基于叶绿素荧光参数评估蝴蝶兰的组织培养潜力.pdf

第 5 1 卷 第 2 期 2 0 2 2 年 4 月 V o l 5 1 N o 2 A p r 2 0 2 2 上 海 师 范 大 学 学 报 自 然 科 学 版 J o u r n a l o f S h a n g h a i N o r m a l U n i v e r s i t y N a t u r a l S c i e n c e s 基 于 叶 绿 素 荧 光 参 数 评 估 蝴 蝶 兰 的 组 织 培 养 潜 力 朱 珈 叶 1 李 丹 丹 1 陈 倩 1 印 丽 萍 2 郭 水 良 1 1 上 海 师 范 大 学 生 命 科 学 学 院 上 海 2 0 0 2 3 4 2 上 海 出 入 境 检 验 检 疫 局 上 海 2 0 0 3 1 5 摘 要 以 蝴 蝶 兰 P h a l a e n o p s i s a p h r o d i t e R c H b F 的 大 辣 椒 品 种 为 对 象 研 究 了 不 同 高 温 胁 迫 处 理 时 间 下 的 蝴 蝶 兰 形 态 叶 绿 素 荧 光 参 数 变 化 并 对 处 理 过 的 蝴 蝶 兰 材 料 进 行 了 组 织 培 养 结 果 发 现 当 蝴 蝶 兰 大 辣 椒 品 种 茎 段 的 P S 最 大 光 化 学 量 子 产 量 F v F m 低 于 0 3 5 时 其 无 法 作 为 外 植 体 进 行 组 织 培 养 与 蝴 蝶 兰 叶 片 相 比 茎 段 的 F v F m 更 能 够 指 示 蝴 蝶 兰 组 织 培 养 的 成 功 概 率 关 键 词 蝴 蝶 兰 茎 段 叶 片 P S 最 大 光 化 学 量 子 产 量 F v F m 组 织 培 养 中 图 分 类 号 Q 9 4 5 文 献 标 志 码 A 文 章 编 号 1 0 0 0 5 1 3 7 2 0 2 2 0 2 0 2 5 1 0 6 PotentialevaluationofinvitrotissuecultureforPhalaenopsisaphrodite byusingchlorophyllfluorescenceparameters Z H U J i a y e 1 L I D a n d a n 1 C H E N Q i a n 1 Y I N L i p i n g 2 G U O S h u i l i a n g 1 1 C o l l e g e o f L i f e S c i e n c e s S h a n g h a i N o r m a l U n i v e r s i t y S h a n g h a i 2 0 0 2 3 4 C h i n a 2 S h a n g h a i E n t r y E x i t I n s p e c t i o n a n d Q u a r a n t i n e B u r e a u S h a n g h a i 2 0 0 3 1 5 C h i n a Abstract D a l a j i a o i s a c o m m o n v a r i e t y o f P h a l a e n o p s i s a p h r o d i t e T h e i n d i v i d u a l s o f t h e v a r i e t y w e r e c u l t u r e d a t a h i g h t e m p e r a t u r e o f 3 5 1 4 h l i g h t d w i t h d i f f e r e n t d u r a t i o n s T h r o u g h o u t t h e t r e a t m e n t t h e i r m o r p h o l o g i c a l c h a n g e s w e r e o b s e r v e d a n d t h e c h l o r o p h y l l f l u o r e s c e n c e p a r a m e t e r s i n c l u d i n g t h e m a x i m u m q u a n t u m e f f i c i e n c y o f p h o t