2018-樱桃组织培养及遗传转化研究进展_徐世彦.pdf

果 树 学 报 2018 35 10 1277 1285 JournalofFruitScience DOI 10 13925 ki gsxb 20180153 樱桃组织培养及遗传转化研究进展 徐世彦 1 武凯翔 2 吴延军 2 1 陕西省果树良种苗木繁育中心 陕西铜川 727031 2 浙江省农业科学院园艺研究所 杭州 310021 摘 要 樱 桃 果 实 甜 美 营 养 丰 富 深 受 消 费 者 喜 爱 是 极 具 市 场 潜 力 的 水 果 之 一 但 是 由 于 其 易 裂 果 不 耐 贮 藏 且 抗 性 较 弱 使 樱 桃 产 业 的 发 展 受 到 了 极 大 影 响 因 此 加 快 樱 桃 优 良 品 种 的 选 育 十 分 重 要 采 用 传 统 育 种 方 式 在 一 定 程 度 上 所 需 周 期 较 长 工 作 量 大 且 杂 交 胚 败 育 率 较 高 严 重 阻 碍 了 樱 桃 育 种 工 作 的 进 程 而 通 过 植 物 组 织 培 养 与 遗 传 转 化 可 以 克 服 樱 桃 传 统 育 种 的 局 限 性 加 速 育 种 工 作 的 进 程 笔 者 分 析 了 樱 桃 茎 尖 茎 段 和 叶 等 器 官 培 养 以 及 胚 培 养 的 影 响 因 素 如 基 因 型 外 植 体 类 型 培 养 条 件 和 激 素 组 合 等 综 述 了 有 关 樱 桃 标 记 基 因 和 目 的 基 因 的 遗 传 转 化 包 括 转 化 方 法 转 化 材 料 所 用 基 因 类 型 转 化 植 株 的 鉴 定 方 法 转 化 结 果 以 及 转 化 率 等 并 对 生 物 技 术 在 樱 桃 研 究 中 存 在 的 问题及今后在樱桃中的应用前景进行了讨论 关键词 樱桃 组织培养 遗传转化 中图分类号 S662 5 文献标志码 A 文章编号 1009 9980 2018 10 1277 09 收稿日期 2018 05 03 接受日期 2018 08 29 基金项目 浙江省 十三五 育种专项 2016C02052 9 浙江省科技厅公益技术研究农业项目 2016C32040 作 者 简 介 徐 世 彦 女 硕 士 高 级 农 艺 师 主 要 从 事 苹 果 樱 桃 等 果 树 的 组 织 培 养 与 无 病 毒 苗 木 的 快 繁 研 究 Tel 18309275696 E mail xsy 2121 通信作者Authorforcorrespondence Tel 0571 86058831 E mail wyjwjht Advances in the research of tissue culture and genetic transformation in cherry XUShiyan 1 WUKaixiang 2 WUYanjun 2 1 Shaanxi Provincial Fruit Trees Propagation Center Tongchuan 727031 Shaanxi China 2 Institute of Horticulture Zhejiang Academy ofAgriculturalSciences Hangzhou310021 Zhejiang China Abstract Cherryisoneofthemostpopularfruitsintheworldforitsgoodtaste abundantnutrientsand high economic benefit for the growers However the development of cherry industry is limited for seri ous cracking and poor storage life of the fruits Breeding new varieties with good quality and long stor age life is very urgent for the industry As a perennial plant cherry has a long life cycle that limits con ventional breeding The technology of tissue culture and genetic