离 纯 化 后 编 号 M 1 M 2 M 3 M 4 M 5 保 藏 表 1 供 试 羊 肚 菌 菌 株 及 来 源 编 号 M 1 M 2 M 3 M 4 M 5 菌 株 粗 腿 羊 肚 菌 M c r a s s i p e s 尖 顶 羊 肚 菌 M e s c u l e n t a 粗 腿 羊 肚 菌 M c r a s s i p e s 梯 棱 羊 肚 菌 M i m p o r t u n a 粗 腿 羊 肚 菌 M c r a s s i p e s 来 源 陕 西 省 柞 水 县 陕 西 省 宁 陕 县 四 川 省 绵 阳 市 四 川 省 成 都 市 云 南 省 瑞 丽 市 1 2 供 试 培 养 基 根 据 羊 肚 菌 的 生 态 特 点 设 计 3 种 培 养 基 分 别 编 号 为 P D A 培 养 基 木 屑 培 养 基 细 木 屑 9 0 麸 皮 9 硫 酸 镁 1 培 养 料 含 水 量 5 5 6 0 p H 自 然 拌 料 后 装 入 培 养 皿 中 厚 度 8 1 0 m m 1 2 1 灭 菌 2 0 m i n 腐 殖 土 培 养 基 将 腐 殖 土 筛 去 石 头 和 树 枝 后 按 照 1 1 质 量 比 加 入 细 沙 土 培 养 料 含 水 量 4 0 5 0 p H 自 然 拌 料 后 装 入 培 养 皿 中 厚 度 8 1 0 m m 1 2 1 灭 菌 1 2 0 m i n 1 3 供 试 菌 株 的 培 养 将 M 1 M 2 M 3 M 4 M 5 菌 株 的 纯 培 养 物 分 别 接 种 于 P D A 培 养 基 平 板 上 置 于 培 养 箱 中 2 0 恒 温 培 养 3 5 d 待 菌 丝 即 将 长 满 平 板 时 取 出 备 用 1 4 供 试 羊 肚 菌 菌 株 在 3 种 培 养 基 上 菌 丝 生 长 及 无 性 孢 子 观 察 用 打 孔 器 在 M 1 M 2 M 3 M 4 M 5 菌 株 的 固 体 培 养 基 平 板 上 的 菌 落 边 缘 区 域 均 匀 打 取 直 径 6 m m 的 菌 丝 体 块 分 别 接 种 于 供 试 培 养 基 上 并 在 每 个 接 种 后 的 平 板 插 入 无 菌 的 盖 玻 片 2 5 恒 温 培 养 6 8 d 后 1 3 采 用 奥 林 巴 斯 B X 4 3 生 物 显 微 镜 观 察 并 记 录 不 同 培 养 基 上 羊 肚 菌 菌 株 产 无 性 孢 子 观 察 祁 鹏 1 张 黎 光 1 戴 璐 1 路 鹏 鹏 1 刘 愚 1 乔 婷 1 陈 世 明 2 李 峻 志 1 1 陕 西 省 微 生 物 研 究 所 陕 西 西 安 7 1 0 0 4 3 2 陕 西 宁 陕 县 秦 南 菌 业 科 技 有 限 公 司 陕 西 安 康 7 1 1 6 9 9 摘 要 利 用 光 学 显 微 镜 观 察 并 研 究 5 株 羊 肚 菌 菌 株 在 3 种 培 养 基 上 产 生 无 性 孢 子 的 情 况 结 果 粗 腿 羊 肚 菌 M o r c h e l l a c r a s s i p e s 在 3 种 不 同 培 养 基 上 均 未 产 生 无 性 孢 子 尖 顶 羊 肚 菌 M e s c u l e n t a 和 梯 棱 羊 肚 菌 M i m p o r t u n a 在 腐 殖 土 培 养 基 上 产 生 无 性 孢 子 表 明 无 性 孢 子 产 生 与 否 并 非 是 羊 肚 菌 属 真 菌 的 共 有 特 征 而 尖 顶 羊 肚 菌 和 梯 棱 羊 肚 菌 具 备 相 同 的 发 育 过 程 表 明 这 两 个 种 在 进 化 过 程 中 有 更 近 的 亲 缘 关 系 关 键 词 羊 肚 菌 无 性 孢 子 形 态 特 征 菌 丝 体 中 图 分 类 号 S 6 4 6 9 文 章 编 号 1 0 0 0 8 3 5 7 2 0 2 1 0 2 0 0 2 4 0 2 收 稿 日 期 2 0 2 0 0 6 0 5 一 稿 2 0 2 0 0 8 3 1 修 改 稿 基 金 项 目 国 家 重 点 研 发 计 划 2 0 1 8 Y F D 1 0 0 1 0 0 0 中 央 引 导 地 