o s y s t e m I I P S p h o t o c h e m i s t r y F v F m e l e c t r o n t r a n s f e r r a t e u n d e r d i f f e r e n t l i g h t i n t e n s i t i e s w e r e d e t e r m i n e d T h e i r c o r r e s p o n d i n g e x p l a n t s w e r e c u l t u r e d i n v i t r o t o e v a l u a t e t h e p o t e n t i a l f o r s u c c e s s f u l r e p r o d u c t i o n i n v i t r o W e f o u n d t h a t t h e r e e x i s t e d a p o s i t i v e c o r r e l a t i o n b e t w e e n F v F m o f t h e s t e m s a n d t h e s u c c e s s f u l r a t e o f t i s s u e c u l t u r e i n v i t r o w i t h c o r r e s p o n d i n g s t e m s W h e n F v F m o f s t e m s w a s l e s s t h a n o r e q u a l t o 0 3 5 t h e s t e m s w e r e u n a b l e t o b e c u l t u r e d i n v i t r o b e c a u s e o f l a c k i n g v i t a l i t y T h e F v F m o f t h e s t e m s i s b e t t e r t h a n t h a t o f t h e D O I 1 0 3 9 6 9 J I S S N 1 0 0 0 5 1 3 7 2 0 2 2 0 2 0 1 7 收 稿 日 期 2 0 2 1 0 3 2 6 基 金 项 目 珍 贵 动 植 物 种 质 活 性 鉴 别 及 溯 源 技 术 研 究 项 目 2 0 1 7 Y F F 0 2 1 0 3 0 3 作 者 简 介 朱 珈 叶 1 9 9 8 女 硕 士 研 究 生 主 要 从 事 植 物 生 态 学 等 方 面 的 研 究 E m a i l 3 5 1 3 6 8 8 1 7 q q c o m 通 信 作 者 郭 水 良 1 9 6 4 男 教 授 主 要 从 事 植 物 生 态 学 资 源 植 物 学 等 方 面 的 研 究 E m a i l g s g s h n u e d u c n 引 用 格 式 朱 珈 叶 李 丹 丹 陈 倩 等 基 于 叶 绿 素 荧 光 参 数 评 估 蝴 蝶 兰 的 组 织 培 养 潜 力 J 上 海 师 范 大 学 学 报 自 然 科 学 版 2 0 2 2 5 1 2 2 5 1 2 5 6 Citation format Z H U J Y L I D D C H E N Q e t a l P o t e n t i a l e v a l u a t i o n o f i n v i t r o t i s s u e c u l t u r e f o r P h a l a e n o p s i s a p h r o d i t e b y u s i n g c h l o r o p h y l l f l u o r e s c e n c e p a r a m e t e r s J J o u r n a l o f S h a n g h a i N o r m a l U n i v e r s i t y N a t u r a l S c i e n c e s 2 0 2 2 5 1 2 2 5 1 2 5 6 2 0 2 2 年 上 海 师 范 大 学 学 报 自 然 科 学 版 J S h a n g h a i N o r m a l U n i v N a t S c i l e