transformation provides an efficient method for overcoming the obstacles of traditional breeding and accelerating the breeding programs Plant tissue culture can produce a large number of healthy and uniform plants in a short period in con trolled environment Tissue culture and genetic transformation of cherry were reviewed in the present paper The genotype type was an important internal factor affecting regeneration Different varieties had diverse regeneration rates Meanwhile the survival rates varied with the times of collecting apical buds anddarktreatmentofleaves Theyoungleavesintheupperpartofthecherrytreehadstrongermorpho genesis abilities The light quality also affected in vitro regeneration of the leaves of Chinese cherry The duration of low temperature was key factor affecting embryo culture of cherry The embryonic age was an important factor affecting the success of embryo rescue and the growth of the embryo seedling The media greatly affected the regeneration rate of plantlets Agrobacterium mediated transformation was one of the most widely used methods in cherry By means of genetic transformation the marker genes andtargetgenessuchasgrowthcharacteristicrelatedgenes frozentolerancegenes diseaseresis 果 树 学 报 第35 卷 樱 桃 是 蔷 薇 科 Rosaceae 李 属 Prunus 樱 桃 亚 属 Ceraras 植 物 果 实 色 泽 艳 丽 味 道 香 甜 富 含 维 生 素 钙 铁 等 多 种 元 素 是 落 叶 果 树 中 成 熟 期 较 早 的 树 种 之 一 1 目 前 世 界 上 栽 培 较 为 普 遍 的 樱 桃 种 类 有 欧 洲 甜 樱 桃 PrunusaviumL 欧 洲 酸 樱 桃 P cerasusL 中 国 樱 桃 P pseudocerasusL 和 毛 樱 桃 P tomentosaThunb 等 樱 桃 有 多 种 繁 殖 方 式 包 括 种 子 繁 殖 扦 插 繁 殖 分 株 繁 殖 嫁 接 繁 殖 和 组 织 培 养 等 其 中 生 产 上 常 用 的 为 嫁 接 繁 殖 组 织 培 养 不 仅 可 在 短 期 内 获 得 大 量 苗 木 进 行 全 年 生 产 同 时 还 有 利 于 植 物 种 质 资 源 的 收 集 和 保 存 等 2 现 今 随 着 樱 桃 产 业 的 发 展 建 立 高 频 高 效 的 樱 桃 再 生 体 系 并 对 其 进 行 遗 传 转 化已成为提高育种效率的有效方法 1 樱桃组织培养研究进展 国 内 外 研 究 人 员 对 樱 桃 的 组 织 培 养 已 经 做 了 一 定 程 度 的 探 索 研 究 其 中 大 多 集 中 于 茎 尖 茎 段 培 养 叶片培养和胚培养等方面 1 1 茎尖 