方 专 项 2 0 1 9 Z Y F P 0 3 陕 西 省 科 学 院 科 技 一 所 一 品 专 项 2 0 1 8 k 0 2 作 者 简 介 祁 鹏 助 理 研 究 员 主 要 从 事 大 型 真 菌 调 查 保 护 与 开 发 方 面 的 研 究 联 系 电 话 1 8 6 9 1 4 9 2 0 0 2 E m a i l q i p e n g 3 2 5 1 6 3 c o m 通 信 作 者 李 峻 志 副 研 究 员 主 要 从 事 大 型 真 菌 种 质 资 源 代 谢 产 物 标 准 化 生 产 技 术 等 研 究 开 发 工 作 E m a i l x i a n j u n z h i 1 6 3 c o m 2 0 2 1 4 3 2 2 4 2 6 祁 鹏 等 不 同 培 养 基 上 羊 肚 菌 菌 株 产 无 性 孢 子 观 察 2 4d i b l e f u n g i 2 0 1 9 年 第 4 1 卷 第 1 期 2 0 2 1 年 第 4 3 卷 第 2 期 育 种 驯 化 2 结 果 与 分 析 2 1 供试羊肚菌菌株在 3 种培养基上菌丝生长状况 供 试 羊 肚 菌 菌 株 在 3 种 培 养 基 上 菌 丝 都 能 够 很 好 的 生 长 但 只 有 M 2 M 4 菌 株 在 培 养 基 上 产 生 无 性 孢 子 表 2 供 试 羊 肚 菌 菌 株 在 3 种 培 养 基 上 的 菌 丝 生 长 状 况 菌 株 编 号 M 1 M 2 M 3 M 4 M 5 培 养 基 编 号 菌 丝 长 势 较 浓 密 较 浓 密 稀 疏 较 浓 密 较 浓 密 稀 疏 浓 密 浓 密 较 浓 密 较 浓 密 较 浓 密 稀 疏 浓 密 较 浓 密 稀 疏 菌 核 形 态 颗 粒 状 初 期 白 色 逐 渐 转 为 黄 色 圆 形 颗 粒 转 至 盘 状 未 见 颗 粒 状 稀 少 白 色 渐 变 为 黄 褐 色 颗 粒 状 稀 少 白 色 至 黄 色 未 见 颗 粒 状 有 黄 色 小 水 珠 白 色 至 黄 色 颗 粒 状 白 色 渐 变 为 黄 色 未 见 未 见 盘 状 浅 黄 色 未 见 颗 粒 状 白 色 至 黄 色 颗 粒 状 浅 黄 色 未 见 无 性 孢 子 无 无 无 无 无 有 无 无 无 无 无 有 无 无 无 2 2 供 试 羊 肚 菌 菌 株 在 3 种 培 养 基 上 产 无 性 孢 子 观 察 结 果 供 试 羊 肚 菌 菌 株 在 3 种 培 养 基 上 培 养 6 8 d 在 培 养 基 上 M 2 M 4 菌 株 率 先 产 生 无 性 产 孢 结 构 并 产 生 无 性 孢 子 其 余 菌 株 及 培 养 基 上 即 使 培 养 3 0 d 仍 未 产 生 无 性 孢 子 由 此 可 见 3 种 培 养 基 中 培 养 基 和 培 养 基 不 适 合 作 为 羊 肚 菌 产 孢 的 培 养 基 培 养 基 可 作 为 羊 肚 菌 产 孢 培 养 基 就 5 株 供 试 羊 肚 菌 菌 株 而 言 M 2 M 4 菌 株 在 培 养 基 上 都 产 生 了 无 性 孢 子 而 在 培 养 基 和 上 均 未 产 生 无 性 孢 子 M 1 M 3 M 5 菌 株 在 3 种 培 养 基 上 均 未 产 生 无 性 孢 子 因 此 推 测 这 3 株 羊 肚 菌 繁 殖 不 存 在 无 性 孢 子 阶 段 与 M 2 M 4 菌 株 的 生 长 发 育 阶 段 差 异 较 大 2 3 供 试 M 2 M 4 菌 株 无 性 孢 子 的 显 微 结 构 在 显 微 镜 下 观 察 M 2 与 M 4 羊 肚 菌 菌 株 无 性 产 孢 结 构 未 发 现 无 性 产 孢 结 构 存 在 明 显 差 异 2 株 羊 肚 菌 菌 株 均 在 气 生 菌 丝 的 顶 端 产 生 无 性 产 孢 结 构 该 结 构 均 具 备 明 显 分 化 的 孢 子 梗 一 二 级 分 枝 分 支 末 端 即 为 小 梗 小 梗 以 轮 状 着 生 于 分 支 菌 丝 上 每 轮 有 3 6 个 小 梗 在 每 个 孢 子 梗 的 顶 端 以 出 芽 方 式 产 生 1 2 个 无 性 孢 子 小 梗 长 