贝莱斯芽胞杆菌SDTB038与化学药剂协同防治草莓枯萎病的研究_仇月.pdf

37 5 989 996 中国生物防治学报 Chinese Journal of Biological Control 2021 年 10 月 收稿日期 2020 11 19 基金项目 山东省重点研发计划 2019JZZY020608 山东省自然科学基金 ZR2019PC013 作者简介 仇月 硕士研究生 E mail qy18864805897 通信作者 博士 副教授 E mail sdauwhy DOI 10 16409 ki 2095 039x 2021 04 014 贝莱斯芽胞杆菌 SDTB038与化学药剂协同防治 草莓枯萎病的研究 仇 月 孙守民 李鑫荣 杨 帅 王红艳 山东农业大学植物保护学院 泰安 271018 摘要 草莓枯萎病是设施草莓连作种植中的重大病害 本试验通过对前期筛选到的生防菌株进行形态学观 察 生理生化指标和分子生物学检测 将筛选的菌株 SDTB038 鉴定为贝莱斯芽胞杆菌 Bacillus velezensis 采用菌丝生长速率法测定了 8 种化学杀菌剂对草莓枯萎病菌的毒力 其中多菌灵 苯醚甲环唑和肟菌酯室 内毒力较高 菌株 SDTB038 与化学杀菌剂协同防治的盆栽试验表明 药后 21 d 单 施 10 8 cfu mL SDTB038 发酵液对草莓枯萎病的防治效果为 50 66 对该病害具有明显的防控作用 10 8 cfu mL SDTB038 发酵液分 别与 29 mg L 肟菌酯和 20 mg L 苯醚甲环唑混用 对草莓枯萎病的防治效果分别达 62 56 和 74 01 两 组混用组合的协同作用显著 试验结果表明 10 8 cfu mL SDTB038 发酵液能够减少化学药剂的用量 提高 防治效果 推广应用价值大 关 键 词 草莓枯萎病 贝莱斯芽胞杆菌 协同防治 减量施用 中图分类号 S476 文献识别码 A 文章编号 1005 9261 2021 05 0989 08 Synergistic Effects of Bacillus velezensis SDTB038 and Chemical Pesticides on Strawberry Fusarium Wilt QIU Yue SUN Shoumin LI Xinrong YANG Shuai WANG Hongyan College of Plant Protection Shandong Agricultural University Tai an 271018 China Abstract Fusarium wilt is one of the most serious diseases of strawberry An antagonistic strain screened in previous study was identified as Bacillus velezensis according to its morphological and chemical properties and the 16S rRNA and gyrB gene sequences Toxicity of eight chemical fungicides against the pathogen was tested with mycelial growth rate method The results showed that the inhibitory activities of difenoconazole and oxystrobin were higher than those of the fungicides Pot experiment demonstrated that the control efficacy of 10 8 cfu mL SDTB038 fermentation broth on strawberry Fusarium wilt was 50 66 after 21 days of application 10 8 cfu mL SDTB038 fermentation broth mixed with 29 mg L oxystrobin and 20 mg L difenoconazole had high control effect on the disease