茎段培养 早 在1986 年 国 内 就 有 樱 桃 茎 尖 培 养 的 有 关 研 究 其 中 董 义 虎 等 3 进 行 了 影 响 毛 樱 桃 P tomento saThunb 茎 尖 培 养 的 有 关 因 素 研 究 并 获 得 毛 樱 桃 茎 尖 增 殖 和 生 根 的 最 佳 培 养 基 配 方 在 国 外 1982 年Ancora 等 4 进 行 了 有 关 樱 桃 茎 尖 的 研 究 并 成 功 获 得 植 株 茎 尖 培 养 受 品 种 取 材 时 期 培 养 基 以 及 植物生长调节物质等多种因素的影响 5 1 1 1 品 种 基 因 型 在 相 同 的 培 养 条 件 下 基 因 型 不 同 樱 桃 分 化 能 力 差 别 很 大 在6 种 樱 桃 砧 木 中 1193 的 分 化 能 力 强 于 北 海 道 山 东 草 樱 Colt 水 桃 以 及 本 溪 山 樱 6 5 个 甜 樱 桃 品 种 中 红 灯 成 苗 率 最 高 砂 蜜 豆 次 之 雷 尼 尔 高 砂 大 紫 较低 7 1 1 2 取 材 时 期 取 材 时 期 不 同 成 苗 率 差 异 显 著 樱 桃 夏 季 取 材 比 冬 季 成 苗 率 高 7 如 樱 桃 矮 化 砧 木 SD 13 8 Mahaleb 9 日 本 抗 寒 砧 木 北 海 道 10 乌 克 兰 大 樱 桃 11 酸 樱 桃 12 13 皆 取 春 季 萌 动 芽 枝 条 作 外 植 体 而 大 紫 和 Colt 则 在 休 眠 后 取 材 其 成 活 率 显 著 高 于 其 他 时 期 14 另 外 草 原 樱 桃 15 甜 樱 桃 矮 化 砧 木 ZY 1 16 毛 樱 桃 17 蒙 古 樱 桃 南 京 樱 桃 18 乌 皮 樱 桃 19 以 及 矮 化 砧 木 GM 和 GC 两 个 系 列 20 皆 取 冬 季 休 眠 芽 作 外 植 体 1 1 3 培 养 基 及 植 物 生 长 调 节 物 质 茎 尖 茎 段 的 组 织 培 养 常 以MS 为 基 本 培 养 基 生 根 则 为1 2MS 或MS 同 时 培 养 基 物 理 状 态 不 同 茎 尖 茎 段 的 生 长 也 会 受 影 响 Muna 等 21 用 液 体 培 养 基 体 外 繁 殖 矮 化 樱 桃 砧 木 Maxma 14 其 生 根 效 率 高 达 100 目 前 国 内 樱 桃 组 培 多 以 固 体 培 养 基 为 主 液 体状态的培养基使用较少 BA 是 樱 桃 茎 尖 茎 段 分 化 必 不 可 少 的 植 物 生 长 调 节 物 质 由 表1 可 知 以MS 为 基 本 培 养 基 诱 导 丛 生 芽 BA 质 量 浓 度 范 围 为 0 2 1 0 mg L 1 IAA IBA NAA 等 激 素 的 质 量 浓 度 为0 1 0mg L 1 但BA 质 量 浓 度 过 高 会 导 致 试 管 苗 玻 璃 化 22 褪 黑 素 在 低 质 量 浓 度 下 促 进 生 根 但 高 质 量 浓 度 下 会 抑 制 樱 桃 正 常 生 长 23 1 1 4 炼 苗 及 移 栽 当 瓶 苗 在 生 根 培 养 基 中 培 养 30d 即 根 长 约2cm 时 开 瓶 炼 苗 28 29 炼 苗4 6d 后 移 栽 至 适 宜 基 质 中 组 培 苗 的 成 活 率 因 基 质 成 分 不 同 而 存 在 显 著 差 异 30 同 时 为 提 高 其 成 活 率 要 求 移 栽 基 质 养 分 充 足 保 水 性 透 气 性 好 温 室 温 度 湿 度适宜 tant genes softening and aging related genes had been transformed The prospects and problems of the genetic transformation in cherry were also discussed in this article Cherry tissue culture stays in suit ablemediumscreeningyet andwideusednurseryproductionsystemhasnotformed Mostofthetrans formation of cherry target genes absent the field testing only