浙江地区非洲菊菌核病的病原鉴定及品种抗性鉴定.pdf

214 2023 年 第 64 卷 第 1 期 收 稿 日 期 2021 12 29 基 金 项 目 浙 江 省 农 业 重 大 技 术 协 同 推 广 计 划 2021XTTGHH01 3 作 者 简 介 方 丽 1978 女 浙 江 新 昌 人 硕 士 从 事 经 济 作 物 病 害 及 其 致 病 机 理 研 究 工 作 E mail fl0155 163 com 通 信 作 者 王 汉 荣 研 究 员 E mail wanghrg yahoo com cn 文 献 著 录 格 式 方 丽 叶 琪 明 郭 方 其 等 浙 江 地 区 非 洲 菊 菌 核 病 的 病 原 鉴 定 及 品 种 抗 性 鉴 定 J 浙 江 农 业 科 学 2023 64 1 214 216 DOI 10 16178 j issn 0528 9017 20220081 浙 江 地 区 非 洲 菊 菌 核 病 的 病 原 鉴 定 及 品 种 抗 性 鉴 定 方 丽 a 叶 琪 明 a 郭 方 其 b 谢 昀 烨 a 吴 超 b 武 军 a 王 汉 荣 a 浙 江 省 农 业 科 学 院 a 植 物 保 护 与 微 生 物 研 究 所 b 园 艺 研 究 所 浙 江 杭 州 310021 摘 要 菌 核 病 是 非 洲 菊 生 产 中 发 生 最 为 严 重 的 土 传 病 害 本 研 究 鉴 定 了 浙 江 非 洲 菊 生 产 中 菌 核 病 菌 的 优 势 菌 株 并 对 常 规 种 植 和 新 引 进 的 21 个 非 洲 菊 品 种 进 行 菌 核 病 的 抗 性 鉴 定 和 评 价 结 果 表 明 供 试 的 21 个 非 洲 菊 品 种 对 菌 核 病 的 抗 性 差 异 显 著 高 抗 和 抗 菌 核 病 的 品 种 为 14 个 占 66 7 中 抗 和 感 病 品 种 为 7 个 占 33 3 关 键 词 非 洲 菊 病 原 鉴 定 菌 核 病 抗 性 鉴 定 中 图 分 类 号 S436 文 献 标 志 码 A 文 章 编 号 0528 9017 2023 01 0214 03 非 洲 菊 为 菊 科 大 丁 草 属 多 年 生 草 本 植 物 又 称 扶 郎 花 太 阳 花 灯 盏 花 等 其 色 泽 艳 丽 花 型 优 美 花 色 多 样 花 期 长 不 易 衰 败 具 有 极 高 的 观 赏 价 值 和 经 济 价 值 是 深 受 大 众 欢 迎 的 鲜 切 盆 栽 和 庭 院 观 赏 植 物 1 菌 核 病 是 非 洲 菊 生 产 上 危 害 最 为 严 重 的 土 传 病 害 造 成 死 苗 缺 株 长 势 衰 弱 每 年 导 致 产 量 损 失 率 为 10 30 严 重 影 响 花 农 和 花 企 的 经 济 效 益 和 生 产 积 极 性 而 种 植 抗 性 品 种 是 预 防 非 洲 菊 菌 核 病 发 生 的 最 经 济 有 效 的 途 径 然 而 尚 未 有 关 于 非 洲 菊 菌 核 病 的 品 种 抗 性 的 系 统 研 究 包 括 接 种 方 法 抗 性 评 价 等 相 关 报 道 为 了 促 进 非 洲 菊 抗 病 性 育 种 的 发 展 本 文 对 目 前 侵 染 非 洲 菊 的 菌 核 病 菌 进 行 鉴 定 以 非 洲 菊 的 主 栽 和 新 引 进 品 种 为 对 象 建 立 对 菌 核 病 的 抗 性 水 平 和 评 价 方 法 并 对 21 个 品 种 进 行 抗 性 鉴 定 为 非 洲 菊 的 抗 菌 核 性 育 种 研 究 提 供 理 论 基 础 和 技 术 支 持 1 材 料 与 方 法 1 1 病 原 菌 的 分 离 纯 化 供 试 的 非 洲 菊 菌 核 病 菌 为 浙 江 省 嘉 兴 地 区 海 宁 种 植 基 地 的 优 势 菌 株 通 过 组 织 分 离 方 法 2 从 自 然 发 病 的 非 洲 菊 病 株 中 分 离 纯 化 获 得 致 病 力 强 人 工 接 种 后 经 相 同 方 法 分 离 获 得 菌 种 1 2 病 原 菌 的 分 子 鉴 定 将 菌 核 病 菌 移 至 新 的 PDA 培 养 基 上 25 黑 暗 培 养 5 