with the efficacies of 62 56 and 74 01 respectively In summary the combined use of fermentation broth and chemical fungicides could reduce the application amount of chemical fungicides improve the control efficacy which has the great potential to be applied for the disease control Key words strawberry Fusarium wilt Bacillus velezensis synergistic control reduced dose application 我国草莓栽培面积大 总产量高 1 近年来 随着草莓的种植面积 逐渐扩大 草莓枯萎病等病害危害 加重 草莓枯萎病是由尖孢镰刀菌 Fusarium oxysporum f sp fragariae 专化型侵染维管束而导致的系统性土 传病害 2 在苗期或开花至收获期发病 镰刀菌的防治策略通常依赖于培育无病植株和施用土壤熏蒸剂 990 中 国 生 物 防 治 学 报 第 37 卷 但是 培育无病植株费时费力 土壤熏蒸成本较高且常造成环境破坏等问题 化学杀菌剂对草莓枯萎病防 效较高 但常伴随着环境污染 食品安全等问题 3 植物根际促生菌 plant growth promoting rhizobacteria PGPR 被认为能够有效减少化学肥料投入 4 改 善土壤质量并增加农作物产量 5 目前 已经有许多生防菌被报道 如苏云金芽胞杆菌 Bacillus thuringiensis 6 解淀粉芽胞杆菌 Bacillus amyloliquefaciens 7 甲基营养型芽胞杆菌 Bacillus methylotrophicus 8 枯草芽胞杆 菌 Bacillus subtilis 9 和多粘类芽胞杆菌 Paenibacillus polymyxa 10 生防制剂由于其环保 安全 方便的特点 逐渐被广大农民接受 与化学药剂协同使用也具有广泛的应用前景 生物防治符合我国植物病虫害绿色防 控的理念 为植物病害防治提供了新方向 贝莱斯芽胞杆菌 Bacillus velezensis 作为一类重要的生物防治资源 11 可以产生次生代谢产物 对多种 真菌和细菌有较高的抑制活性 在农业生产中具有广阔的市场前景 12 目前 尚无贝莱斯芽胞杆菌防治草 莓枯萎病的相关报道及产品登记 本研究采用课题组分离的贝莱斯芽胞杆菌 与化学药剂联合使用 验证 其协同防治效果 评价生防菌 SDTB038 对草莓枯萎病的防控效果 研究结果将为利用贝莱斯芽胞杆菌防 治植物病害和后续微生态制剂的制备奠定理论基础 同时为生物防治提供技术支撑 1 材料与方法 1 1 试验材料 多菌灵 己唑醇 吡唑醚菌酯 苯醚甲环唑 百菌清 肟菌酯 嘧霉胺和氟醚菌酰胺原药由山东农业 大学农药环境毒理研究中心提供 草莓枯萎病病原菌尖孢镰刀菌专化型 2 菌株 SDTB038 由山东农业大学 农药毒理与应用技术实验室提供 PDA 培养基 200 g 马铃薯 20 g 葡萄糖 20 g 琼脂和 1 L 去离子水 121 灭菌 30 min LB 培养基 1 L 去离子水 10 g 胰蛋白胨 10 g NaCl 5 g 酵母粉 20 g 琼脂粉 121 灭菌 30 min 盆栽试验所用草莓品种为妙香 由泰安市岱岳区房村镇种苗供货商提供 1 2 菌株 SDTB038 的鉴定 形态学鉴定 观察菌株 SDTB038 在 LB 培养基中的形态特征 使用透射电镜 JEM 1400 plus 拍照观察 SDTB038 细胞形态 生理生化鉴定 参考 常见细菌系统鉴定手册 13 的方法 测试的生理生化指标包括革兰氏染色 对 不同种类碳源 氮源能否单一利用 硝酸盐还原反应 甲基红反应 V P 反应等 试验试剂由南京诺唯赞 生物科技有限公司 Nanjing Vazyme Biotech Co Ltd 提供 分子生物学鉴定 使用引物扩增菌株 SDTB038 的 16S rRNA 和 gyrB 基因序列 14 交由生工生物工程 上海 股份有限公司 Angon Biotech Shanghai Co Ltd 测序 测序结果通过 NCBI 数据库进行比对 