八倍体草莓DNA指纹图谱的构建与初步遗传分析.pdf

中国农业大学学报 2 0 2 3 2 8 2 3 5 4 2 J o u r n a l o f C h i n a A g r i c u l t u r a l U n i v e r s i t y h t t p z g n y d x x b i j o u r n a l s c n 刘国霞 张全芳 杨雪 谭晴晴 胡悦 范阳阳 姚川 崔刚 步迅 陈雪燕 刘炳福 八倍体草莓D N A指纹图谱的构建与初步遗传分析 J 中国农业大学学报 2 0 2 3 2 8 0 2 3 5 4 2 L I U G u o x i a Z H A N G Q u a n f a n g Y A N G X u e T A N Q i n g q i n g H U Y u e F A N Y a n g y a n g Y A O C h u a n C U I G a n g B U X u n C H E N X u e y a n L I U B i n g f u C o n s t r u c t i o n o f D N A f i n g e r p r i n t i n g o f o c t o p l o i d s t r a w b e r r y a n d p r e l i m i n a r y g e n e t i c a n a l y s i s J JournalofChinaAgriculturalUniversity 2 0 2 3 2 8 0 2 3 5 4 2 D O I 1 0 1 1 8 4 1 j i s s n 1 0 0 7 4 3 3 3 2 0 2 3 0 2 0 4 八倍体草莓DNA指纹图谱的构建与初步遗传分析 刘国霞1 张全芳1 杨雪1 谭晴晴1 胡悦1 范阳阳1 姚川1 崔刚2 步迅1 陈雪燕1 刘炳福3 1 山东省农业科学院农作物种质资源研究所 济南2 5 0 1 0 0 2 山东普朗特农业技术有限公司 济南2 5 0 1 0 0 3 山东省农业科学院休闲农业研究所 济南2 5 0 1 0 0 摘 要 为对草莓品种进行分子鉴定 从5 9对S S R引物中筛选出1 8对多态性好的引物 采用毛细管电泳检测方 法对8 4份八倍体草莓品种进行标记分析 检测每个标记等位变异大小 并进行初步遗传分析 将每个引物对8 4 份草莓扩增的带型按照一定原则进行数字标注 为了简化编码 引物P 1 P 1 8分别编号为字母A R 将引物编号 与相应的带型编码进行组合得到该样品在特定引物的扩增产物编码 按照1 8对引物顺序串联这些编码形成该品 种的D N A指纹图谱 结果表明 1 8对S S R引物共扩增得到多态性条带1 5 0个 不同引物扩增到多态性条带数4 1 7个 共检测到3 7 7个带型 各引物的多态性信息含量 P I C 值为0 4 9 4 0 9 0 8 平均值为0 7 3 8 利用1 8对S S R 引物共构建了8 4个草莓品种的D N A指纹图谱 聚类分析结果表明 在遗传相似系数为0 9 9时能将所有品种区 分开 一些来源相同的品种被优先聚在一起 综上 本研究成功构建8 4个草莓品种的D N A指纹图谱 这些品种遗 传关系较近 关键词 草莓 S S R D N A指纹图谱 遗传分析 中图分类号 S 6 6 8 4 文章编号 1 0 0 7 4 3 3 3 2 0 2 3 0 2 0 0 3 5 0 8 文献标志码 A 收稿日期 2 0 2 2 0 4 1 5 基金项目 山东省农业科学院揭榜科技难题项目 S H J B 2 0 2 1 4 7 第一作者 刘国霞 O R C I D 0 0 0 0 0 0 0 2 6 6 1 5 9 2 9 8 助理研究员 主要从事农作物种质资源分子检测研究 E m a i l l i u g u o x i a 1 6 3 c o m 通讯作者 陈雪燕 O R C I D 0 0 0 0 0 0 0 2 8 4 2 1 5 3 2 9 助理研究员 主要从事植物分子生物学研究 E m a i l c h x y t v s 1 6 3 c o m 刘炳福 O R C I D 0 0 0 0 0 0 0 2 6 5 6 6 2 7 6 4 副研究员 主要从事草莓栽培与育种研究 E m a i l n k y 2 0 1 9 1 6 3 c o m