carried out on molecular level Most cher ry genetic transformation use rootstocks not cultivar as explants In addition single transformation and low the regeneration rate of explants lead to fewer successful cases of genetic transformation There fore we should actively strengthen the cherry tissue culture and regeneration system nursery produc tion system genetic transformation system especially for the cultivars in order to lay the foundation for cherrybreeding Keywords Cherry Tissueculture Genetictransformation 1278 等 樱桃组织培养及遗传转化研究进展 第10 期 1 2 叶片培养 由 于 品 种 叶 片 生 理 状 态 培 养 条 件 培 养 基 以 及 植 物 生 长 调 节 物 质 等 的 不 同 叶 片 再 生 频 率 差 异 很大 1 2 1 品 种 基 因 型 基 因 型 不 同 樱 桃 离 体 叶 片 的 再 生 能 力 也 存 在 一 定 差 异 31 在 相 同 培 养 条 件 下 樱 桃 Gisela 5 和 Gisela 6 的 叶 片 再 生 率 最 高 在 樱 桃 砧 木 98 1 Colt 大 青 叶 中 98 1 可 在 多 种 供 试 培 养 基 中 再 生 32 此 外 基 因 型 相 同 不 同 品 种 之 间 也 存 在 差 异 其 中 Gisela 6 比 Gisela 5 的 再 生频率高 31 1 2 2 叶 片 生 理 状 态 叶 片 再 生 率 因 其 生 理 状 态 不 同 而 存 在 一 定 差 异 将 樱 桃 上 中 和 下 部 叶 片 接 种 于 相 同 培 养 基 中 其 上 部 叶 片 叶 片 再 生 率 明 显 高 于 中 下 部 叶 片 33 34 其 中 组 培 苗 上 部 的1 3 枚 幼 叶 半 展 开 叶 片 再 生 率 最 高 完 全 展 开 叶 片 次 之 合 拢 叶 片 分化能力最差 35 1 2 3 培 养 条 件 接 种 后 的 黑 暗 处 理 对 叶 片 再 生 有 很 大 影 响 研 究 表 明 接 种 后 对 叶 片 进 行 10 15 d 的 黑 暗 处 理 离 体 叶 片 再 生 能 力 明 显 提 高 36 另 外 在5 下 黑 暗 处 理5d 后 转 入23 黑 暗 处 理10d 愈 伤 组 织 可 迅 速 从 切 口 处 发 生 再 转 移 到23 光 照 条 件 下 培 养 愈 伤 组 织 会 很 快 变 得 致 密 并 有 不 定 芽 出 现 35 另 有 研 究 认 为 在 25 2 下 黑 暗 处 理3d 叶 片 再 生 率 可 达 到 最 大 值 若 继 续 增 加 暗 处 理 时 间 叶片再生率反而降低 33 不 同 光 质 对 中 国 樱 桃 叶 片 离 体 再 生 也 有 一 定 影 响 其 中 新 型 照 明 光 源 T5 28W 蓝 光 红 光 1 2 效果最好 37 1 2 4 培 养 基 及 植 物 生 长 调 节 物 质 基 本 培 养 基 不 同 樱 桃 离 体 叶 片 再 生 率 差 异 显 著 用 于 樱 桃 离 体 叶 片 再 生 的 基 本 培 养 基 主 要 有WPM 和MS 等 激 素 种 类 质 量 浓 度 及 其 配 比 对 离 体 叶 片 再 生 培 养 有 显著影响 38 41 如表2 所示 表1 不同品种的茎尖 茎段组织培养 Table1 Stemtissuecultureofdifferentcultivars 品种 Cultivar 极早 P mahalebL ZY 1 P mahalebL 红灯 Hongdeng 友谊樱桃 P mahalebL Gisela 5 P mahalebL 最佳培养基 Thebestmedium