度 为 8 1 2 m 无 性 孢 子 直 径 3 5 m 无 性 孢 子 圆 球 形 至 椭 圆 球 形 光 滑 无 色 透 明 单 核 有 油 滴 图 1 M 2 菌 株 无 性 孢 子 梗 M 2 菌 株 无 性 孢 子 M 4 菌 株 无 性 孢 子 梗 M 4 菌 株 无 性 孢 子 图 1 M 2 M 4 羊 肚 菌 菌 株 无 性 孢 子 梗 及 无 性 孢 子 3 小 结 与 讨 论 羊 肚 菌 在 石 灰 岩 白 垩 质 土 壤 腐 殖 土 黑 黄 色 壤 土 沙 泥 混 合 土 沙 壤 土 中 均 能 够 生 长 供 试 5 株 羊 肚 菌 菌 株 在 3 种 培 养 基 上 都 能 够 很 好 地 进 行 营 养 生 长 也 验 证 了 羊 肚 菌 菌 丝 具 备 较 强 生 长 能 力 能 够 从 多 种 不 同 的 营 养 基 质 中 获 取 营 养 这 可 能 是 其 在 全 世 界 范 围 内 分 布 较 广 泛 的 重 要 原 因 供 试 菌 株 M 2 尖 顶 羊 肚 菌 和 M 4 梯 棱 羊 肚 菌 在 培 养 基 上 产 生 了 无 性 孢 子 这 一 共 同 发 育 阶 段 表 明 这 两 个 种 在 进 化 过 程 中 具 备 更 近 的 亲 缘 关 系 该 特 征 或 许 可 作 为 部 分 种 属 羊 肚 菌 分 类 和 鉴 定 的 微 观 依 据 供 试 粗 腿 羊 肚 菌 菌 株 未 见 到 无 性 孢 子 阶 段 但 不 影 响 其 在 野 外 的 正 常 生 长 和 发 育 可 能 其 不 存 在 无 性 孢 子 的 生 长 发 育 阶 段 目 前 对 尖 顶 羊 肚 菌 等 无 性 孢 子 产 生 的 作 用 机 理 以 及 与 羊 肚 菌 子 囊 果 发 生 的 关 系 尚 不 明 确 针 对 羊 肚 菌 生 活 史 和 系 统 发 育 过 程 笔 者 将 会 继 续 进 行 研 究 探 索 并 期 望 通 过 研 究 为 羊 肚 菌 人 工 驯 化 及 稳 产 提 供 科 学 依 据 2 52 0 1 9 年 第 4 1 卷 第 1 期 d i b l e f u n g i 2 0 2 1 年 第 4 3 卷 第 2 期 育 种 驯 化 参 考 文 献 1 卯 晓 岚 中 国 大 型 真 菌 M 郑 州 河 南 科 学 技 术 出 版 社 2 0 0 0 2 戴 芳 澜 中 国 真 菌 总 汇 M 北 京 科 学 出 版 社 1 9 7 9 3 D U X H Z H A O Q O D O N N E L L K e t a l M u l t i g e n e m o l e c u l a r p h y l o g e n e t i c s r e v e a l s t r u e m o r e l s M o r c h e l l a a r e e s p e c i a l l y s p e c i e s r i c h i n C h i n a J F u n g a l G e n e t i c s B i o l o g y 2 0 1 2 4 9 6 4 5 5 4 6 9 4 K U O M D E W S B U R Y D R O D O N N E L L K e t a l T a x o n o m i c r e v i s i o n o f t r u e m o r e l s M o r c h e l l a i n C a n a d a a n d t h e U n i t e d S t a t e s J M y c o l o g i a 2 0 1 2 1 0 4 5 1 1 5 9 1 1 7 7 5 V O L K T J L E O N A R D T J C y t o l o g y o f t h e l i f e c y c l e o f M o r c h e l l a J M y c o l o g i c a l R e s e a r c h 1 9 9 0 9 4 3 3 9 9 4 0 6 6 P I L Z D M C L A I N R A L E X A N D E R S e t