ConstructionofDNAfingerprintingofoctoploidstrawberry andpreliminarygeneticanalysis LIUGuoxia1 ZHANGQuanfang1 YANGXue1 TANQingqing1 HUYue1 FANYangyang1 YAOChuan1 CUIGang2 BUXun1 CHENXueyan1 LIUBingfu3 1 InstituteofCropGermplasmResources ShandongAcademyofAgriculturalSciences Jinan250100 China 2 ShandongPlantAgriculturalTechnologyCo Ltd Jinan250100 China 3 InstituteofLeisureAgriculture ShandongAcademyofAgriculturalSciences Jinan250100 China Abstract Inordertoscreenstrawberrycultivarsatmolecularlevel 18SSRprimerpairswithhighpolymorphismwere identifiedfrom59primerpairs and84octoploidcultivatedstrawberrysampleswerescreened Byusingcapillary electrophoresismethod thesizeofdifferentallelesweredetected andthemolecularfingerprintingandgenetic analysisforallsampleswereestablished Differentallelesofeveryprimeweredigitallylabelledon84strawberry varietyaccordingtocertainprinciples Forsimplicity theprimersP1toP18werelabelledasAtoR thenthecodefor 中国农业大学学报2 0 2 3年第2 8卷 onestrawberryvarietyonspecificprimerwasgotthroughcombiningtheprimerlabelandthecorrespondingallelelabel Combinationofthesecodesof18primersaccordingtotheprimersequencetoformoneDNAfingerprintforone particularvariety Theresultsshowedthat Atotalof150polymorphicbandswereamplified andthenumberof polymorphicbandsamplifiedbydifferentprimersrangedfrom4to17 Finally 377bandcombinationswereobtainedin thisstudy Thevalueofpolymorphisminformationcontentrangedfrom0 494to0 908 andtheaveragevaluewas 0 738 DNAfingerprintofall84strawberryvarietywasconstructedfollowingtheabovemethod Theresultof clusteringanalysisshowedthatallvarietieswerecompletelydifferedfromeachotherbyusingthese18primerpairs basedonthethresholdofgeneticsimilaritycoefficientat0 99 Somecultivarsfromsameoriginwereclusteredtogether obviously Inconclusion theDNAfingerprintofall84strawberryvarietywasconstructed andtherelationshipamong themwasclose Keywords