MS 0 8mg L 1 BA 0 1mg L 1 IAA MS 1 0mg L 1 6 BA 1 0mg L 1 GA MS 0 8mg L 1 6 BA 0 02mg L 1 NAA MS 1 5mg L 1 6 BA 0 3mg L 1 IAA MS 0 5mg L 1 6 BA 0 2mg L 1 IBA 增殖系数 Propagation coefficient 11 00 9 42 3 00 7 40 5 40 参考文献 Reference 24 16 25 26 27 表2 不同品种离体叶片再生培养基 Table2 Regenerationmediumofleavesinvitroofdifferentcultivars 品种 Cultivar 本溪山樱Cerasussachalinesis Gisela 5 7P mahalebL ColtP mahalebL SummitP mahalebL MahalebP mahalebL SL64P mahalebL 最佳再生培养基 Thebestregenerationmedium MS 1 5mg L 1 6 BA 0 1mg L 1 IAA 0 5mg L 1 GA WPM 5 7mg L 1 BA 0 1 1 0mg L 1 IBA MS 6 0mg L 1 6 BA 1 0mg L 1 NAA 0 5mg L 1 GA MS 0 5mg L 1 6 BA 0 05mg L 1 IBA 2 0mg L 1 GA3 WPM 5mg L 1 BA 0 7mg L 1 IBA DKW 2 5mg L 1 6 BA 0 05mg L 1 IBA 不定芽再生率 Adventitionsshootregenerationrate 76 30 70 00 21 30 91 00 52 40 90 00 参考文献 Reference 42 43 44 45 46 35 1 3 胚培养 胚 培 养 在 克 服 果 树 远 缘 杂 交 胚 败 育 胚 挽 救 和 生 产 无 病 毒 苗 木 等 研 究 领 域 发 挥 着 重 要 作 用 47 主 要 受 基 因 型 胚 龄 等 内 因 和 物 理 处 理 基 本 培 养 基 以 及激素等外因的影响 1 3 1 品 种 基 因 型 及 胚 龄 胚 发 育 指 数 樱 桃 胚 培 养 的 萌 发 率 因 品 种 基 因 型 不 同 而 存 在 差 异 中 国 樱 桃 不 同 品 种 与 红 灯 进 行 杂 交 其 中 以 五 莲 红 樱 桃 为 父 本 所 得 的 杂 种 萌 发 率 最 高 达93 33 且 苗 生 长 健 壮 以 平 度 长 把 红 为 父 本 得 到 的 杂 种 胚 萌 发率最低 且苗体矮小 生长势最差 48 胚 龄 或 PF 值 是 影 响 胚 挽 救 成 功 的 关 键 因 素 直 接 影 响 到 胚 培 养 成 苗 率 的 高 低 和 胚 培 苗 的 长 势 在 同 一 时 期 采 样 早 熟 品 种 胚 的 发 芽 率 高 于 中 熟 品 种 49 当 樱 桃 胚 发 育 指 数 大 于 0 7 即 胚 发 育 到 最 佳 状 态 但 又 尚 未 败 育 时 成 株 徐世彦 1279果 树 学 报 第35 卷 率 较 高 50 52 1 3 2 物 理 处 理 花 粉 辐 照 对 克 服 果 树 远 缘 杂 交 不 亲 和 和 自 交 不 孕 有 重 要 作 用 在 434 kV m 1 的 静 电 场 处 理 下 五 莲 红 樱 桃 与 杂 优1 号 进 行 杂 交 杂种胚的成苗率达到100 49 胚 的 低 温 处 理 是 樱 桃 胚 培 养 能 否 成 功 的 一 个 重 要 因 素 当 胚 经 过1 5 的 低 温 处 理 时 可 使 其 活 力 增 强 萌 芽 率 提 高 胚 培 苗 生 长 健 壮 拉 宾 斯 在 2 4 低 温 中 处 理 不 同 时 间 20d 就 有 胚 打 破 休 眠 而低温处理时间以60 80d 为宜 50 1 3 3 培 养 基 及 其 植 物 生 长 调 节 剂 樱 桃 胚 培 养 的 基 本 培 养 基 大 多 为 1 2 MS 植 物 生 长 调 节 剂 由 于 品 种 不 同 种 类 浓 度 和 配 比 的 要 求 差 异 很 大 如 表 3 所示 表3 不同品种的胚培养 Table3 