灰树花野生优势菌株筛选初报.pdf

d i b l e f u n g i 育 种 驯 化 2 0 2 2 年 第 4 4 卷 第 6 期 d i b l e f u n g i 1 2 试 验 方 法 1 2 1 供 试 灰 树 花 菌 株 拮 抗 试 验 将 供 试 菌 株 两 两 组 合 接 种 于 P D A 平 板 培 养 基 2 5 黑 暗 培 养 观 察 菌 丝 接 触 区 有 无 拮 抗 反 应 3 次 重 复 如 果 检 测 菌 株 间 无 带 线 出 现 表 示 2 个 菌 株 间 亲 缘 关 系 较 近 需 要 采 用 其 他 方 法 进 一 步 鉴 定 如 果 检 测 菌 株 间 出 现 拮 抗 拮 抗 线 或 隆 起 或 沟 状 表 示 两 菌 株 间 亲 缘 关 系 较 远 1 2 2 供试灰树花菌株在 P D A 平板上菌丝生长情况 将 对 照 菌 株 和 野 生 菌 株 转 接 到 P D A 培 养 基 上 活 化 于 2 5 恒 温 暗 培 养 1 5 d 用 打 孔 器 取 直 径 为 摘 要 对 在 河 北 省 唐 山 市 承 德 市 等 采 集 到 的 6 株 野 生 灰 树 花 菌 株 与 当 地 主 栽 菌 株 及 庆 灰 1 5 1 进 行 拮 抗 试 验 并 进 行 菌 丝 培 养 及 出 菇 试 验 结 果 表 明 1 0 1 菌 株 产 量 高 朵 形 大 深 褐 色 适 合 当 地 覆 土 栽 培 9 6 菌 株 产 量 中 等 莲 花 形 黑 褐 色 适 合 鲜 销 具 有 良 好 的 驯 化 潜 能 关 键 词 灰 树 花 栗 蘑 菌 株 筛 选 中 图 分 类 号 S 6 4 6 1 文 章 编 号 1 0 0 0 8 3 5 7 2 0 2 2 0 6 0 0 3 0 0 3 灰 树 花 G r i f o l a f r o n d o s a 又 名 舞 茸 属 担 子 菌 亚 门 B a s i d i o m y c o t i n a 层 菌 纲 H y m e n o m y c e t e s 多 孔 菌 目 P o l y p o r a l e s 皱 孔 菌 科 M e r u l i a c e a e 树 花 菌 属 G r i f o l a 是 一 种 珍 稀 食 药 用 菌 1 2 灰 树 花 营 养 丰 富 含 1 8 种 人 体 必 需 的 氨 基 酸 和 多 种 有 益 矿 物 质 有 医 疗 保 健 作 用 是 一 种 优 良 的 食 药 用 菌 3 4 当 前 灰 树 花 的 市 场 需 求 量 逐 年 上 升 但 唐 山 市 迁 西 县 灰 树 花 栽 培 品 种 较 单 一 加 上 菌 种 退 化 等 因 素 的 影 响 导 致 灰 树 花 产 量 下 降 为 此 笔 者 开 展 野 生 灰 树 花 菌 株 驯 化 研 究 旨 在 筛 选 适 合 迁 西 县 气 候 的 优 质 高 产 灰 树 花 菌 株 并 为 灰 树 花 育 种 提 供 种 质 资 源 1 材 料 与 方 法 1 1 试 验 材 料 1 供 试 菌 株 试 验 对 照 菌 株 为 迁 西 3 号 庆 灰 1 5 1 供 试 野 生 菌 株 6 株 均 为 唐 山 市 农 业 科 学 院 食 用 菌 研 究 所 实 验 室 野 外 采 集 分 离 获 得 详 见 表 1 表 1 供 试 野 生 灰 树 花 菌 株 菌 株 号 8 8 9 5 9 6 9 8 1 0 0 1 0 1 菌 株 来 源 河 北 省 唐 山 市 迁 西 县 野 生 菌 株 河 北 省 承 德 市 宽 城 县 野 生 菌 