strawberry SSR DNAfingerprinting geneticanalysis 草莓 FragariaananassaD u c h 是一种重要 的经济作物 因其独特的风味和较高的营养价值素 有 水果皇后 的美誉 1 中国是世界上草莓主要生 产国之一 2 0 2 0年我国草莓栽培面积和产量分别为 1 2 6 6万h m 2和3 3 2 6 8万t 占世界种植面积和产 量的3 2 9 2 和3 7 5 4 2 我国野生草莓资源丰 富 自然分布的草莓属植物约有1 3种 分别为二倍 体和四倍体 3 2 0世纪初八倍体的栽培草莓凤梨 草莓传入我国 4 目前为止已从国外引进八倍体 草莓品种上百个 其中以日本品种和欧美品种居 多 5 近年来我国自主繁育的品种逐年增加 截 至2 0 1 7年 我国草莓育种单位育成品种1 1 2 个 6 由于我国草莓种植区分布广泛 不同地区 均存在引种现象 品种命名混乱 加上草莓本身的 营养繁殖特性 同名异物或同物异名的现象时有 出现 4 因此 使用分子技术手段准确区分现有 草莓品种资源很有必要 利用分子标记技术构建D N A指纹图谱 能够 从遗传本质层面对品种进行鉴别和保护 中国已将 利用D N A指纹图谱辅助草莓新品种测试列为重要 发展方向 7 简单重复序列标记 S i m p l e s e q u e n c e r e p e a t S S R 具有多态性丰富和稳定性好等特点 国 内外学者开发了大量S S R标记用于草莓品种鉴 定 4 遗传多样性分析 8 9 及指纹图谱构建 1 0 1 2 等研 究 传统S S R扩增产物需要经过银染显色等复杂 工序 步骤繁琐费时 而毛细管电泳荧光检测方法具 有操作简便和灵敏度高的优势 可克服这一难题 本研究拟利用最新S S R引物结合毛细管电泳技术 对收集的8 4个八倍体草莓资源进行D N A指纹图 谱构建和遗传分析 以期为草莓资源保护 品种鉴定 和新品种选育提供技术支持 1 材料与方法 1 1 试验材料 试验材料包括欧美 日韩及我国选育草莓品种 共计8 4份 现种植于山东普朗特农业技术有限公 司 样品信息见表1 1 2 DNA提取与PCR反应 取草莓幼嫩叶片 加入液氮 用组织研磨仪研磨 成粉末 采用天根植物基因组D N A提取试剂盒提 取D N A 提取的D N A用适量T E缓冲液溶解 使 用微量紫外分光光度计检测D N A浓度和纯度 置 于 2 0 保存 参考苗立祥等 1 3 的研究方法 选用5 9对引物 对部分样品进行扩增 选择条带清晰 单一和扩增 多态性较好的1 8对引物对所有样品进行P C R扩 增 上游引物连接M 1 3引物序列 以便与荧光标记 的M 1 3引物进行互补配对 M 1 3引物序列参考贾 琳琳等 1 4 普通引物和荧光引物由上海捷瑞生物 工程有限公司合成 P C R反应体系总体积2 0 L 1 0 B u f f e r 2 0 L 2 5 m m o l L d N T P s 2 L 5 U L T a q酶0 2 L 1 0 m o l L M 1 3荧光引物1 L 1 m o l L上下游 引物m i x 1 L D N A模板2 L 用去离子水补足 2 0 L P C R反应程序 9 5 模板预变性5 m i n 1 个循环 9 5 模板变性1 m i n 6 2 5 2 每循环 降低1 7 2 引物延伸4 5 s 共1 0个循环 9 5 模板变性1 m i n 5 2 复性结合4 5 s 7 2 引物延 伸4 5 s 共2 5个循环 最后6 0 延伸3 0 m i n 1 6 保存 P C R结束后 取产物1 2 L 加入含有 R O X 5 0 0内标的甲酰胺1 0 L 9 5 变性5 m i n 在 A B I 3 7 3 0 X L D N A分析仪上进行荧光检测 检测 63 第2期刘国霞等 八倍体草莓D N A指纹图谱的构建与初步遗传分析 表1 本研究所用的84份草莓资源信息 T a b l e 1 I n f o r m a t i o n o f 8 4 s t r a w b e r r y r e s o u r c e s u s e d i n t h i s s t u d y 序号 N o 品种名称 C u l t i v a r 原产地 O r i g i n 序号 N o 品种名称 C u l t i v a r 原产地 O r i g i n 