并用 MEGA 7 0 软件采用邻接法构建系统发育树 1 3 菌株 SDTB038 平皿对峙试验 采用平板对峙法 12 测定菌株 SDTB038 对草莓枯萎病菌的抑菌效果 将培养 5 d 的草莓枯萎病菌用打 孔器打取菌饼 放置于培养皿中央 将 1 L 10 8 cfu mL 菌液接种于菌饼两侧 25 黑暗培养 5 d 后观察 试验结果 1 4 室内毒力测定试验 采用菌丝生长速率法 15 测定杀菌剂对草莓枯萎病菌的室内毒力 药剂设计以下浓度梯度 表 1 所 选药剂除多菌灵用少量乙酸溶解外 其他药剂均用少量丙酮溶解 然后用灭菌水配制成 1 10 4 mg L 母液 备用 并设置溶剂对照 25 黑暗条件下倒置培养 5 d 后观察试验结果 生长抑制率 对照菌落 直径 处理菌落直径 对照菌落直径 菌饼直径 100 1 5 生防菌和化学药剂对病原菌菌丝形态的影响 参照 1 3 的方法 将病原菌在 PDA 平板对峙培养 5 d 从距离 SDTB038 最近的边缘部位用无菌刀片切 取长为 5 mm 的菌块 参照 1 4 的方法分别制作含肟菌酯和苯醚甲环唑的 PDA 平板 倒置培养 5 d 后 用 无菌刀片从菌落边缘切取长为 5 mm 的菌块 样品经戊二醛和乙酸双重固定 乙醇系列脱水 并用离子溅 射镀金后放入观察仓进行观察 第 5 期 仇月等 贝莱斯芽胞杆菌 SDTB038 与化学药剂协同防治草莓枯萎病的研究 991 表 1 药剂浓度设置 Table 1 Pesticide concentration settings 原药 Original drug 含量 Content 有效成分设计浓度 Design concentration of active ingredient 多菌灵 carbendazim 98 00 0 05 0 1 0 2 0 4 0 8 1 6 mg L 己唑醇 hexaconazole 95 40 0 5 1 0 2 0 4 0 8 0 16 0 mg L 吡唑醚菌酯 pyraclostrobin 97 00 0 5 1 0 2 0 4 0 8 0 16 0 mg L 苯醚甲环唑 difenoconazole 96 80 0 05 0 1 0 2 0 4 0 8 1 6 mg L 百菌清 chlorothalonil 75 00 0 5 1 0 2 0 4 0 8 0 16 0 mg L 肟菌酯 oxystrobin 97 50 0 25 0 5 1 0 2 0 4 0 8 0 mg L 嘧霉胺 pyrimethanil 98 00 5 10 20 40 60 80 mg L 氟醚菌酰胺 fluopimomide 98 00 5 10 20 40 60 80 mg L 1 6 贝莱斯芽胞杆菌 SDTB038 与化学药剂相容性试验 制成含有肟菌酯和苯醚甲环唑的 LB 平板 肟菌酯的浓度设置为 10 30 60 和 90 mg L 苯醚甲环唑 的浓度设置为 25 50 75 和 100 mg L 挑取 SDTB038 单菌落于液体 LB 培养基中恒温过夜培养获得种子 液 将种子液以 1 的接种量接种于液体 LB 中 35 180 r min 振荡培养 12 h 用灭菌 LB 将发酵液浓 度稀释到 10 6 每个含药平板涂布 100 L 稀释后的发酵液 以不含药剂的 LB 平板作空白对照 以含氨苄 的 LB 平板作药剂对照 每个处理设 3 个重复 在 35 恒温培养箱中培养 12 h 记录单菌落数 1 7 贝莱斯芽胞杆菌 SDTB038 与药剂混用协同防治草莓枯萎病 将健康的 长势一致的 2 叶 1 心的草莓幼苗移栽于盛有 121 高压灭菌 30 min 的无菌土的 150 mm 130 mm 花盆中 每盆 1 棵草莓苗 试验共设 8 个处理 A 80 多菌灵可湿性粉剂作为药剂对照 无菌水 配制成 350 mg L 每株喷施 10 mL B SDTB038 发酵液 10 8 cfu mL 每株灌根处理 30 mL C 40 的苯醚 甲环唑悬浮剂 无菌水配制成 20 mg L 每株喷施 10 mL D 40 的苯醚甲环唑悬浮剂 无菌水配制成 40 mg L 每株喷施 10 mL E 20 mg L 苯醚甲环唑 每株喷施 10 mL 并使用 30 mL SDTB038 发酵液 10 8 cfu mL 灌根 F 50 的肟菌酯水分散粒剂 无菌水配制成 29 mg L 每株喷施 10 mL