Embryocultureofdifferentcultivars 品种 Cultivar 养老Elton 红灯 五莲红樱桃Hongdeng WulianRedCherry 红灯 郁李Hongdeng P japonica Thunb L 斯特拉 红灯Stella Hongdeng 红灯Hongdeng 先锋 对樱Van P pseudocerasus 最佳培养基 Thebestmedium 1 2MS 2 0mg L 1 BA 1 0mg L 1 IAA 10 0mg L 1 Vc 1 2MS 2 0mg L 1 BA 1 0mg L 1 IAA 10 0mg L 1 Vc 1 2MS 2 0mg L 1 6 BA 1 0mg L 1 IAA 10 0mg L 1 Vc MS 1 0mg L 1 BA 0 4mg L 1 IAA MS 2 0mg L 1 BA 1 0mg L 1 IAA 10mg L 1 GA3 1g L 1 活性炭 Activatedcarbon F14 0 5mg L 1 6 BA 1 0mg L 1 IBA 1 0mg L 1 GA3 成苗率 RateofPlantlet 100 00 93 33 92 60 93 30 90 00 57 10 参考文献 Reference 53 49 54 51 55 56 2 樱桃遗传转化研究 目 前 果 树 上 应 用 较 多 的 遗 传 转 化 方 法 包 括 基 因 枪 法 57 农 杆 菌 介 导 法 58 聚 乙 二 醇 PEG 法 59 电 激 法 60 等 在 樱 桃 上 应 用 最 多 的 是 农 杆 菌 介 导 的 遗 传转化方法 61 64 表4 2 1 标记基因转化 试 验 采 用 甜 樱 桃 矮 化 砧 木 Gisela 6 的 离 体 叶 片 进 行 再 生 培 养 通 过 根 癌 农 杆 菌 介 导 法 进 行 转 基 因 最 终 确 定gus 基 因 已 整 合 到 Gisela 6 染 色 体 上 获 得 了11 个 转 基 因 株 系 同 时 试 验 还 证 明 了 培 养 基 中 的 生 长 素 IBA 或NAA 可 提 高 遗 传 转 化 效 率 61 2 2 目的基因转化 2 2 1 转 改 良 品 种 和 砧 木 生 长 特 性 基 因 通 过 采 用 遗 传 转 化 可 以 改 良 果 树 栽 培 品 种 和 砧 木 的 生 长 特 性 62 采 用 根 癌 土 壤 杆 菌 介 导 法 将 rolC 基 因 导 入 中 国 矮 樱 99 02 叶 片 发 现 苗 的 根 数 和 根 长 显 著 增 加 63 将 PsTFL1 通 过 农 杆 菌 介 导 法 导 入 黑 樱 桃 使 其 与 FLOWERING LOCUST 抵 消 并 抑 制 花 相 关 基 因 的 转 录 可 以 调 节 开 花 时 间 以 达 到 繁 殖 不 育 的 目 的 64 此 外 将AGAMOUS AG 基 因 导 入 黑 樱 桃 中 最 终 也 获 得 了 转 基 因 植 株 但 种 植 时 部 分 枝 梢 和 叶 片 发 生 坏 死 使 根 系 转 基 因 植 物 对 环 境 的适应变得困难 65 2 2 2 转 抗 冻 性 基 因 在 抗 冻 性 转 基 因 研 究 方 面 樱 桃 已 经 获 得 了 7 个 含 抗 冻 基 因 的 遗 传 转 化 体 系 66 但最终其蛋白质并未在转化植株中表达出来 2 2 3 转 抗 病 性 基 因 在 抗 病 害 研 究 方 面 樱 桃 已 获 得 茎 尖 再 生 体 系 67 和 叶 片 再 生 体 系 32 68 将 抗 菌 肽 基 因 通 过 农 杆 菌 介 导 法 导 入 樱 桃 砧 木 最 终 在 转 化植株中得到了有效表达 2 2 4 转 抗 软 化 衰 老 基 因 樱 桃 作 为 一 个 优 良 果 树 树 种 不 仅 需 要 良 好 的 果 实 性 状 而 且 应 具 有 耐 储 性 ACC 氧 化 酶 多 聚 半 乳 糖 醛 酸 酶 PG 果 胶 酶 以 及 纤 维 素 酶 等 都 会 影 响 果 实 耐 储 性 将 桃 的 反 义ACC 氧 化 酶 基 因 导 入 樱 桃 京 引1 号 基 因 组 中 获 得 了 抗 性 芽 69 利 用 农 杆 菌 介 导 法 将 多 聚 半 乳 糖 醛 酸 酶 PG 反 义 基 因 转 入 中 国 樱 桃 最 终 获 得 了 含 有 