a v e s i n i n d i c a t i n g t h e i r p o t e n t i a l a s e x p l a n t s f o r t i s s u e c u l t u r e i n v i t r o Keywords P h a l a e n o p s i s a p h r o d i t e s t e m l e a f p h o t o s y s t e m P S p h o t o c h e m i s t r y F v F m t i s s u e c u l t u r e i n v i t r o 蝴 蝶 兰 P h a l a e n o p s i s a p h r o d i t e R c H b F 是 兰 科 附 生 单 茎 性 植 物 1 由 于 其 形 态 和 结 构 上 均 与 众 不 同 且 外 形 具 有 娥 蝶 般 的 美 丽 故 以 蝴 蝶 兰 来 命 名 2 蝴 蝶 兰 为 多 年 生 常 绿 草 本 是 热 带 亚 热 带 气 生 兰 中 国 云 南 南 部 西 藏 南 部 广 东 南 部 海 南 及 台 湾 为 该 属 植 物 的 自 然 分 布 的 北 界 3 蝴 蝶 兰 在 国 内 外 鲜 花 市 场 上 深 受 欢 迎 具 有 很 高 的 观 赏 价 值 和 经 济 价 值 4 随 着 兰 花 种 植 业 的 发 展 蝴 蝶 兰 的 组 织 培 养 发 展 迅 速 早 在 1 9 4 9 年 人 们 利 用 蝴 蝶 兰 花 梗 腋 芽 成 功 地 进 行 了 组 织 培 养 5 正 式 提 出 了 一 种 蝴 蝶 兰 属 植 物 营 养 繁 殖 的 方 法 实 现 了 蝴 蝶 兰 试 管 繁 殖 蝴 蝶 兰 的 茎 尖 6 茎 段 和 幼 叶 7 9 花 梗 腋 芽 5 1 0 1 1 花 梗 节 间 根 尖 1 2 等 部 位 都 可 做 离 体 组 织 培 养 的 外 植 体 但 是 叶 片 的 诱 导 成 功 率 很 低 7 蝴 蝶 兰 不 同 外 植 体 的 成 活 率 有 差 异 其 中 花 梗 侧 芽 的 成 活 率 最 高 达 7 5 0 其 次 为 花 梗 成 活 率 为 6 2 5 叶 片 和 根 尖 最 差 分 别 为 1 2 5 和 7 5 1 3 1 5 蝴 蝶 兰 组 培 的 基 本 培 养 基 包 括 M u r a s h i g e a n d S k o o g M S 培 养 基 1 2 M S 培 养 基 V a c i n a n d W e n t V W 兰 科 植 物 培 养 基 G a m b o r g s B 5 培 养 基 K n u d s o n C K C 培 养 基 K y o t o s o 1 u t i o n 花 肥 培 养 基 花 宝 及 其 改 良 型 等 1 6 1 9 但 不 同 品 种 的 蝴 蝶 兰 以 及 取 用 不 同 部 位 的 外 植 体 最 适 培 养 基 的 选 择 也 有 所 不 同 2 0 1 2 M S 或 改 良 M S 较 M S 效 果 好 减 少 M S 中 大 量 元 素 和 部 分 微 量 元 素 及 有 机 成 分 适 当 增 加 少 量 的 叶 酸 有 利 于 原 球 茎 的 增 殖 生 长 1 1 植 物 组 织 培 养 中 常 添 加 一 些 天 然 有 机 物 2 1 如 椰 子 汁 马 铃 薯 汁 和 香 蕉 汁 可 提 高 蝴 蝶 兰 原 球 茎 的 增 殖 率 2 2 2 4 蝴 蝶 兰 组 培 中 常 用 的 细 胞 分 裂 素 为 6 B A 质 量 浓 度 较 高 1 8 m g L 1 的 6 B A 能 促 进 蝴 蝶 兰 原 球 茎 增 殖 质 量 浓 度 较 低 0 1 0 5 m g L 1 的 6 B A 能 促 进 原 球 茎 分 化 2 5 蝴 蝶 兰 在 生 长 发 育 期 对 高 温 敏 感 在 高 温 胁 迫 下 极 易 受 到 抑 制 和 危 害 其 最 适 宜 生 长 的 温 度 是 1 8 2 8 温 度 过 高 会 导 致 蝴 蝶 兰 细 胞 内 活 性 氧 R O S 大 量 积 累 使 其 代 谢 紊 乱 从 而 导 致 植 株 生 长 缓 慢 甚 至 死 亡 2 6 恒 温 3 0 处 理 2 4 