G 50 的肟菌酯水分散粒剂 无菌水配制成 42 mg L 每株喷施 10 mL H 29 mg L 肟菌酯 每株喷 10 mL 并使用 30 mL SDTB038 发 酵液 10 8 cfu mL 灌根 发酵液施用方法为灌根处理 SDTB038 菌液浓度为 10 8 cfu mL 化学药剂在灌根后 进行喷雾处理 着重喷施根茎部位 每个处理设 5 个重复 以灭菌水处理作为阴性对照 草莓枯萎病的病 情分级标准以叶片为单位 分为 5 级 15 0 级 无症状 1 级 病株有 1 4 以下的叶片出现萎蔫状 2 级 有 1 4 1 2 的叶片出现萎蔫状 3 级 有 1 2 以上的叶片出现萎蔫状 4 级 病株死亡或接近死亡 分别于 药后处理 7 14 和 21 d 调查病情指数并计算防治效果 病情指数 各级病叶数 代表数值 调查总 叶数 最高病级值 100 防治效果 对照病情指数 处理病情指数 对照病情指数 100 1 8 数据统计与分析 利用 SPSS 和 Excel 软件 采用 Duncan 氏新复极差法进行差异显著性检验 2 结果与分析 2 1 菌株 SDTB038 的鉴定 菌株 SDTB038 的菌落在 LB 培养基上 图 1 呈乳白色 凸起 且有规则的边缘 生理生化结果 表 2 显示菌株 SDTB038 为革兰氏阳性细菌 不 能够利用丙二酸 不能够产生硫化氢气体和荧光色 素 透射电镜 图 2 结果显示 SDTB038 细胞为杆 状 有厚厚的荚膜 且周生鞭毛 根据形态学及生 理生化特征 对照细菌鉴定手册和相关文献 初步 将菌株 SDTB038 鉴定为芽胞杆菌 12 16 图 1 菌株 SDTB038 菌落形态 Fig 1 Colony morphology of strain SDTB038 992 中 国 生 物 防 治 学 报 第 37 卷 表 2 菌株 SDTB038 生理生化指标 Table 2 Physiological and biochemical indexes of strain SDTB038 项目指标 Project indicators 结果 Result 项目指标 Project indicators 结果 Result 革兰氏染色 Gram stain 厌氧生长 Anaerobic growth 甲基红 Methyl red 硝酸盐还原 Nitrate reduction V P 测定 Voges Proskauer test 明胶水解 Gelatin liquefaction 吲哚试验 Indole test 脓青素 Pyocyanin 柠檬酸利用 Citric acid utilization 丙二酸利用率 Malonate utilization 接触酶 Contact enzyme 硫化氢气体 Hydrogen sulfide gas 淀粉水解 Amylohydrolysis test 荧光色素产生 Fluorescent pigment production 注 表示阳性 表示阴性 Note indicated positive indicated negative 图 2 25000 透射电镜菌株 SDTB038 细胞形态 Fig 2 The morphology of strain SDTB038 cell in 25000 transmission electron microscope 菌株 SDTB038 的 16S rRNA 图 3 和 gyrB 图 4 基因系统发育树结果显示 SDTB038 与贝莱斯芽 胞杆菌有 90 以上一致性 通过上述试验结果 将 菌株 SDTB038 鉴定为贝莱斯芽胞杆菌 2 2 贝莱斯芽胞杆菌 SDTB038 的抑菌效果 贝莱斯芽胞杆菌 SDTB038 对草莓枯萎病菌有 抑制作用 图 5 2 3 室内毒力测定试验 8 种不同作用机制杀菌剂对草莓枯萎病菌毒力 测定结果 表 3 表明 多菌灵 己唑醇 吡唑醚 图 3 菌株 SDTB038 的 16S rRNA 基因系统发育树 Fig 3 The phylogenetic tree of strain SDTB038 16S rRNA sequence 菌酯 苯醚甲环唑 百菌清 肟菌酯 嘧霉胺和氟醚菌酰胺的 EC 50 值分别为 0 133 4 373 6 729 0 639 3 512 1 949 22 570 和 18 137 mg L 其中多菌灵 苯醚甲环唑和肟菌酯的毒力更高 