d 后 刮 取 菌 丝 用 Invitrogen 的 HyPure 真 菌 基 因 组 DNA 提 取 试 剂 盒 Genenode 提 取 菌 核 病 菌 的 基 因 组 DNA 采 用 16S rDNA 基 因 ITS5 ITS4 GGAAGTAAAAGTCGTAAGG TCCTCCGCTTA TTGATATGC 3 扩 增 相 应 基 因 序 列 引 物 合 成 及 测 序 工 作 由 北 京 擎 科 生 物 科 技 有 限 公 司 杭 州 分 公 司 完 成 利 用 软 件 MEGA7 0 将 分 离 到 的 菌 株 与 已 发 表 的 菌 核 病 菌 菌 株 构 建 系 统 发 育 树 分 析 菌 株 间 的 遗 传 关 系 1 3 接 种 方 法 将 菌 核 病 菌 接 种 于 新 的 PDA 培 养 基 上 置 于 25 霉 菌 培 养 箱 黑 暗 培 养 4 d 后 沿 菌 落 边 缘 用 打 孔 器 打 出 直 径 为 5 mm 的 菌 块 将 菌 块 置 于 非 洲 菊 植 株 的 叶 柄 底 部 每 株 1 个 菌 丝 块 每 个 品 种 接 种 30 株 左 右 用 透 明 塑 料 膜 保 湿 培 养 48 h 接 种 后 每 天 观 察 并 记 录 植 株 发 病 情 况 1 4 供 试 品 种 系 及 抗 性 鉴 定 方 法 2021 年 春 季 供 试 非 洲 菊 品 种 包 括 世 纪 红 水 粉 和 桃 红 3 个 常 规 种 植 品 种 以 及 理 想 太 阳 风 暴 绿 球 50 拉 丝 6 号 金 桂 50 拉 丝 1 号 拉 丝 8 号 拉 丝 4 号 粉 佳 人 大 雪 桔 亮 粉 美 满 香 槟 粉 拉 丝 福 娃 黑 杰 克 安 娜 柯 莱 托 和 安 迪 奶 油 18 个 新 引 进 的 品 种 非 洲 菊 种 植 于 浙 江 省 农 业 科 学 院 桑 园 基 地 大 棚 内 的 箱 式 框 内 选 取 苗方 丽 等 浙 江 地 区 非 洲 菊 菌 核 病 的 病 原 鉴 定 及 品 种 抗 性 鉴 定 215 龄 为 3 个 月 左 右 成 株 用 菌 丝 块 方 法 同 上 接 种 菌 核 病 2021 年 11 月 3 日 接 种 前 后 1 个 月 内 不 使 用 任 何 杀 菌 剂 其 他 栽 培 管 理 如 常 设 置 清 水 对 照 1 5 非 洲 菊 菌 核 病 病 级 分 级 标 准 根 据 非 洲 菊 菌 核 病 发 生 发 展 规 律 的 调 查 分 析 参 考 油 菜 菌 核 病 和 白 菜 菌 核 病 4 5 的 抗 性 分 级 和 评 价 标 准 采 用 植 株 发 病 情 况 与 菌 丝 菌 核 形 成 情 况 相 结 合 确 定 分 级 标 准 0 级 为 全 株 无 病 1 级 为 部 分 叶 片 萎 焉 5 叶 片 枯 死 3 级 为 部 分 叶 片 萎 焉 或 有 病 斑 枯 死 的 叶 片 占 总 叶 片 数 的 5 10 5 级 为 10 25 叶 片 萎 焉 或 枯 死 或 枯 死 叶 片 或 花 葶 出 现 白 色 菌 丝 或 菌 丝 团 7 级 为 25 50 叶 片 萎 焉 或 枯 死 或 枯 死 叶 片 或 花 葶 出 现 白 色 菌 丝 或 菌 丝 团 9 级 为 50 以 上 的 叶 片 萎 焉 或 枯 死 或 心 叶 萎 焉 花 葶 倒 伏 叶 片 或 花 葶 出 现 菌 丝 团 或 菌 核 1 6 非 洲 菊 菌 核 病 病 情 调 查 方 法 病 情 调 查 一 般 在 接 种 后 20 25 d 也 可 根 据 对 照 品 种 发 病 至 最 高 病 级 时 的 时 间 作 适 当 调 整 每 小 区 均 调 查 全 部 植 株 调 查 发 病 株 数 和 发 病 病 级 并 记 录 1 7 菌 核 病 抗 感 的 划 分 根 据 上 述 病 情 指 数 将 其 划 分 为 6 个 类 型 免 疫 I 无 病 高 抗 HR 病 情 指 数 为 0 10 抗 病 R 病 情 指 数 为 10 30 中 抗 MR 病 情 指 数 为 30 50 感 病 S 病 情 指 数 为 50 70 高 感 HS 病 情 指 数 为 70 100 