株 河 北 省 承 德 市 宽 城 县 野 生 菌 株 河 北 省 唐 山 市 遵 化 市 野 生 菌 株 河 北 省 唐 山 市 遵 化 市 野 生 菌 株 河 北 省 唐 山 市 遵 化 市 野 生 菌 株 2 供 试 培 养 基 P D A 加 富 固 体 培 养 基 为 去 皮 马 铃 薯 2 0 0 g 葡 萄 糖 2 0 g 硫 酸 镁 1 g 磷 酸 二 氢 钾 1 g 琼 脂 2 0 g p H 自 然 栽 培 料 配 方 为 栗 木 屑 4 0 棉 籽 壳 4 2 麸 皮 1 6 红 糖 1 石 膏 1 料 水 比 为 1 0 8 p H 自 然 灰 树 花 野 生 优 势 菌 株 筛 选 初 报 彭 学 文 陶 月 詹 云 达 解 文 强 吴 志 会 唐 山 市 农 业 科 学 研 究 院 河 北 唐 山 0 6 3 0 0 1 收 稿 日 期 2 0 2 2 0 8 2 5 一 稿 2 0 2 2 0 9 2 6 修 改 稿 基 金 项 目 河 北 省 重 点 研 发 项 目 课 题 编 号 2 1 3 2 7 5 0 8 D 作 者 简 介 彭 学 文 硕 士 副 研 究 员 主 要 从 事 食 用 菌 及 相 关 工 作 联 系 电 话 1 5 0 3 3 9 0 3 9 6 3 E m a i l p x w w z h s i n a c o m 通 信 作 者 吴 志 会 硕 士 副 研 究 员 主 要 从 事 食 用 菌 及 相 关 工 作 E m a i l w z h 4 0 6 s i n a c n 图 1 部 分 野 生 灰 树 花 子 实 体 生 态 照 2 0 2 2 4 4 6 3 0 3 2 彭 学 文 等 灰 树 花 野 生 优 势 菌 株 筛 选 初 报 3 0d i b l e f u n g i 育 种 驯 化 2 0 2 2 年 第 4 4 卷 第 6 期 5 m m 菌 饼 接 种 到 新 P D A 培 养 基 中 央 置 2 5 恒 温 暗 培 养 培 养 1 1 d 后 观 察 菌 落 生 长 情 况 并 采 用 十 字 交 叉 法 测 量 菌 落 直 径 每 处 理 设 4 个 重 复 试 验 计 算 菌 丝 平 均 生 长 速 度 观 察 记 录 菌 丝 长 势 菌 丝 生 长 速 度 菌 落 直 径 菌 饼 直 径 2 1 1 1 2 3 供 试 灰 树 花 菌 株 出 菇 比 较 试 验 栽 培 袋 1 7 c m 3 6 c m 0 0 0 5 c m 装 湿 料 1 k g 折 干 0 5 5 k g 1 0 0 灭 菌 1 2 h 后 冷 却 中 心 轴 接 种 颗 粒 菌 种 发 菌 期 管 理 同 常 规 出 菇 采 用 迁 西 县 当 地 常 规 模 式 地 栽 覆 土 出 菇 每 个 菌 株 栽 培 3 畦 每 畦 3 6 袋 菌 棒 试 验 记 录 菌 丝 生 长 情 况 包 括 菌 丝 满 袋 时 间 接 种 到 子 实 体 形 成 时 间 测 定 子 实 体 性 状 2 结 果 与 分 析 2 1 供 试 灰 树 花 菌 株 拮 抗 试 验 结 果 表 2 供 试 灰 树 花 菌 株 拮 抗 试 验 结 果 菌 株 号 迁 西 3 号 庆 灰 1 5 1 8 8 9 5 9 6 9 8 1 0 0 1 0 1 迁 西 3 号 庆 灰 1 5 1 8 8 9 5 9 6 9 8 1 0 0 注 表 示 有 拮 抗 反 应 由 表 2 可 知 8 个 灰 树 花 菌 株 间 两 两 组 合 均 发 生 拮 抗 反 应 说 明 供 试 8 个 灰 树 花 菌 株 亲 缘 关 系 