h 能 显 著 提 高 蝴 蝶 兰 抗 氧 化 酶 活 性 然 而 4 0 处 理 会 破 坏 抗 氧 化 酶 系 统 2 7 关 于 蝴 蝶 兰 高 温 胁 迫 方 面 的 研 究 主 要 集 中 在 赤 霉 素 细 胞 分 裂 素 与 成 花 的 关 系 2 8 2 9 高 温 胁 迫 下 蝴 蝶 兰 的 防 御 机 制 和 伤 害 机 理 蝴 蝶 兰 的 高 温 脱 毒 3 0 以 及 耐 热 性 的 诱 导 及 抗 热 害 栽 培 等 方 面 3 1 随 着 中 国 对 外 交 流 的 扩 大 园 艺 植 物 进 出 口 频 繁 目 前 国 内 外 对 蝴 蝶 兰 的 研 究 主 要 集 中 在 组 织 快 速 繁 殖 体 系 的 建 立 3 2 3 3 灭 菌 方 法 降 低 褐 化 3 4 3 6 及 对 胁 迫 的 生 理 响 应 等 方 面 3 0 3 1 3 7 但 很 少 有 关 于 环 境 胁 迫 对 蝴 蝶 兰 可 组 培 性 影 响 的 研 究 蝴 蝶 兰 作 为 兰 科 珍 贵 的 园 艺 种 源 为 防 止 其 种 源 流 失 同 时 也 为 利 用 境 外 蝴 蝶 兰 种 源 建 立 对 蝴 蝶 兰 植 株 活 力 的 快 速 检 测 方 法 具 有 实 际 应 用 价 值 本 研 究 分 别 以 蝴 蝶 兰 无 菌 试 管 苗 为 材 料 研 究 了 高 温 胁 迫 条 件 下 蝴 蝶 兰 的 叶 绿 素 荧 光 参 数 变 化 及 其 与 蝴 蝶 兰 生 长 繁 殖 潜 力 之 间 的 关 系 旨 在 建 立 蝴 蝶 兰 植 株 活 力 的 快 速 检 测 方 法 1 材 料 与 方 法 培 养 材 料 为 蝴 蝶 兰 大 辣 椒 品 种 3 个 月 组 培 苗 购 自 潍 坊 市 潍 城 区 南 关 花 卉 市 场 选 取 株 龄 株 高 生 势 叶 色 基 本 一 致 的 3 个 月 龄 的 蝴 蝶 兰 大 辣 椒 组 培 苗 植 株 放 置 在 无 菌 瓶 中 每 瓶 一 株 于 光 照 培 养 箱 中 培 养 培 养 条 件 为 温 度 3 5 光 照 1 2 h d 1 空 气 相 对 湿 度 7 0 R H 光 照 强 度 2 0 0 0 l x 对 照 的 温 度 为 2 5 2 光 照 1 2 h d 1 每 隔 2 d 取 出 高 温 处 理 的 蝴 蝶 兰 幼 苗 植 株 暗 适 应 2 0 m i n 后 采 用 便 携 式 调 制 叶 绿 素 荧 光 仪 P A M 分 别 测 定 蝴 蝶 兰 两 个 品 种 茎 段 和 第 二 片 叶 的 P S 最 大 光 化 学 量 子 产 量 F v F m 每 个 处 理 重 复 3 次 同 样 每 隔 2 d 取 出 高 温 处 理 的 蝴 蝶 兰 幼 苗 植 株 进 行 可 组 培 性 研 究 切 去 根 部 和 叶 子 保 留 茎 段 部 位 进 行 组 培 接 种 培 养 基 为 花 宝 1 号 质 量 浓 度 3 g L 1 6 B A 质 量 浓 度 5 0 m g L 1 N A A 质 量 浓 度 0 5 m g L 1 蔗 糖 质 量 浓 度 3 0 g L 1 椰 汁 体 积 分 数 2 0 0 m L L 1 琼 脂 质 量 浓 度 6 g L 1 活 性 炭 质 量 浓 度 1 g L 1 p H 值 6 0 接种后的茎段放置在无菌培养室中培养 培养条件为 2 5 2 光源为普通荧光灯 光照度约 1 5 0 0 2 5 2第 2 期 朱 珈 叶 李 丹 丹 陈 倩 等 基 于 叶 绿 素 荧 光 参 数 评 估 蝴 蝶 兰 的 组 织 培 养 潜 力 2 0 0 0 l x 光 照 时 间 为 1 2 h d 1 每 个 处 理 设 5 次 重 复 培 养 7 5 d 后 观 测 蝴 蝶 兰 成 苗 情 况 以 形 成 叶 片 丛 生 芽 为 组 培 成 功 标 准 2 结 果 与 分 析 2 1 高 温 胁 迫 下 蝴 蝶 兰 大 辣 椒 品 种 的 形 态 变 化 对 照 处 理 的 蝴 蝶 兰 植 株 在 实 验 期 间 均 保 持 良 好 生 长 状 态 高 温 处 理 下 大 辣 椒 品 种 在 第 1 0 天 开 始 变 黄 第 2 2 天 大 部 分 发 黄 枯 萎 图 1 2 2 高 温 胁 迫 下 蝴 蝶 兰 大 辣 椒 品 种 叶 片 和 