PG 反 义 基 因 的 转 基 因 植 株 但 还 需 实 际 鉴 定 果 实 耐 储 性 70 以 上 都 仅 单 转 了 一 种 酶 的 反 义 基 因 这 是 否 能 从 根 本 上 解 决 樱 桃 果 实 耐 储 性 问 题 还 有 待实践验证 遗 传 转 化 研 究 将 对 樱 桃 品 种 改 良 起 到 积 极 推 动 作 用 在 改 良 樱 桃 某 些 性 状 选 育 新 品 种 方 面 具 有 广 阔的应用前景 3 展 望 十 几 年 来 生 物 技 术 在 樱 桃 遗 传 育 种 品 质 改 良 1280 等 樱桃组织培养及遗传转化研究进展 第10 期 上 已 经 取 得 重 大 进 展 目 前 樱 桃 组 织 培 养 及 遗 传 转 化 存 在 的 主 要 问 题 有 1 樱 桃 茎 尖 茎 段 培 养 目 前 仅 停 留 在 实 验 室 培 养 基 的 筛 选 阶 段 而 对 继 代 次 数 瓶 苗 玻 璃 化 现 象 以 及 炼 苗 移 栽 时 对 苗 木 具 体 要 求 的 研 究 甚 少 生 产 上 育 苗 还 未 形 成 程 序 化 2 在 杂 种 胚 培 养 过 程 中 出 现 了 随 继 代 时 间 延 长 胚 培 苗 叶 形 发 生 变 化 杂 交 后 代 遗 传 不 稳 定 性 的 现 象 3 樱 桃 叶 片 再 生 率 低 缺 乏 完 善 的 转 化 体 系 且 遗 传 转 化 主 要 采 用 农 杆 菌 介 导 法 转 化 方 法 单 一 致 使 樱 桃 遗 传 转 化 成 功 事 例 较 少 4 樱 桃 遗 传 转 化 多 以 砧 木 苗 为 试 材 对 品 种 苗 转 基 因 研 究 甚 少 且 结 果 多 以 瓶 苗 为 主 并 未 进行大田移栽 转化结果缺乏实际鉴定 针 对 以 上 出 现 的 问 题 未 来 樱 桃 研 究 应 从 以 下 几 方 面 着 手 第 一 加 强 对 樱 桃 组 织 培 养 过 程 中 光 质 苗 木 玻 璃 化 和 遗 传 分 离 等 问 题 的 研 究 以 期 为 樱 桃 育 种 和 工 厂 化 育 苗 奠 定 基 础 第 二 进 一 步 完 善 樱 桃 外 植 体 再 生 系 统 建 立 高 效 稳 定 且 对 基 因 型 可 较 广 泛 应 用 的 转 化 体 系 提 高 外 植 体 再 生 效 率 第 三 积 极 开 发 或 创 新 更 有 效 的 遗 传 转 化 方 法 并 广 泛 收 集 樱 桃 种 质 资 源 以 便 利 于 筛 选 出 易 再 生 的 基 因 型 进 行 遗 传 转 化 提 高 转 化 效 率 第 四 加 强 樱 桃 目 的 基 因 的 分 离 与 克 隆 研 究 目 前 樱 桃 目 的 基 因 的 转 化 研 究 较 少 如 樱 桃 裂 果 基 因 裂 果 现 象 在 樱 桃 成 熟 期 极 易 发 生 果 实 开 裂 后 易 受 病 虫 害 的 侵 染 严 重 影 响 樱 桃 果 实 品 质 和 贮 藏 是 樱 桃 生 产 中 急 需 解 决 的 问 题 之 一 因 此 如 果 将 樱 桃 的 一 些 优 良 功 能 基 因 分 离 和 克 隆 出 来 将 会 极 大 地 促 进 樱 桃 转 基 因 技 术 的 发展和应用 参考文献 References 1 吴雅琴 赵艳华 程和禾 张 玉星 甜樱桃胚 培养育种 研究进展 J 河北果树 2008 5 1 3 WU Yaqin ZHAO Yanhua CHEN Hehe ZHANG Yuxing Ad vances of research on embryo breeding of sweet cherry J He beiFruits 2008 5 1 3 2 陈 涛 李 良 张 静 黄 智 林 张 洪 伟 刘 胤 陈 清 汤 浩 茹 王 小 蓉 中 国 樱 桃 种 质 资 源 的 考 察 收 集 和 评 价 J 果 树 学 报 2016 33 8 917 933 CHEN Tao LI Liang ZHANG Jin HUANG Zhilin ZHANG Hongwei LIU Yin CHEN Qin TANG Haoru WANG 表4 樱桃的遗传转化 Table4 Genetictransformationofcherry 方法 Method 根癌农杆菌 Agrobacterium tumefaciens 根癌农杆菌 