2 结 果 与 分 析 2 1 非 洲 菊 菌 核 病 的 田 间 症 状 菌 核 病 发 病 初 期 表 现 为 老 叶 枯 死 增 加 长 势 衰 弱 分 蘖 减 少 随 着 病 原 菌 的 进 一 步 侵 入 多 个 叶 片 萎 焉 叶 片 出 现 枯 黄 色 的 枯 死 病 斑 甚 至 新 叶 或 花 葶 萎 焉 全 株 枯 死 在 湿 度 高 时 可 见 发 病 部 位 出 现 大 量 白 色 菌 丝 和 菌 核 低 温 高 湿 有 利 于 促 进 菌 核 病 的 发 生 6 秋 冬 季 为 非 洲 菊 菌 核 病 发 生 的 主 要 时 期 2 2 非 洲 菊 的 菌 核 病 菌 的 形 态 鉴 定 菌 核 病 菌 菌 株 在 PDA 平 板 上 25 黑 暗 培 养 下 生 长 迅 速 放 射 状 生 长 平 铺 于 培 养 基 表 面 生 长 速 度 为 2 3 cm d 1 菌 丝 白 色 长 絮 状 随 着 培 养 时 间 的 增 加 菌 落 边 缘 菌 丝 集 结 成 团 初 为 白 色 后 渐 变 为 黑 色 表 面 粗 糙 圆 形 或 不 规 则 形 菌 核 直 径 2 10 mm 图 1 图 1 非 洲 菊 菌 核 病 田 间 症 状 及 病 原 菌 在 PDA 上 的 生 长 情 况 2 3 非 洲 菊 的 菌 核 病 菌 的 分 子 鉴 定 本 研 究 扩 增 获 得 非 洲 菊 菌 核 病 菌 jh fzj 1 的 16S rDNA 基 因 序 列 得 到 1 条 大 小 约 为 589 bp 的 产 物 将 该 序 列 与 NCBI 数 据 库 中 已 知 多 个 序 列 构 建 系 统 发 育 树 并 以 B o t r y t i s c i n e r e a strain strain QS 1 MN589850 1 为 外 组 结 果 图 2 表 明 本 研 究 分 离 获 得 的 菌 株 jh fzj 1 与 已 发 表 的 S c l e r o t i n i a s c l e r o t i o r u m 株 系 为 同 一 个 分 枝 但 相 似 率 较 低 因 此 侵 染 非 洲 菊 的 菌 核 菌 为 S c l e r o t i n i a s c l e r o t i o r u m Lib de Bary 这 与 曹 奕 鸯 7 的 结 果 一 致 2 4 非 洲 菊 对 菌 核 病 的 品 种 抗 病 性 筛 选 对 21 个 非 洲 菊 品 种 进 行 田 间 接 种 鉴 定 接 种 5 d 后 部 分 非 洲 菊 叶 片 可 见 明 显 病 斑 随 着 时 间 的 推 移 病 斑 持 续 扩 展 接 种 20 d 后 调 查 病 害 发 生 情 况 如 表 1 所 示 不 同 非 洲 菊 品 种 感 染 菌 核 病 的 病 情 指 数 差 异 显 著 对 菌 核 病 抗 性 水 平 也 不 相 同 其 中 高 抗 的 品 种 为 有 3 个 占 鉴 定 材 料 的 14 3 抗 病 和 中 抗 病 品 种 分 别 为 11 和 3 个 分 别 占 鉴 定 材 料 的 52 4 和 14 3 感 病 和 高 感 品 种 分 别 为 3 个 和 1 个 分 别 占 鉴 定 材 料 的 14 3 和 4 8 其 中 常 规 种 植 品 种 基 本 为 抗 病 仅 水 粉 为 中 抗 其 中 新 引 进 的 品 种 中 抗 病 及 高 抗 病 品 种 占 比 为 62 5 大 大 降 低 了 非 洲 菊 种 植 过 程 中 菌 核 病 的 发 病 率 3 讨 论 菌 核 病 是 一 种 世 界 性 分 布 的 土 传 真 菌 性 病 害 216 2023 年 第 64 卷 第 1 期 图 2 基 于 ITS 核 苷 酸 序 列 非 洲 菊 菌 核 病 菌 的 系 统 发 育 树 表 1 非 洲 菊 品 种 对 菌 核 病 的 抗 性 评 价 品 种 病 情 指 数 评 价 理 想 7 4 HR 太 阳 风 暴 30 0 R 绿 球 50 69 9 S 拉 丝 6 号 18 1 R 金 桂 50 22 2 R 拉 丝 1 号 23 6 R 拉 丝 8 号 8 9 HR 拉 丝 4 