茎 段F v F m 值 高 温 胁 迫 下 随 着 处 理 时 间 的 延 长 蝴 蝶 兰 的 叶 片 F v F m 值 不 断 下 降 第 2 1 天 后 该 指 标 急 剧 下 降 到 第 2 4 天 时 为 0 与 叶 片 相 比 茎 段 的 F v F m 值 下 降 的 相 对 平 缓 到 第 2 4 天 时 F v F m 值 为 0 3 5 高 温 胁 迫 处 理 下 随 着 处 理 时 间 的 延 长 蝴 蝶 兰 茎 段 F v F m 值 整 体 呈 不 断 下 降 的 趋 势 处 理 2 0 d 后 F v F m 值 为 0 3 5 仍 有 一 定 活 力 高 温 胁 迫 下 茎 段 的 最 大 量 子 产 量 下 降 程 度 弱 于 叶 片 图 2 图 1 不 同 高 温 处 理 时 间 大 辣 椒 形 态 变 化 图 2 高 温 胁 迫 不 同 处 理 时 间 下 蝴 蝶 兰 大 辣 椒 a 叶 片 和 b 茎 段 的 F v F m 值 2 5 32 0 2 2 年 上 海 师 范 大 学 学 报 自 然 科 学 版 J S h a n g h a i N o r m a l U n i v N a t S c i 测 定 不 同 波 长 的 光 合 有 效 辐 射 P A R 下 蝴 蝶 兰 的 光 合 电 子 传 递 速 率 E T R 得 到 快 速 光 响 应 曲 线 发 现 在 高 温 胁 迫 处 理 下 随 着 处 理 时 间 的 延 长 快 速 光 响 应 曲 线 整 体 呈 不 断 下 降 的 趋 势 第 2 2 天 时 光 响 应 曲 线 降 到 最 低 但 是 仍 然 有 一 定 活 性 整 体 趋 势 与 高 温 胁 迫 下 大 辣 椒 茎 段 F v F m 值 的 变 化 趋 势 一 致 图 3 2 3 高 温 胁 迫 下 两 种 蝴 蝶 品 种 叶 片F v F m 值 与 可 组 培 相 关 性 蝴 蝶 兰 大 辣 椒 品 种 在 高 温 胁 迫 环 境 下 1 4 d 后 外 植 体 组 培 成 功 率 都 为 1 0 0 第 1 6 天 时 组 培 成 功 率 降 到 了 6 7 第 2 2 天 时 为 3 3 第 2 4 天 以 后 为 0 与 黄 花 红 心 品 种 相 比 大 辣 椒 品 种 在 高 温 胁 迫 下 不 管 是 F v F m 值 变 化 还 是 外 植 体 的 组 培 可 繁 育 能 力 相 应 指 标 下 降 的 速 率 都 更 为 缓 慢 高 温 胁 迫 环 境 下 蝴 蝶 兰 幼 苗 的 可 组 培 性 与 其 叶 片 的 F v F m 值 正 相 关 由 于 测 量 F v F m 值 的 部 位 为 叶 片 进 行 可 组 培 性 探 究 的 部 位 为 茎 段 茎 段 可 组 培 性 与 其 叶 片 的 F v F m 值 对 应 性 不 是 很 强 在 高 温 处 理 1 2 d 后 大 辣 椒 品 种 茎 段 的 F v F m 值 大 于 0 5 组 培 成 功 率 都 在 8 0 以 上 F v F m 值 低 于 0 5 以 后 可 组 培 成 功 率 依 次 递 减 当 F v F m 值 小 于 0 3 5 时 组 培 成 功 率 均 为 0 由 于 组 培 部 分 用 的 是 切 掉 根 部 和 叶 子 的 蝴 蝶 兰 茎 段 作 外 植 体 高 温 胁 迫 下 蝴 蝶 兰 茎 段 的 F v F m 值 与 可 组 培 相 关 性 更 为 直 接 蝴 蝶 兰 茎 段 是 组 培 性 探 究 的 实 验 材 料 直 接 测 量 茎 段 的 叶 绿 素 荧 光 参 数 特 别 是 F v F m 值 能 够 很 好 地 指 示 蝴 蝶 兰 的 可 组 织 培 养 成 功 率 表 1 图 3 高 温 胁 迫 不 同 处 理 时 间 下 蝴 蝶 兰 大 辣 椒 品 种 茎 段 E T R 快 速 光 响 应 曲 线 表 1 不 同 的 高 温 处 理 天 数 对 蝴 蝶 兰 大 辣 椒 品 种 F v F m 和 可 组 培 性 影 响 指 标 叶 片 F v F m 值 组 培 成 功 率 茎 段 F v F m 值 组 培 成 功 率 处 理 天 数 d 0 0 7 1 0 0 0 2 6 1 0 0 0 7 5 0 0 0 0 9 1 0 0 2 0 6 3 0 0 0 