序号 N o 品种名称 C u l t i v a r 原产地 O r i g i n 1小桃红中国2 9保3欧美5 7奈良8日本 2雪香韩国3 0格林2号德国5 8阿依孜欧美 3美香莎荷兰3 1益香日本5 9提奥加欧美 4西班牙L西班牙3 2姆托欧美6 0里瓦欧美 5红富美中国3 3红岗特利德英国6 1星都2号中国 6斯坦勒美国3 4苏维尼亚欧美6 2硕露中国 7粉佳人中国3 5长虹2号中国6 3长白中国 8 T u f t s美国3 6爱莓日本6 4石头河子中国 9加拿大四季加拿大3 7戈利玛荷兰6 5丹东大果中国 1 0红珍珠日本3 8布兰登堡欧洲6 6雪里香中国 1 1达斯莱克特法国3 9贡品欧美6 7宁玉中国 1 2奇妙美国4 0冬花中国6 8艳雪中国 1 3都卡荷兰4 1中国四季中国6 9艳丽中国 1 4西5欧美4 2绥中中国7 0雪兔日本 1 5轻骑中国4 3绥陵中国7 1章姬日本 1 6荷兰草莓荷兰4 4明旭中国7 2红颜日本 1 7荷兰西峡荷兰4 5福特拉米欧美7 3甜查理美国 1 8 G o r e r h o r s i m c o e欧美4 6红太后意大利7 4白雪公主中国 1 9骏河日本4 7宫本7号日本7 5明晶中国 2 0邓肯特美国4 8卡玛欧美7 6春旭中国 2 1上2欧美4 9胡得欧美7 7京怡香中国 2 2红衣加拿大5 0格林1号德国7 8香野日本 2 3青岛F中国5 1 M O H O W K欧美7 9越秀中国 2 4京泉香中国5 2贺登欧美8 0圣诞红美国 2 5 D A G M A R欧美5 3新星2号中国8 1幸香日本 2 6韩韵中国5 4静香日本8 2妙七中国 2 7塞纳欧美5 5绯美子日本8 3粉玉中国 2 8美德莱特加拿大5 6肇国日本8 4红袖添香中国 结果通过G e n e m a p p e r V 4 0软件进行片段大小和 基因型分析 1 3 数据分析 检测产物明显峰值按照四舍五入取整数记录片段 大小 将这些引物扩增主要片段带型进行组合 即为品 种的D N A指纹图谱 将数据通过D a t a F o r m a t e r 2 7软 件转换为N T S Y S软件要求的数据格式 1 5 利用 N T S Y S p c 2 1软件 h t t p w w w a p p l i e d b i o s t a t c o m S M S i m p l e m a t c h i n g 法计算其遗传相似系 数 然后根据相似系数用S A H N C l u s t e r i n g和非加 73 中国农业大学学报2 0 2 3年第2 8卷 权成对算术平均法 U n w e i g h t e d p a i r g r o u p m e t h o d w i t h a r i t h m e t i c m e a n U P G M A 进行聚类分析 1 2 多态信息含量 P o l y m o p h i s m i n f o r m a t i o n c o n t e n t P I C 为某一标记在群体中出现的频率 反映该标记 在群体检测多态性的价值 1 6 根据N e i 1 7 方法计 算引物P I C值 P I C 1 Pi2 其中Pi为第i等位 变异的频率 2 结果与分析 2 1 SSR引物筛选与多态性分析 选用D N A提取量较大 编号为9 1 5的7个 草莓样品对5 9个S S R引物进行筛选 经毛细管电 泳检测 选出1 8对多态性好和扩增信号强的引物 引物名分别为 S 0 0 1 1 S 0 0 5 1 S 0 0 6 1 S 0 1 2 1 S 0 1 8 1 S 0 2 3 1 S 0 2 9 1 S 0 3 0 1 S 0 3 3 1 S 0 3 4 1 S 0 3 5 1 S 0 4 7 1 S 0 4 9 1 S 0 6 1 1 S 0 6 4 1 S 0 7 0 1 S 0 7 9 1和S 0 9 7 1 这些 引物分别编号P 1 P 1 8 每对引物扩增产物相对片 段大小基本与此前苗立祥等 1 3 研究公布的一致 表2 引物P 1 0和P 1 1在部分草莓品种中检测的 不同类型的等位变异峰见图1 样品 红太后 宫本 7号 绥陵 胡得 经引物P 1 0扩增得到的带型组合 分别为2 0 5 1 9 2 2 6 6 2 6 0 2 6 6和2 0 5 2 7 2 而 贺登 新星2号 静香 