应为备选的高效 药剂 2 4 生防菌和化学药剂对病原菌菌丝形态的影响 从图 6 可以看出 SDTB038 处理后的草莓枯萎病菌的菌丝表面有大量细菌包被 图 6B 病原菌生 长受到明显的抑制 肟菌酯处理后的菌丝表面有明显的凹陷 图 6C 苯醚甲环唑处理后的菌丝在形态 上发生分支 图 6D 第 5 期 仇月等 贝莱斯芽胞杆菌 SDTB038 与化学药剂协同防治草莓枯萎病的研究 993 SDTB038 B velezensis BCRC 17467 DQ903176 B mojavensis BCRC 17531 DQ309303 B subtilis DY3 KY315728 B sonorensis KLBC GS 3 MN718425 B axarquiensis GS3 JQ966541 B malacitensis T 17 KP203811 B atrophaeus BCRC 17530 DQ309302 B stratosphericus MCCC 1A08156 JX680215 B altitudinis MTCC 7304 KM055075 B safensis MCCC 1A08155 JX680211 B cereus IMSNU 11014 AY265513 B thuringiensis KS KC737849 B pumilus SB6 KR092180 B amyloliquefaciens SS ZC 26 MN262479 73 79 98 99 96 86 0 50 图 4 菌株 SDTB038 的 gyrB 基因系统发育树 Fig 4 The phylogenetic tree of strain SDTB038 gyrB gene sequence AB A SDTB038 拮抗草莓枯萎病菌 SDTB038 against F oxysporum B 对照组病原菌 CK 图 5 菌株 SDTB038 对草莓枯萎病菌的抑制效果 Fig 5 Inhibitory effect of the strain SDTB038 on F oxysporum 表 3 杀菌剂对草莓枯萎病的室内毒力 Table 3 Indoor toxicity of fungicides against F oxysporum 杀菌剂 Fungicide 回归方程 Regression equation 相关系数 Correlation coefficient EC 50 mg L 95 置信区间 Confidence interval mg L 多菌灵 Carbendazim Y 0 676X 0 591 0 902 0 133 0 032 0 431 己唑醇 Hexaconazole Y 0 529X 0 339 0 970 4 373 1 214 10 753 吡唑醚菌酯 Pyraclostrobin Y 0 423X 0 350 0 963 6 729 1 420 16 233 苯醚甲环唑 Difenoconazole Y 0 577X 0 111 0 949 0 639 0 174 2 344 百菌清 Chlorothalonil Y 0 644X 0 351 0 962 3 512 0 858 14 286 肟菌酯 Oxystrobin Y 0 476X 0 138 0 937 1 949 0 447 6 829 嘧霉胺 Pyrimethanil Y 1 074X 1 454 0 964 22 570 10 351 55 328 氟醚菌酰胺 Fluopimomide Y 1 578X 1 986 0 987 18 137 10 137 31 140 A 对照组真菌 CK B 经 SDTB038 处理的草莓枯萎病菌 SDTB038 against F oxysporum C 经肟菌酯处理的草莓枯萎病菌 Trifloxystrobin against F oxysporum D 经苯醚甲环唑处理的草莓枯萎病菌 Difenoconazole against F oxysporum 图 6 20000 倍扫描电镜图 Fig 6 20000 scanning electron microscope 994 中 国 生 物 防 治 学 报 第 37 卷 2 5 相容性试验 相容性试验结果 表 4 表明 贝莱斯芽胞杆菌 SDTB038 分别能够在 10 30 60 90 mg L 