1 5 1 0 0 0 7 0 0 0 0 2 0 1 0 0 4 0 6 0 0 0 0 2 7 1 0 0 0 6 5 0 0 0 3 9 1 0 0 6 0 5 3 0 0 0 7 4 1 0 0 0 5 5 0 0 0 1 3 1 0 0 8 0 5 4 0 0 0 4 2 1 0 0 0 5 5 0 0 0 8 4 1 0 0 1 0 0 3 6 0 0 0 2 0 1 0 0 0 5 4 0 0 0 1 4 1 0 0 1 2 0 4 2 0 0 1 5 5 1 0 0 0 5 1 0 0 0 5 0 8 0 1 4 0 4 5 0 0 1 2 9 1 0 0 0 4 9 0 0 1 2 0 8 0 1 6 0 3 5 0 0 0 3 6 6 6 6 7 0 4 5 0 0 1 2 7 6 0 1 8 0 3 0 0 0 0 9 8 6 6 6 7 0 4 2 0 0 1 0 3 4 0 2 0 0 2 2 0 0 0 9 8 6 6 6 7 0 3 5 0 0 0 3 3 0 2 2 0 0 8 0 0 0 4 1 3 3 3 3 0 2 7 0 0 0 4 2 0 2 4 0 0 0 0 2 6 0 0 0 0 注 不 同 高 温 处 理 时 间 下 蝴 蝶 兰 组 培 成 功 率 是 3 个 处 理 的 平 均 值 2 5 4第 2 期 朱 珈 叶 李 丹 丹 陈 倩 等 基 于 叶 绿 素 荧 光 参 数 评 估 蝴 蝶 兰 的 组 织 培 养 潜 力 3 讨 论 高 温 胁 迫 下 蝴 蝶 兰 幼 苗 P S 反 应 中 心 出 现 了 可 逆 或 不 可 逆 失 活 降 低 了 原 初 光 能 转 换 效 率 对 光 合 机 构 和 光 合 色 素 产 生 光 氧 化 破 坏 3 8 不 同 的 蝴 蝶 兰 品 种 对 高 温 胁 迫 处 理 的 耐 受 性 不 同 由 于 大 辣 椒 品 种 的 叶 片 比 较 肥 厚 蕴 藏 水 分 比 较 多 在 高 温 胁 迫 下 的 耐 受 力 比 其 他 品 种 更 强 今 后 将 在 更 多 的 蝴 蝶 兰 品 种 中 开 展 实 验 研 究 以 评 估 不 同 品 种 对 高 温 胁 迫 的 耐 受 力 随 着 高 温 胁 迫 处 理 时 间 的 延 长 蝴 蝶 兰 茎 段 F v F m 值 整 体 也 呈 不 断 下 降 的 趋 势 与 高 温 处 理 蝴 蝶 兰 叶 片 相 比 茎 段 的 F v F m 值 变 化 较 缓 而 且 其 与 蝴 蝶 兰 的 组 培 成 功 率 之 间 的 相 关 性 更 加 紧 密 和 直 接 高 温 处 理 2 0 d 后 蝴 蝶 兰 大 辣 椒 茎 段 的 F v F m 值 下 降 为 0 3 5 此 种 情 况 下 茎 段 已 经 失 去 进 行 扩 繁 的 活 力 因 此 蝴 蝶 兰 茎 段 F v F m 值 0 3 5 可 以 作 为 一 个 判 别 茎 段 是 否 能 够 成 为 外 植 体 进 行 组 培 扩 繁 的 阈 值 研 究 蝴 蝶 兰 幼 苗 在 高 温 胁 迫 环 境 下 的 叶 绿 素 荧 光 参 数 的 变 化 与 其 可 组 培 性 的 关 系 不 仅 可 以 为 蝴 蝶 兰 规 模 化 生 产 提 供 实 质 性 的 参 考 建 议 更 能 为 海 关 检 验 检 疫 局 管 控 蝴 蝶 兰 出 入 境 情 况 提 供 帮 助 参 考 文 献 1 M C W I L L I A M S E L C o m p a r a t i v e r a t e s o f d a r k C O 2 u p t a k e a n d a c i d i f i c a t i o n i n t h e B r o m e l i a c e a e O r c h i d a c e a e a n d E u p h o r b i a c e a e J B o t a n i c a l G a z e t t e 1 9 7 0 1 3 1 4 2 8 5 2 9 0 2 C H R I S T E N S O N E A P h a l a e n o p s i s A M o n o g r a p h M P o r t l a n d O r e g o n U S A T i m b e r P r e s s 2 0 0 