较 远 2 2 供 试 灰 树 花 菌 株 菌 丝 在 P D A 平 板 上 生 长 情 况 由 表 3 可 知 试 验 灰 树 花 菌 株 菌 丝 颜 色 均 洁 白 从 菌 丝 长 势 菌 落 形 态 来 看 都 均 匀 庆 灰 1 5 1 菌 株 菌 丝 较 稀 疏 9 5 号 9 6 号 9 8 号 1 0 0 号 1 0 1 号 菌 株 菌 丝 生 长 旺 盛 从 菌 丝 平 均 生 长 速 度 来 看 9 6 号 菌 株 生 长 速 度 较 慢 且 与 8 8 号 9 5 号 迁 西 3 号 庆 灰 1 5 1 菌 株 差 异 显 著 生 长 速 度 最 快 的 是 庆 灰 1 5 1 菌 株 4 7 4 m m d 其 次 是 迁 西 3 号 菌 株 8 8 号 菌 株 表 3 供 试 灰 树 花 菌 株 P D A 平 板 培 养 菌 丝 生 长 情 况 菌 株 号 迁 西 3 号 庆 灰 1 5 1 8 8 9 5 9 6 9 8 1 0 0 1 0 1 菌 丝 长 势 菌 落 形 态 洁 白 粗 壮 均 匀 洁 白 较 稀 疏 均 匀 洁 白 均 匀 洁 白 旺 盛 浓 密 均 匀 洁 白 旺 盛 均 匀 洁 白 旺 盛 均 匀 洁 白 旺 盛 均 匀 洁 白 旺 盛 均 匀 菌 丝 生 长 速 度 m m d 1 4 4 4 0 3 5 b c 4 7 4 0 0 6 c 4 4 3 0 2 1 b c 4 5 2 0 3 1 b c 3 7 4 0 4 4 a 4 2 0 0 2 7 b c 3 9 3 0 4 1 a b 4 0 2 0 3 7 a b 2 3 供 试 灰 树 花 菌 株 出 菇 试 验 结 果 由 表 4 可 知 接 种 到 菌 丝 满 袋 时 间 最 短 的 是 迁 西 3 号 菌 株 2 2 d 其 次 是 8 8 号 菌 株 9 8 号 菌 株 满 袋 用 时 最 长 的 是 庆 灰 1 5 1 菌 株 9 5 号 菌 株 接 种 到 子 实 体 形 成 时 间 最 短 的 是 迁 西 3 号 9 6 号 菌 株 9 8 号 菌 株 均 为 4 8 d 1 0 0 号 菌 株 时 间 最 长 为 5 4 d 子 实 体 形 态 及 颜 色 所 有 菌 株 都 是 莲 花 状 但 迁 西 3 号 菌 株 庆 灰 1 5 1 菌 株 8 8 号 菌 株 9 5 号 菌 株 9 6 号 菌 株 1 0 0 号 菌 株 色 深 叶 片 大 小 9 6 号 菌 株 1 0 0 号 菌 株 叶 片 较 大 但 9 6 号 菌 株 子 实 体 属 于 中 等 图 2 部 分 灰 树 花 菌 株 拮 抗 情 况 表 4 供 试 灰 树 花 菌 株 子 实 体 特 性 菌 株 号 迁 西 3 号 庆 灰 1 5 1 8 8 9 5 9 6 9 8 1 0 0 1 0 1 接 种 到 菌 丝 满 袋 用 时 d 2 2 0 2 6 0 2 3 0 2 6 0 2 4 0 2 3 0 2 5 0 2 3 5 接 种 到 形 成 子 实 体 用 时 d 4 8 0 5 3 0 4 5 5 5 2 0 4 8 0 4 8 0 5 4 0 4 1 0 子 实 体 形 状 颜 色 莲 花 状 灰 黑 色 莲 花 状 黑 褐 色 莲 花 状 灰 黑 色 莲 花 状 黑 色 莲 花 状 灰 黑 色 莲 花 状 灰 褐 色 莲 花 状 灰 黑 色 莲 花 状 深 褐 色 叶 片 长 宽 c m 3 3 5 5 2 6 3 9 2 8 4 3 1 7 2 9 2 6 5 3 1 8 3 2 2 3 5 4 1 4 3 1 3 8 9 4 4 2 7 4 2 