肇国 经引物P 1 1扩增得到的带 型组合分别为2 0 0 2 2 3 1 9 7 1 9 5 2 5 0和2 2 3 2 5 0 表2 扩增多态性信息所用18对引物 T a b l e 2 P o l y m o r p h i c a m p l i f i c a t i o n i n f o r m a t i o n o f t h e 1 8 p r i m e r s u s e d 编号 C o d e 名称 N a m e 片段大 小 b p F r a g m e n t s i z e 文献中片段 大小 1 3 b p F r a g m e n t s i z e i n c i t e d p a p e r 总条带 数 个 T o t a l b a n d s 多态性 条带数 个 P o l y m o r p h i c b a n d s 带型数 个 F r a g m e n t c o m b i n a t i o n P I C值 P I C v a l u e P 1 S 0 0 1 1 2 4 1 2 7 8 2 1 6 8 8 2 0 0 7 6 8 P 2 S 0 0 5 1 1 7 6 2 0 6 2 0 1 6 6 2 4 0 8 0 5 P 3 S 0 0 6 1 1 7 1 2 1 3 1 9 5 1 2 1 2 4 7 0 8 7 4 P 4 S 0 1 2 1 2 3 5 2 5 9 2 1 9 6 4 8 0 5 5 4 P 5 S 0 1 8 1 2 0 1 2 5 1 2 1 3 8 8 1 4 0 7 4 7 P 6 S 0 2 3 1 2 3 7 2 5 8 2 1 6 5 4 1 2 0 7 2 4 P 7 S 0 2 9 1 2 0 0 2 3 7 2 0 2 7 7 2 2 0 7 7 8 P 8 S 0 3 0 1 1 9 9 2 3 5 2 1 1 9 9 1 6 0 6 9 5 P 9 S 0 3 3 1 2 0 6 2 5 5 2 1 3 1 3 1 3 2 4 0 8 2 5 P 1 0 S 0 3 4 1 1 9 8 2 7 5 2 3 1 1 0 9 2 0 0 5 4 6 P 1 1 S 0 3 5 1 1 9 5 2 5 2 2 1 0 9 9 2 4 0 8 3 0 P 1 2 S 0 4 7 1 1 2 4 1 9 6 1 9 3 1 1 1 1 3 0 0 6 9 2 P 1 3 S 0 4 9 1 2 3 0 2 3 8 2 2 5 4 4 9 0 6 6 7 P 1 4 S 0 6 1 1 2 1 2 2 8 2 2 3 5 1 7 1 7 4 3 0 8 3 0 P 1 5 S 0 6 4 1 2 4 0 2 7 5 2 1 6 1 1 9 2 2 0 7 5 2 P 1 6 S 0 7 0 1 2 3 4 2 5 8 2 1 2 8 8 1 6 0 9 0 8 P 1 7 S 0 7 9 1 2 4 8 2 6 8 2 4 1 8 8 1 8 0 7 4 4 P 1 8 S 0 9 7 1 2 6 4 2 8 6 2 4 7 4 4 7 0 4 9 4 83 第2期刘国霞等 八倍体草莓D N A指纹图谱的构建与初步遗传分析 图1 引物P10 a 和P11 b 对部分草莓样品扩增峰图 F i g 1 A m p l i f i e d p r o f i l e s o f p r i m e r P 1 0 a a n d P 1 1 b f r o m s o m e s t r a w b e r r y s a m p l e s 使用1 8对S S R荧光标记引物对8 4份草莓品 种进行扩增 共得到1 5 6个条带 其中多态性条带 1 5 0个 不同引物扩增到的多态性条带数为4 1 7 个 多态性条带带型总数为3 7 7个 采用遗传多样 性分析各引物的P I C值范围为0 4 9 4 0 9 0 8 平均 值为0 7 3 8 表2 说明这些引物多态性较高 可用 于对这些草莓品种进行多态性分析 2 2 84个草莓品种DNA指纹数据库的建立 为便于记录 将1 8对S S R引物P 1 P 1 8分别 编号为A R 每对引物在8 4个草莓品种中扩增出 的带型 按照条带的个数从少到多 条带个数相同的 按照分子量从小到大 排序 依次将不同的带型标注 为1 2 3 再将每个品种在1 