Agrobacterium tumefaciens 根癌农杆菌 Agrobacterium tumefaciens 根癌农杆菌 Agrobacterium tumefaciens 根癌农杆菌 Agrobacterium tumefaciens 根癌农杆菌 Agrobacterium tumefaciens 根癌农杆菌 Agrobacterium tumefaciens 根癌农杆菌 Agrobacterium tumefaciens 根癌农杆菌 Agrobacterium tumefaciens 品种 Cultivar Gisela 6 中国矮樱99 02 Cerasushumilis Bge Sok 99 02 黑樱桃 P serotina 黑樱桃 P serotina 矮化砧木 P pseudocerasusL 砧木98 1 P pseudocerasusL 对樱 P pseudocerasusL 京引1 号 P cerasus 中国樱桃玉珠 P pseudocerasusL 外植体 Explant 叶片 Leaf 叶片 Leaf 叶片 Leaf 叶片 Leaf 茎尖 Stem 叶片 Leaf 叶片 Leaf 叶片 Leaf 叶片 Leaf 目的基因 Targetgene Gus rolC TERMINAL FLOWER1 PsTFL1 AGAMOUS AG 抗菌肽基因 Antibacterial polypeptidegene 抗菌肽基因 Antibacterial polypeptidegene 抗菌肽B 基因 Antibacterial polypeptideBgene 反义ACC 氧化酶基因 AntisenseACC oxidasegene 多聚半乳糖醛酸酶 PG 反义基因 Anti polygalacturonase gene 检测方法 Detectionmethod PCR Southernblot PCR RT PCR gus PCR RT PCR PCR Southernblot Gus Southernblot PCR Southernblot PCR Southernblot PCR km PCR Southernblot 转化结果 Conversion results 转化植株 Transgenicplants 转化植株 Transgenicplants 大田苗 Fieldplants 转化植株 Transgenicplants 转化植株 Transgenicplants 转化植株 Transgenicplants 转化植株 Transgenicplants 转化株系 Transgenicplants 转化株系 Transgenicplants 转化率 Conversion rate 2 20 1 20 0 91 3 09 参考文献 Reference 61 63 64 65 67 32 68 69 70 徐世彦 1281果 树 学 报 第35 卷 Xiaorong Investigation collection and preliminary evaluation of genetic resources of Chinese cherry Cerasus pseudocerasus Lindl G Don J Journal of Fruit Science 2016 33 8 917 933 3 董义虎 杨增海 胡霓云 路广明 毛樱桃茎 尖培养的 初步研究 J 西 北 农 林 科 技 大 学 学 报 自 然 科 学 版 1986 4 2 109 116 DONG Yihu YANG Zenghai HU Niyun LU Guangming Ini tialresearchofshoottipcultureonsourcherry Prunustomento sa J Journal of NorthwestA F University Natural Science Edition 1986 4 2 109 116 4 ANCORA G BENVENUTO E ROSELLI G DONINI B CUOZZO L Micropropagation of cherry roostock F12 1 clones originated from irradiation the isolation of solid mutants J Rivista Di