1 3 W A N G L M W A N G S Q Y A N G Y F G e r m p l a s m r e s o u r c e s a n d b r e e d i n g o f o r c h i d s J J o u r n a l o f A n y a n g I n s t i t u t e o f T e c h n o l o g y 2 0 0 5 2 4 1 0 4 L I Z H J I A Y R a p i d R e p r o d u c t i o n a n d C o n s e r v a t i o n o f R a r e O r c h i d s M S h a n g h a i S h a n g h a i P u b l i s h e r o f S c i e n c e a n d T e c h n o l o g y 2 0 0 6 3 5 5 R O T O R G J A m e t h o d o f v e g e t a t i v e p r o p a g a t i o n o f P h a l a e n o p s i s s p e c i e s a n d h y b r i d s J P r o c e e d i n g s A m e r i c a n S o c i e t y f o r H o r t i c u l t u r a l S c i e n c e 1 9 5 0 5 5 4 3 4 6 I N T U W O N G O S A G A W A Y C l o n a l p r o p a g a t i o n o f P h a l a e n o p s i s b y s h o o t t i p c u l t u r e J A m e r i c a n O r c h i d S o c i e t y B u l l e t i n 1 9 7 4 9 3 8 9 3 8 9 5 7 T A N W C D A I C G T i s s u e C u l t u r e M e t h o d s f o r O r n a m e n t a l P l a n t s M B e i j i n g C h i n a F o r e s t r y P u b l i s h i n g H o u s e 1 9 9 1 8 P E N G L X W A N G S M E N G G Y S t u d y o n t i s s u e c u l t u r e a n d r a p i d p r o p a g a t i o n o f P h a l a e n o p s i s J T i a n j i n A g r i c u l t u r a l S c i e n c e s 1 9 9 9 5 2 2 7 2 9 9 L I J H U A N G M R W A N G M X P l a n t l e t s r e g e n e r a t i o n f r o m l e a f e x p l a n t s o f P h a l a e n o p s i s J J o u r n a l o f N a n j i n g F o r e s t r y U n i v e r s i t y N a t u r a l S c i e n c e s E d i t i o n 2 0 0 5 2 9 3 2 8 3 2 1 0 T A N A K A M S A K A N I S H I Y C l o n a l p r o p a g a t i o n o f P h a l a e n o p s i s b y l e a f t i s s u e c u l t u r e J A m e r i c a n O r c h i d S o c i e t y B u l l e t i n 1 9 7 7 4 6 7 3 7 3 7 1 1 L U X H G U O W J X U L H e t a l T h e p r e l i m i n a r y r e s e a r c h o n t h e r a