a l E c o l o g y a n d m a n a g e m e n t o f m o r e l s h a r v e s t e d f r o m t h e f o r e s t s o f W e s t e r n N o r t h A m e r i c a R G e n e r a l T e c h n i c a l R e p o r t P N W G T R 7 1 0 P o r t l a n d P a c i f i c N o r t h w e s t R e s e a r c h S t a t i o n 2 0 0 7 7 M A S A P H Y S B i o t e c h n o l o g y o f m o r e l m u s h r o o m s s u c c e s s f u l f r u i t i n g b o d y f o r m a t i o n a n d d e v e l o p m e n t i n a s o i l l e s s s y s t e m J B i o t e c h n o l o g y L e t t e r s 2 0 1 0 3 2 1 0 1 5 2 3 1 5 2 7 8 李 峻 志 雷 萍 孙 悦 迎 羊 肚 菌 子 囊 果 栽 培 工 艺 研 究 J 食 用 菌 2 0 0 1 2 3 4 2 3 2 6 9 李 峻 志 戴 璐 祁 鹏 等 秦 岭 羊 肚 菌 种 质 资 源 调 查 J 陕 西 农 业 科 学 2 0 1 9 6 5 4 9 5 9 8 1 0 李 峻 志 戴 璐 祁 鹏 等 秦 岭 羊 肚 菌 人 工 栽 培 菌 种 选 育 研 究 J 北 方 园 艺 2 0 1 9 5 1 4 8 1 5 2 1 1 李 书 兰 和 晓 娜 李 安 利 等 不 同 配 方 培 养 基 对 羊 肚 菌 菌 丝 生 长 及 菌 核 和 子 实 体 形 成 的 影 响 J 安 徽 农 业 科 学 2 0 1 2 4 0 5 2 5 8 7 2 5 8 8 2 5 9 3 1 2 戴 璐 李 峻 志 李 安 利 等 秦 岭 中 段 冷 水 沟 野 生 食 药 用 真 菌 的 分 子 鉴 定 J 食 用 菌 2 0 1 3 3 5 5 1 7 1 9 1 3 杜 习 慧 赵 琪 杨 祝 良 羊 肚 菌 的 多 样 性 演 化 历 史 及 栽 培 研 究 进 展 J 菌 物 学 报 2 0 1 4 3 3 2 1 8 3 1 9 7 源 菌 丝 菌 落 形 态 相 似 2 0 笔 者 推 测 秀 珍 菇 秀 T 的 退 化 表 现 之 一 为 营 养 元 素 特 别 是 氮 素 的 吸 收 不 良 由 此 可 见 针 对 退 化 秀 珍 菇 的 复 壮 方 法 除 了 原 生 质 体 再 生 法 是 否 可 以 通 过 调 节 母 种 或 栽 培 料 中 配 方 配 比 来 达 到 复 壮 效 果 这 种 复 壮 方 法 已 有 复 壮 杏 鲍 菇 草 菇 报 道 7 2 1 还 有 待 进 一 步 研 究 参 考 文 献 1 戴 芳 澜 中 国 真 菌 总 汇 M 北 京 科 学 出 版 社 1 9 7 9 3 5 7 8 1 7 2 卢 政 辉 秀 珍 菇 安 全 高 效 生 产 技 术 要 点 J 浙 江 食 用 菌 2 0 0 9 1 7 4 4 6 4 8 3 罗 信 昌 陈 士 瑜 中 国 菇 业 大 典 M 北 京 清 华 大 学 出 版 社 2 0 1 0 4 樊 晓 琳 叶 绿 笋 边 银 丙 双 孢 蘑 菇 菌 株 A s 2 7 9 6 的 提 纯 复 壮 J 食 用 菌 学 报 2 0 1 0 1 7 3 2 0 2 4 5 陈 发 川 柯 斌 榕 吴 小 平 秀 珍 菇 菌 种 复 壮 方 法 比 较 J 热 带 作 物 学 报 2 0 1 1 3 2 1 1 2 0 3 7 2 0 4 1 6 张 朝 辉 刘 映 淼 戚 元 成 等 食 用 菌 病 毒 脱 毒 方 法 的 比 较 J 病 毒 学 报 2 0 1 0 2 6 3 2 4 9 2 5 4 7 李 巨 燕 王 秀 芹 