肟菌酯和 25 50 75 100 mg L 苯醚甲环唑的含药平板上正常生长 含药平板中的菌落数目与空白对照相比没有明 显差异 且菌落生长形态与对照生长一致 表 4 菌株 SDTB038 与化学药剂相容性试验 Table 4 Compatibility test of strain SDTB038 and chemical pesticides 处理 Treatment SDTB038 的菌落数 The number of colonies of SDTB038 10 7 cfu mL 处理 Treatment SDTB038 的菌落数 The number of colonies of SDTB038 10 7 cfu mL 0 05 mg L 氨苄 Ampicillin 0 00 0 00 b 对照 CK 621 67 17 34 a 10 mg L 肟菌酯 Oxystrobin 638 00 35 50 a 25 mg L 苯醚甲环唑 Difenoconazole 553 33 7 84 a 30 mg L 肟菌酯 Oxystrobin 633 00 41 36 a 50 mg L 苯醚甲环唑 Difenoconazole 604 00 29 37 a 60 mg L 肟菌酯 Oxystrobin 603 33 18 02 a 75 mg L 苯醚甲环唑 Difenoconazole 586 67 34 69 a 90 mg L 肟菌酯 Oxystrobin 587 00 16 77 a 100 mg L 苯醚甲环唑 Difenoconazole 597 33 21 15 a 2 6 贝莱斯芽胞杆菌 SDTB038 与化学药剂协同防治草莓枯萎病的温室试验 表 5 结果表明 化学杀菌剂苯醚甲环唑 肟菌酯分别与贝莱斯芽胞杆菌 SDTB038 联用对草莓枯萎病有 较好的防治效果 施药后 7 d SDTB038 发酵液处理的防效最低 仅为 13 38 单独使用化学杀菌剂 40 mg L 苯醚甲环唑的防效最高 为 56 36 其次为 20 mg L 苯醚甲环唑与生防菌发酵液联用的防效 为 51 17 并与对照药剂 350 mg L 多菌灵处理 49 79 的防效相当 再次分别为 42 mg L 肟菌酯处理 43 01 的防 效及 29 mg L 肟菌酯与生防菌发酵液联用 40 94 的防效 P 0 05 药后 14 d 所有处理的防效均继续提高 其中防效最高的处理为施用 40 mg L 苯醚甲环唑处理的防效 以及 20 mg L 苯醚甲环唑与生防菌发酵液联用处理的防效 分别为 70 52 和 69 48 两处理防效相当 且显著高于多菌灵处理的防效 42 mg L 肟菌酯处理的防效及 29 mg L 肟菌酯与生防菌发酵液联用的防效 均与对照药剂多菌灵处理的防效相当 P 0 05 药后 21 d 两种杀菌剂与生防菌联用处理的防效仍有明显提高 持效性较好 20 mg L 苯醚甲环唑与 生防菌联用的防效达 74 01 29 mg L 肟菌酯与生防菌发酵液联用的防效为 62 5 均显著高于对照药剂 多菌灵的防效 P 0 05 表 5 贝莱斯芽胞杆菌 SDTB038 与化学药剂协同防治草莓枯萎病的温室试验防治效果 Table 5 Effect of the combination of Fungicide and Bacillus velezensis SDTB038 10 8 cfu mL on strawberry Fusarium wilt in greenhouse 药后 7 d 药后 14 d 药后 21 d 处理 Treatment 病情指数 Disease index 防治效果 Control effect 病情指数 Disease index 防治效果 Control effect 病情指数 Disease index 防治效果 Control effect 阴性对照 CK 39 69 63 33 75 67 80 多菌灵 Carbendazim 350 mg L 19 93 49 79 b 23 33 63 16 bc 34 00 55 07 d SDTB038 10 8 cfu mL 34 38 13 38 g 36 67 42 10 d 37 33 50 67 e 40 苯醚甲环唑 Difenoconazole 20 mg L 25 94 35 17 e 33 67 46 83 d 