8对引物上扩增带 型进行对应的数字编码 1 8 将引物编号与相应的带 型编码进行组合得到该样品在特定引物的扩增产物 编码 1 8对引物顺序串联这些编码形成该品种的 D N A指纹图谱 如P 1共扩增带型数2 0个 按照以 上原则进行编号分别为1 2 5 0 2 2 5 4 3 2 5 8 4 2 6 2 5 2 4 1 2 5 0 6 2 4 1 2 5 4 7 2 4 1 2 5 8 8 2 4 1 2 6 2 9 2 4 3 2 5 0 1 0 2 4 3 2 5 4 1 1 2 4 3 2 5 8 1 2 2 4 3 2 6 2 1 3 2 4 3 2 7 8 1 4 2 5 0 2 5 4 1 5 2 5 0 2 5 8 1 6 2 5 0 2 6 2 1 7 2 5 4 2 5 8 1 8 2 5 4 2 6 2 1 9 2 5 8 2 6 2 2 0 2 5 8 2 6 6 例如 1号样品 小桃红 由P 1扩增到多态性 带型为2 5 0 2 5 4 对应第1 4种带型 因此引物P 1对 小桃红 扩增带型编码为A 1 4 引物P 2共扩增带 型数2 4个 该引物扩增 小桃红 的带型为1 7 6 1 8 5 1 8 8 1 9 7 对应第1 7种带型 则引物P 2对 小 桃红 扩增带型编码为B 1 7 按照同样原则 将其他 引物对 小桃红 的扩增带型进行编码 按照P 1 P 1 8引物顺序将带型编码进行组合 得到 小桃红 的指纹代码为A 1 4 B 1 7 C 2 5 D 5 E 1 0 F 4 G 1 5 H 8 I 1 7 J 1 K 7 L 1 8 M 7 N 3 5 O 1 4 P 1 2 Q 6 R 1 按照此方法建立了 8 4个草莓品种的D N A指纹图谱数据库 2 3 聚类分析 基于1 8对S S R引物对8 4份草莓品种进行聚 类分析 图2 表明 8 4份草莓品种资源的遗传相似 系数范围为0 6 1 0 9 9 一些品种之间相似系数接 近0 9 9 如 红富美 红珍珠 福特拉米 红太 后 和 胡得 格林1号 聚类结果显示一些来源 接近的品种聚在一起 如红花草莓 小桃红 粉佳 人 我国的地方品种 丹东大果 石头河子 聚在一 起 荷兰西峡 荷兰草莓 聚在一起 在遗传相似 系数为0 7 4处可把供试品种划分为4个主要类群 第I类有7个品种 欧美3个 我国3个和日本1 个 第I I类有1 7个品种 以欧美品种为主 1 2个 还包括广泛用作育种亲本的日本 红颜 草莓以及我 国培育的 京怡香 草莓 红颜 是 京怡香 的亲本 之一 第 类包括1 1个品种 其中欧美品种有6个 93 中国农业大学学报2 0 2 3年第2 8卷 红富美 红珍珠 加拿大四季 聚在一起 欧美品 种 西5 贺登 和日本品种 宫本7号 聚在一起 推测这些草莓可能具有较近的亲缘关系 第 类共 4 9个品种 其中欧美品种1 7个 我国品种2 2个 日 本和韩国品种共1 0个 包括市场主栽草莓品种 甜 查理 红袖添香 妙七 香野 等 我国地方品种 丹东大果 石头河子 与我国选育品种遗传距离 较远 图中序号对应的草莓品种详见表1 I I V表示在遗传相似系数0 7 4处8 4个草莓品种所聚类成的4个类群 S e e t a b l e 1 f o r t h e d e t a i l e d s t r a w b e r r y i n f o r m a t i o n c o r r e s p o n d i n g t o t h e c o d e n u m b e r i n t h e F i g 2 I I V r e p r e s e n t s 4 g r o u p s o f 8 4 s t r a w b e r r y s a m p l e s c l u s t e r e d a t g e n e t i c s i m i l a r i t y c o e f f i c i e n t 0 7 4 图2 基于18对SSR标记的84个草莓品种聚类分析树状图 F i g 2 D e n d r o g r a m o f 8 4 s t r a w b e r r y b a s e d o n 1 8 S S R m a r k e r s 3 讨论与结论 经过不同渠道引进国外草莓资源以及各地频繁 引种 导致我国草莓名称容易出现同物异名或同名 异物等现象 如本研究中的草莓品种 