4 5 3 1 2 3 4 3 2 7 5 2 6 5 4 2 4 5 8 2 8 3 9 子 实 体 长 宽 高 c m 3 6 2 1 8 3 1 4 5 1 5 2 1 2 3 1 3 5 1 7 9 1 1 4 1 1 2 1 8 2 1 2 3 1 4 5 2 6 2 2 0 3 1 6 5 1 8 2 1 2 3 1 5 5 3 5 2 1 8 3 1 6 1 4 0 3 1 9 7 1 2 3 9 6 9 6 9 7 9 7 1 0 2 1 0 2 1 0 0 1 0 0 1 0 1 1 0 1 9 8 9 8 9 5 9 5 9 7 9 7 1 0 0 1 0 0 1 0 1 1 0 1 9 5 9 5 9 6 9 6 1 0 2 1 0 2 9 8 9 8 9 8 9 8 9 7 9 7 9 5 9 5 1 0 1 1 0 1 1 0 0 1 0 0 1 0 2 1 0 2 9 6 9 6 9 6 9 6 9 7 9 7 1 0 2 1 0 2 1 0 0 1 0 0 9 5 9 5 1 0 1 1 0 1 9 8 9 8 9 8 9 8 1 0 2 1 0 2 9 7 9 7 1 0 0 1 0 0 1 0 1 1 0 1 9 5 9 5 9 6 9 6 1 0 0 1 0 0 9 8 9 8 9 7 9 7 9 5 9 5 1 0 1 1 0 1 9 6 9 6 1 0 2 1 0 2 3 1d i b l e f u n g i 育 种 驯 化 2 0 2 2 年 第 4 4 卷 第 6 期 大 小 子 实 体 最 大 的 为 1 0 1 号 菌 株 其 次 是 迁 西 3 号 菌 株 由 表 5 可 知 产 量 最 高 是 迁 西 3 号 菌 株 5 1 4 3 g 袋 其 次 是 1 0 1 号 菌 株 5 0 8 0 g 袋 但 两 者 没 有 显 著 差 异 3 小 结 拮 抗 试 验 表 明 所 采 集 野 生 灰 树 花 菌 株 与 对 照 迁 西 3 号 及 庆 灰 1 5 1 均 有 拮 抗 且 野 生 灰 树 花 菌 株 之 间 也 有 拮 抗 下 一 步 将 通 过 I S S R 和 S R A P 进 一 步 鉴 定 他 们 之 间 的 亲 缘 关 系 供 试 灰 树 花 菌 株 出 菇 试 验 结 果 1 0 1 号 菌 株 产 量 较 高 但 是 颜 色 浅 9 6 号 菌 株 生 物 转 化 率 为 9 0 9 6 较 迁 西 3 号 稍 低 叶 片 较 大 色 深 适 合 鲜 销 具 有 一 定 的 市 场 前 景 参 考 文 献 1 图 力 古 尔 蕈 菌 分 类 学 M 北 京 北 京 科 学 出 版 社 2 0 1 8 2 3 9 2 4 0 2 卯 晓 岚 中 国 蕈 菌 M 北 京 科 学 出 版 社 2 0 0 9 3 刘 芳 秀 张 丹 灰 树 花 菌 种 选 育 初 报 J 中 国 食 用 菌 1 9 8 6 5 3 5 4 赵 铭 灰 树 花 的 抗 艾 滋 病 功 效 日 本 药 学 会 第 1 1 3 次 年 会 报 告 J 中 国 食 用 菌 1 9 9 3 5 4 9 表 5 供 试 灰 树 花 菌 株 产 量 比 较 菌 株 号 迁 西 3 号 庆 灰 1 5 1 8 8 9 5 9 6 9 8 1 0 0 1 0 1 小 区 平 均 袋 产 量 g I 4 6 9 5 4 8 0 2 5 0 2 1 3 5 4 6 5 3 3 4 4 0 0 3 4 4 4 1 4 8 0 6 I I 5 5 3 2 4 9 2 3 4 7 6 8 4 3 2 1 4 9 6 8 4 3 2 6 4 0 