30 67 59 47 c 40 苯醚甲环唑 Difenoconazole 40 mg L 17 32 56 36 a 19 33 69 48 a 13 00 82 82 a 40 苯醚甲环唑 Difenoconazole 20 mg L SDTB038 10 8 cfu mL 19 38 51 17 b 18 67 70 52 a 19 67 74 01 b 50 肟菌酯 Oxystrobin 29 mg L 29 06 26 78 f 33 67 46 83 d 40 67 46 25 f 50 肟菌酯 Oxystrobin 42 mg L 22 62 43 01 c 21 33 66 32 ab 18 33 75 77 b 50 肟菌酯 Oxystrobin 29 mg L SDTB038 10 8 cfu mL 23 44 40 94 d 26 33 58 42 c 28 33 62 56 c 第 5 期 仇月等 贝莱斯芽胞杆菌 SDTB038 与化学药剂协同防治草莓枯萎病的研究 995 3 讨论 芽胞杆菌是一种重要的生物资源 是最广泛使用的生物防治剂之一 其生防机理主要有抗生 竞争 促生及诱导抗性 ISR 等 17 本试验通过形态观察 生理生化试验和分子鉴定手段将实验室前期分离得 到的菌株 SDTB038 鉴定为贝莱斯芽胞杆菌 贝莱斯芽胞杆菌是一种环境友好的拮抗芽胞杆菌 由于其能 促进植物生长 有效抑制农业生产中的多种植物病原菌 防治疫霉菌 茄子根瘤菌和尖镰孢菌等引起的植 物病害 已被广泛应用于生物防治 18 王雨等 19 报道了贝莱斯芽胞杆菌 HN 2 对杧果炭疽菌有较好抑菌作 用的 李生樟等 20 分离鉴定了贝莱斯芽胞杆菌 504 对黄单胞菌属的细菌具有较好的抑菌活性 王伟等 21 报道菌株 X 75 对番茄灰霉病菌灰葡萄孢菌具有明显的拮抗作用 本研究不仅测定了贝莱斯芽胞杆菌 SDTB038 对草莓枯萎病菌的抑菌活性 还测定了 SDTB038 与化学药剂联合施用的盆栽防治效果 结果显 示 SDTB038 菌株在草莓枯萎病防治中具有良好的应用前景 生物防治对人畜安全 环境友好且不易引发抗药性 21 22 受到国内外学者关注 但因其田间效果不稳 定 药效发挥慢 田间防效差等不足严重制约了生防制剂的推广应用 23 24 研究表明 化学药剂能帮助生 防菌克服包括病原菌在内的习居微生物的排斥作用 利于其在土壤中顺利定殖生存进而成为优势种群 从 而发挥生物防治作用 25 27 本研究通过室内毒力测定从 8 种化学药剂中筛选出了抑菌效果良好的苯醚甲环 唑和肟菌酯 且生物相容性试验结果显示 SDTB038 与苯醚甲环唑 肟菌酯相容性较好 SDTB038 在药 剂含量为 100 mg L 的平板上仍能正常生长 盆栽试验结果表明 药后 21 d 29 mg L 肟菌酯与 SDTB038 协同防治效果为 62 56 20 mg L 苯醚甲环唑与 SDTB038 协同防治效果为 74 01 显著高于生防菌及同 剂量化学药剂单独施用的防治效果 与 42 mg L 肟菌酯 40 mg L 苯醚甲环唑的防治效果 75 77 和 82 82 相近 目前 已有报道证实解淀粉芽胞杆菌与氟啶胺复配对草莓灰霉病的防效达 70 21 25 枯草芽胞杆 菌与吡唑醚菌酯混用对草莓枯萎病的防效为 72 42 92 11 28 但关于贝莱斯芽胞杆菌与化学药剂联合 施用的报道较少 因此 探索 SDTB038 与化学药剂协同防治草莓枯萎病具有重要意义 本研究证实贝莱斯芽胞杆菌 SDTB038 发酵液与化学药剂联用对草莓枯萎病有较好的防治效果 能够 减少化学药剂肟菌酯和苯醚甲环唑的用量 也会显著降低化学农药在草莓上的残留量 对草莓绿色生产中 降低农药残留量 保护农业生态环境 实现健康栽培和保障农产品质量安全意义重大 但本试验仅在盆栽 试验中进行了防效验证 其实际防治效果仍需要进行田间试验 贝莱斯芽胞杆菌 SDTB038 具有较高的研 究和应用价值 有潜力将其开发为一种生物农药或微生态制剂 本研究将为防治植物病害和后续微生态制 剂的制备奠定理论基础 同时为生物防治提供技术支撑 参 考 文 献 1 陈道 丁新伦 张洁 等 福建省六种草莓病毒的分子检测 J 植物保护学报 2018 45 6 1433 1434 2 姜莉莉 王红艳 夏晓明 等 草莓枯萎病菌抗戊唑醇突变体 ZY W 的生理生化特性 J 农药学学报 2012 14 1 42 50 