p i d p r o p a g a t i o n o f P h a l a e n o p s i s b y u s i n g t h e j o i n t p o i n t s o f f l o w e r s t e m s a s e x p l a n t s J A c t a H o r t i c u l t u r a e S i n i c a 2 0 0 2 2 9 5 4 9 1 4 9 2 1 2 L I J J L I A O J J K E W L T i s s u e c u l t u r e u s i n g r o o t s e g m e n t f o r P h a l a e n o p s i s J P l a n t P h y s i o l o g y C o m m u n i c a t i o n s 2 0 0 0 3 6 1 2 0 9 1 3 G U W M C A O C Y D I N G S M e t a l O n t i s s u e c u l t u r e a n d r a p i d p r o p a g a t i o n f o r P h a l a e n o p s i s J J o u r n a l o f S h a n d o n g F o r e s t r y S c i e n c e a n d T e c h n o l o g y 2 0 0 4 5 4 7 4 8 1 4 L I C H S t u d y o n m i c r o p r o p a g a t i o n o f P h a l a e n o p s i s s p e c i e s D Y a n g z h o u Y a n g z h o u U n i v e r s i t y 2 0 0 4 2 5 52 0 2 2 年 上 海 师 范 大 学 学 报 自 然 科 学 版 J S h a n g h a i N o r m a l U n i v N a t S c i 1 5 R E N Q P N e w t e c h n o l o g y o f t i s s u e c u l t u r e a n d r a p i d p r o p a g a t i o n f o r P h a l a e n o p s i s J P r a c t i c a l F o r e s t r y T e c h n o l o g y 2 0 0 7 1 2 9 1 3 1 6 P A N X F W A N G A S L I H Z A r e v i e w o n t h e p r o g r e s s o f P h a l a e n o p s i s r a p i d p r o p a g a t i o n t h r o u g h t i s s u e c u l t u r e J T r o p i c a l F o r e s t r y 2 0 0 5 3 3 1 4 5 4 7 1 7 L I J M T u t o r i a l s i n P l a n t T i s s u e C u l t u r e M B e i j i n g C h i n a A g r i c u l t u r a l U n i v e r s i t y P r e s s 2 0 0 2 4 5 1 8 Z H U Z Q P l a n t C e l l E n g i n e e r i n g M B e i j i n g C h e m i c a l I n d u s t r y P r e s s 2 0 0 3 1 9 C H E N Z L Y E X L L I A N G C Y I n v i t r o c u l t u r e o f t h e i n f l o r e s c e n c e o f P h a l a e n o p s i s J A c t a H o r t i c u l t u r a e S i n i c a 2 0 0 3 3 0 2 2 4 2 2 4 4 2 0 S U N L D e m o n s t r a