号 14 3 R 粉 佳 人 44 4 MR 大 雪 桔 18 5 R 亮 粉 77 8 HS 美 满 51 1 S 香 槟 55 1 S 世 纪 红 21 8 R 水 粉 33 4 MR 桃 红 26 3 R 粉 拉 丝 42 5 MR 福 娃 7 7 HR 黑 杰 克 14 6 R 安 娜 柯 莱 托 16 3 R 柯 迪 奶 油 14 1 R 其 中 核 盘 菌 引 起 的 菌 核 病 就 可 危 害 约 75 科 278 属 408 种 植 物 菌 核 病 作 为 非 洲 菊 生 产 栽 培 过 程 中 发 生 最 为 严 重 的 土 传 病 害 整 个 生 育 期 均 可 发 病 并 且 条 件 适 宜 时 发 病 迅 猛 导 致 产 区 持 续 缺 苗 死 苗 目 前 该 病 的 防 控 主 要 以 栽 培 管 理 化 学 药 剂 防 治 和 局 部 土 壤 消 毒 为 主 要 技 术 手 段 但 由 于 土 地 资 源 的 限 制 轮 作 困 难 菌 核 病 的 病 害 发 生 频 繁 应 用 抗 病 品 种 是 非 洲 菊 菌 核 病 防 治 中 最 经 济 有 效 的 方 法 而 当 前 非 洲 菊 的 品 种 选 育 仍 以 花 型 花 色 株 高 叶 形 等 栽 培 指 标 为 衡 量 标 准 花 卉 的 抗 病 性 育 种 研 究 起 步 晚 相 关 的 研 究 论 文 少 对 非 洲 菊 的 抗 性 等 级 和 评 价 指 标 研 究 尚 属 空 白 本 研 究 对 浙 江 地 区 非 洲 菊 菌 核 病 的 优 势 菌 种 进 行 了 鉴 定 确 定 了 非 洲 菊 菌 核 病 的 菌 种 为 S c l e r o t i n i a s c l e r o t i o r u m Lib de Bary 同 时 也 对 市 场 上 普 遍 种 植 和 最 新 引 进 的 共 21 个 非 洲 菊 品 种 进 行 了 菌 核 病 的 抗 性 筛 选 发 现 不 同 非 洲 菊 品 种 对 菌 核 病 的 抗 性 具 有 显 著 差 异 性 高 抗 或 抗 菌 核 病 的 非 洲 菊 品 种 占 66 7 以 上 中 抗 及 以 下 的 非 洲 菊 品 种 约 占 33 3 常 规 种 植 品 种 和 新 引 进 的 品 种 均 以 抗 病 品 种 为 主 这 为 非 洲 菊 菌 核 病 的 发 生 提 供 了 较 好 的 天 然 屏 障 参 考 文 献 1 李 有 清 吕 长 平 胡 春 梅 等 非 洲 菊 种 质 资 源 研 究 进 展 J 湖 南 农 业 科 学 2014 5 53 55 2 方 中 达 植 病 研 究 方 法 M 3 版 北 京 中 国 农 业 出 版 社 1998 3 WHITE T J BRUNS T LEE S et al Amplification and direct sequencing of fungal ribosomal RNA genes for phylogenetics M INNIS M GEL FAND J SAINSKY J et al PCR protocols a guide to methods and applications San Diego Academic Press 1990 315 322 4 范 会 云 刘 小 娟 刘 子 荣 等 不 同 油 菜 品 种 对 油 菜 菌 核 病 的 田 间 抗 性 鉴 定 J 中 国 农 学 通 报 2019 35 31 124 128 5 孙 叶 烁 郝 玲 玉 张 杰 等 大 白 菜 菌 核 病 抗 性 鉴 定 方 法 研 究 J 西 北 农 林 科 技 大 学 学 报 自 然 科 学 版 2019 12 47 123 129 6 汪 国 森 王 崇 仁 吴 友 三 核 盘 菌 属 真 菌 有 性 世 代 的 研 究 J 沈 阳 农 业 大 学 学 报 1992 23 4 286 291 7 曹 奕 鸯 夏 朝 水 陈 昌 铭 等 非 洲 菊 菌 核 病 病 原 菌 的 分 离 鉴 定 及 抑 菌 药 剂 筛 选 J 福 建 农 业 学 报 2021 36 10 1210 1216 责 任 编 辑 张 瑞 麟