6 2 5 3 0 9 I I I 5 2 0 1 4 7 5 2 5 3 0 2 3 8 9 2 4 7 0 6 4 5 0 1 4 7 0 3 5 1 2 4 平 均 袋 产 量 g 5 1 4 3 c 4 8 2 6 b c 5 0 3 0 c 3 9 2 0 a 5 0 0 3 c 4 2 7 7 a b 4 4 0 2 a b 5 0 8 0 c 生 物 转 化 率 9 3 5 0 8 7 7 4 9 1 4 6 7 1 2 7 9 0 9 6 7 7 7 6 8 0 0 4 9 2 3 6 图 1 部 分 供 试 灰 树 花 菌 株 子 实 体 9 8 9 8 1 0 0 1 0 0 1 0 1 1 0 1 合 白 耙 齿 菌 菌 丝 生 长 及 干 物 质 积 累 表 4 多 种 培 养 基 培 养 白 耙 齿 菌 菌 丝 结 果 培 养 基 Y P A D 优 化 培 养 基 C P D A P D A P G Y T Y S E M 菌 丝 平 均 长 速 m m d 1 8 1 3 a 8 3 5 a 7 4 8 b 7 2 9 b 6 5 2 c 5 1 8 d 6 1 3 c 菌 丝 干 重 m g 1 7 8 6 a 1 2 9 3 b 1 2 5 6 b 1 2 0 5 b 8 9 1 c 3 0 3 d 1 5 8 e 菌 丝 长 势 浓 密 浓 密 浓 密 较 浓 密 较 浓 密 稀 疏 稀 疏 菌 落 边 缘 规 则 规 则 规 则 规 则 比 较 规 则 不 规 则 不 规 则 注 小 写 字 母 表 示 P 0 0 5 水 平 上 的 差 异 显 著 性 3 小 结 将 I T S 序 列 结 果 在 N C B I 中 进 行 B L A S T 比 对 发 现 目 标 序 列 与 白 耙 齿 菌 亲 缘 关 系 最 近 并 与 登 录 号 为 M K 3 4 3 5 8 8 1 M H 8 9 0 6 8 9 1 M H 3 0 1 1 1 4 1 J X 3 1 1 9 2 4 1 M K 8 8 3 6 5 2 1 等 1 0 个 白 耙 齿 菌 菌 株 相 似 性 达 9 9 8 5 进 一 步 验 证 了 其 形 态 学 鉴 定 结 果 在 试 验 范 围 内 促 进 白 耙 齿 菌 菌 丝 快 速 生 长 萌 发 并 且 使 菌 丝 品 质 优 良 致 密 的 培 养 基 为 优 化 培 养 基 葡 萄 糖 2 0 g L 酵 母 膏 1 0 g L 磷 酸 二 氢 钾 0 5 g L 硫 酸 镁 0 5 g L 琼 脂 2 0 g L 能 够 获 得 较 大 菌 丝 干 重 并 且 适 宜 白 耙 齿 菌 生 长 的 培 养 基 为 Y P A D 培 养 基 参 考 文 献 1 图 力 古 尔 戴 玉 成 长 白 山 主 要 食 药 用 木 腐 真 菌 多 样 性 及 其 保 育 J 菌 物 研 究 2 0 0 4 2 2 6 2 戴 玉 成 图 力 古 尔 中 国 东 北 野 生 食 药 用 真 菌 图 志 M 北 京 科 学 出 版 社 2 0 0 7 1 0 0 3 杨 真 威 姜 瑞 芝 高 其 品 等 耙 齿 菌 糖 蛋 白 的 提 取 分 离 理 化 性 质 及 抗 炎 活 性 J 天 然 产 物 研 究 与 开 发 2 0 0 5 1 7 3 2 8 0 2 8 2 4 李 蒙 杜 林 娜 张 野 等 响 应 面 法 结 合 满 意 度 函 数 优 化 白 囊 耙 齿 菌 发 酵 培 养 基 J 中 国 医 药 工 业 杂 志 2 0 1 1 4 2 1 1 7 2 0 上 接 第 2 9 页 3 2