都卡 疑似为 荷兰品种 因都卡 I n d u k a 草莓品种 红岗特利 德 R e d g a u n t l e d 有研究称为 红岗利特德 2 1 或 称为 红手套 8 因此 对于国外引进品种有必要 04 第2期刘国霞等 八倍体草莓D N A指纹图谱的构建与初步遗传分析 规范品种名称 建议从国外引进的品种可直接记录 英文名称 避免出现命名混乱的情况 另外 对于品 种名称不确定的资源 可以通过建立D N A指纹图 谱来区分不同品种 本研究构建了8 4个草莓品种 的D N A指纹信息数据库 为这些草莓品种准确区 分提供了方法 本研究所用的S S R引物选自苗立祥等 1 3 基于 草莓基因组序列开发的 从中筛选出的1 8对引物多 态性较好 对8 4个草莓品种扩增条带数和片段范围 与苗立祥等 1 3 报道的有些差异 其原因除了苗立祥 等 1 3 引物直接标记荧光而本研究使用M 1 3荧光引 物之外 还可能跟所用试验材料不同有关 许多研 究者应用荧光S S R标记的毛细管电泳技术检测的 方法构建了小麦 1 8 高粱 1 9 和水稻 2 0 等作物的指 纹图谱 黄志城等 1 2 参照小麦指纹编码方法 按照 固定引物顺序 串联各带型编码 形成1组代表该品 种的数字信息 构建了中国草莓已知品种D N A指 纹信息数据库 本研究参考前人的方法对每对引物 扩增草莓样品的带型进行编码 但与前人研究的区 别在于之前研究中带型编码以数字1 9和英文 A Z 记录1 0以上的带型 表示 所以指纹信息中 每一位数字或字母代表每个引物的扩增带型信息 如第2位数字或字母代表第2个引物扩增的带型特 征 而本研究中仅以数字记录带型 首次将引物进行 编号 引物编号与相应的带型编码进行组合得到该 样品在特定引物的扩增产物编码 按照1 8对引物顺 序串联这些编码形成该品种的D N A指纹图谱 与 前人指纹图谱编码方法相比 本研究采用的编码加 入引物编号 使编码更方便 不易出错 本研究基于1 8对S S R引物建立了8 4份草莓 品种资源的遗传关系 品种间遗传相似系数范围 为0 6 1 0 9 9 与韩柏明等 2 1 利用1 8对S S R引 物研究9 6份草莓资源的相似系数在0 6 2 1 0 0 的研究一致 说明现有草莓品种之间亲缘关系较 近 可能与常规杂交选育新品种的方式有关 本 研究中聚类分析发现 我国选育的品种与国外品 种混杂在一起 其可能原因是我国选育品种和地 方品种及日本品种都直接或间接来源于欧美品 种 2 1 导致遗传基础狭窄 因此今后我国草莓育 种应收集利用更多种质资源 尤其是野生资源 拓 宽草莓品种遗传基础 为培育出优质的草莓新品 种奠定基础 参考文献 References 1 邓明琴 雷家军 中国果树志 草莓卷 M 北京 中国林业出版社 2 0 0 5 D e n g M Q L e i J J ChinaFruit plantMornographofStrawberry Fragaria M B e i j i n g C h i n a F o r e s t r y P u b l i s h i n g H o u s e 2 0 0 5 i n C h i n e s e 2 F A O F o o d a n d a g r i c u l t u r e d a t a E B O L 2 0 2 2 0 6 2 0 h t t p w w w f a o o r g f a o s t a t z h d a t a Q C 3 雷家军 薛莉 代汉萍 邓明琴 世界草莓属 Fragaria 植物的种类与分 布 C 草莓研究进展 I V 北京 中国农业出版社 2 0 1 5 3 4 9 3 6 0 L e i J J X u e L D a i H P D e n g M Q S p e c i e s a n d d i s t r i b u t i o n o f t h e F r a g a r i a i n t h e w o r l d C I n AdvanceofStrawberryResearch IV B e i j i n g C h i n a A g r i c u l t u r e P r e s s 2 0 1 5 3 4 9 3 6 0 i n C h i n e s e 4 陈坚 郑益平 郭文杰 杨志敏 庄志鸿 朱炳耀 福建省草莓主栽与 