3 林琪童 杨丽荣 夏明聪 等 小麦茎基腐病生防菌株 YB 161 的分离鉴定及防效测定 J 植物保护学报 2020 47 4 939 948 4 孙韵雅 陈佳 王悦 等 根际促生菌促生机理及其增强植物抗逆性研究进展 J 草地学报 2020 28 5 1203 1215 5 Ma M Jiang X Wang Q et al Isolation and identification of PGPR strain and its effect on soybean growth and soil bacterial community composition J International Journal of Agriculture and Biology 2018 20 6 1289 1297 6 刘华梅 胡虓 王应龙 等 对草地贪夜蛾高毒力的苏云金杆菌菌株筛选 J 中国生物防治学报 2019 35 5 721 728 7 王宝 杨扬 蔡吉苗 等 内生解淀粉芽胞杆菌 BEB33 脂肽类化合物分析及对香蕉枯萎病菌拮抗作用研究 J 中国生物防治学报 2019 35 5 785 792 8 Cheng X Ji X Ge Y et al Characterization of antagonistic Bacillus methylotrophicus isolated from rhizosphere and its biocontrol effects on maize stalk rot J Phytopathology 2018 109 4 571 581 9 武君洁 吴毅歆 何鹏搏 等 枯草芽胞杆菌 YN2014090 悬浮剂的研制 J 中国生物防治学报 2019 35 5 777 784 10 黄艺烁 谢学文 石延霞 等 多粘类芽胞杆菌 ZF197 对白菜茎基腐病防治效果 J 园艺学报 2020 47 6 1059 1071 11 何伟 罗文芳 许建军 等 贝莱斯芽胞杆菌 JTB8 2 的筛选 鉴定及其对瓜列当拮抗作用研究 J 中国生物防治学报 2020 36 5 786 794 996 中 国 生 物 防 治 学 报 第 37 卷 12 赵昱榕 李磊 谢学文 等 贝莱斯芽胞杆菌 ZF2 对多主棒孢病菌防治效果 J 中国生物防治学报 2019 35 2 217 225 13 东秀珠 蔡妙英 常见细菌系统鉴定手册 M 北京 科学出版社 2001 14 张琼 Zabihullah S 唐灿明 贝莱斯芽孢杆菌 SZAD1 对大丽轮枝菌的生物防治效果 J 棉花学报 2020 32 4 329 338 15 顾春波 史晓斌 姜莉莉 等 草莓枯萎病菌对多菌灵的抗性及其抗性菌株生物学特性 J 植物保护学报 2010 37 3 266 272 16 沙月霞 曾庆超 王昕 等 防治稻瘟病芽胞杆菌的筛选及效果评价 J 中国生物防治学报 2018 34 3 414 422 17 许帅 谢学文 张昀 等 马铃薯枯萎病生防芽胞杆菌筛选及生防效果研究 J 中国生物防治学报 2020 36 5 761 770 18 Wang C Zhao D Qi G et al Effects of Bacillus velezensis FKM10 for promoting the growth of Malus hupehensis Rehd and inhibiting Fusarium verticillioides J Frontiers in Microbiology 2020 10 2889 19 王雨 谭峥 韦丹丹 等 贝莱斯芽胞杆菌 HN 2 的鉴定及对杧果炭疽菌的抑菌活性研究 J 中国生物防治学报 2020 36 2 220 230 20 李生樟 陈颖 杨瑞环 等 一株拮抗黄单胞菌的贝莱斯芽孢杆菌的分离和鉴定 J 微生物学报 2019 59 10 1969 1983 21 冶福春 马文林 杨晓龙 枯草芽胞杆菌 Qh 618 对燕麦叶斑病防治效果研究 J 中国生物防治学报 2021 37 4 785 795 22 张涛 李雪艳 杨红梅 等 4 株拮抗细菌对棉花黄萎病的防治效果及机制 J 中国生物防治学报 2018 34 6 882 889 23 张德涛 彭正凯 曹琦琦 等 3 株拮抗菌在水稻植株上的定殖能力及对纹枯病的防效 J 西北农林科技大学学报 自然科学版 2012 40 2 97 102 24 陈雪