李 巨 臣 四 种 母 种 培 养 基 培 养 复 壮 杏 鲍 菇 菌 种 效 果 比 较 J 食 用 菌 2 0 1 8 4 0 4 3 0 3 2 8 李 红 肖 千 明 刘 娜 等 食 用 菌 菌 种 退 化 原 因 分 析 及 复 壮 方 法 的 探 讨 J 辽 宁 农 业 科 学 2 0 1 0 5 5 3 5 5 9 崔 晓 丛 倩 倩 王 庆 武 等 秀 珍 菇 原 生 质 体 高 效 制 备 与 再 生 研 究 J 中 国 食 用 菌 2 0 1 8 3 7 5 4 4 4 8 1 0 马 洪 艳 白 宝 良 秀 珍 菇 栽 培 技 术 J 北 方 园 艺 2 0 1 4 1 3 1 4 0 1 4 1 1 1 林 俊 芳 刘 志 明 陈 晓 阳 等 真 菌 漆 酶 的 酶 活 测 定 方 法 评 价 J 生 物 加 工 工 程 2 0 0 9 7 4 1 8 1 2 杨 静 茯 苓 W o l f i p o r i a c o c o s 胞 外 酶 活 性 生 理 特 性 与 菌 种 质 量 的 相 关 性 研 究 D 重 庆 西 南 大 学 2 0 1 5 1 3 C O H E N R P E R S K Y L H A D A R Y B i o t e c h n o l o g i c a l a p p l i c a t i o n s a n d p o t e n t i a l o f w o o d d e g r a d i n g m u s h r o o m s o f t h e g e n u s P l e u r o t u s J A p p l i e d M i c r o b i o l o g y a n d B i o t e c h n o l o g y 2 0 0 2 5 8 2 5 8 2 5 9 4 1 4 李 云 梦 平 菇 菌 株 提 纯 复 壮 技 术 应 用 效 果 研 究 D 河 北 邯 郸 河 北 工 程 大 学 2 0 1 8 1 5 熊 欢 原 生 质 体 技 术 在 茯 苓 菌 种 复 壮 育 种 和 生 活 史 研 究 中 的 应 用 D 武 汉 华 中 农 业 大 学 2 0 0 6 1 6 伍 虹 蓉 毛 木 耳 菌 种 复 壮 技 术 研 究 D 福 州 福 建 农 林 大 学 2 0 1 2 1 7 秦 俊 哲 魏 颖 杰 陈 合 等 金 针 菇 液 体 菌 种 培 养 过 程 检 测 指 标 的 研 究 J 食 用 菌 学 报 2 0 0 3 1 0 1 1 2 1 6 1 8 聂 荣 荣 邱 运 文 黄 湛 等 金 针 菇 液 体 菌 种 活 力 检 测 的 生 物 标 记 物 研 究 J 食 用 菌 2 0 1 4 3 6 2 1 1 1 2 1 9 I V A N A E I C H L E R O V L A D I S L A V H O M O L K A M I C H A L T O M O V S K Y e t a l L o n g t e r m s t o r a g e o f P l e u r o t u s o s t r e a t u s a n d T r a m e t e s v e r s i c o l o r i s o l a t e s u s i n g d i f f e r e n t c r y o p r e s e r v a t i o n t e c h n i q u e s a n d i t s i m p a c t o n l a c c a s e a c t i v i t y J F u n g a l B i o l o g y 2 0 1 5 1 1 9 1 2 1 3 4 5 1 3 5 3 2 0 崔 晓 王 庆 武 安 秀 荣 等 泰 山 花 脸 香 蘑 的 生 物 学 特 性 研 究 J 食 药 用 菌 2 0 1 6 7 3 6 9 3 7 1 3 8 7 2 1 刘 小 霞 安 学 明 贠 建 民 等 改 变 培 养 基 碳 源 复 壮 草 菇 退 化 菌 种 J 菌 物 学 报 2 0 2 0 3 9 8 1 1 0 上 接 第 2 3 页 2 6