引进品种的S S R分子标记鉴定 J 福建农业学报 2 0 1 8 3 3 2 1 5 0 1 5 3 C h e n J Z h e n g Y P G u o W J Y a n g Z M Z h u a n g Z H Z h u B Y I d e n t i f i c a t i o n o f m a j o r a n d i n t r o d u c e d s t r a w b e r r y c u l t i v a r s i n F u j i a n u s i n g S S R m o l e c u l a r m a r k e r s J FujianJournalofAgriculturalSciences 2 0 1 8 3 3 2 1 5 0 1 5 3 i n C h i n e s e 5 冀芦沙 肖庆振 于守超 赵燕 山东境内1 1个草莓品种的品质及遗 传特性分析 J 甘肃农业大学学报 2 0 1 2 4 7 2 3 9 4 4 J i L S X i a o Q Z Y u S C Z h a o Y N u t r i t i o n a l q u a l i t y a n d g e n e t i c c h a r a c t e r i s t i c s o f e l e v e n s t r a w b e r r y c u l t i v a r s i n S h a n d o n g P r o v i n c e J JournalofGansuAgriculturalUniversity 2 0 1 2 4 7 2 3 9 4 4 i n C h i n e s e 6 常琳琳 董静 钟传飞 孙健 孙瑞 石琨 王桂霞 张运涛 中国育成 草莓品种的系谱分析 J 果树学报 2 0 1 8 3 5 2 1 5 8 1 6 7 C h a n g L L D o n g J Z h o n g C F S u n J S u n R S h i K W a n g G X Z h a n g Y T P e d i g r e e a n a l y s i s o f s t r a w b e r r y c u l t i v a r s r e l e a s e d i n C h i n a J JournalofFruitScience 2 0 1 8 3 5 2 1 5 8 1 6 7 i n C h i n e s e 7 黄志城 徐岩 顾晓君 陈海荣 李寿国 褚云霞 顾可飞 草莓属新品 种D U S测试指南的修订 J 中国农学通报 2 0 1 3 2 9 7 1 7 3 1 7 8 H u a n g Z C X u Y G u X J C h e n H R L i S G C h u Y X G u K F R e v i s i o n o f t e s t g u i d e l i n e s o f n e w p l a n t v a r i e t i e s o f s t r a w b e r r y Fragaria L J ChineseAgriculturalScienceBulletin 2 0 1 3 2 9 7 1 7 3 1 7 8 i n C h i n e s e 8 董清华 王西成 赵密珍 宋长年 葛安静 王静 草莓E S T S S R标记 开发及在品种遗传多样性分析中的应用 J 中国农业科学 2 0 1 1 4 4 1 7 3 6 0 3 3 6 1 2 D o n g Q H W a n g X C Z h a o M Z S o n g C N G e A J W a n g J D e v e l o p m e n t o f E S T d e r i v e d S S R m a r k e r s a n d t h e i r a p p l i c a t i o n i n s t r a w b e r r y g e n e t i c d i v e r s i t y a n a l y s i s J ScientiaAgriculturaSinica 2 0 1 1 4 4 1 7 3 6 0 3 3 6 1 2 i n C h i n e s e 9 沈岚 焦云 张国芳 基于E S T S S R分子标