ALS抑制类除草剂对西瓜子叶外植体分化的研究_万丽丽.pdf

湖 北 农 业 科 学 2 0 2 3 年 收 稿 日 期 2 0 2 2 0 9 0 7 基 金 项 目 湖 北 省 重 点 研 发 项 目 2 0 2 2 B B A 0 0 6 2 2 0 2 1 B B A 1 0 1 天 山 创 新 团 队 计 划 项 目 2 0 2 2 D 1 4 0 1 5 武 汉 市 生 物 育 种 关 键 技 术 及 新 品 种 培 育 重 大 专 项 2 0 2 2 0 2 1 3 0 2 0 2 4 8 5 2 武 汉 市 农 业 科 学 院 创 新 项 目 X K C X 2 0 2 2 0 4 1 作 者 简 介 万 丽 丽 1 9 8 2 女 湖 北 武 汉 人 博 士 农 艺 师 主 要 从 事 农 作 物 生 物 技 术 育 种 研 究 工 作 电 话 1 3 0 1 8 0 9 5 1 9 3 电 子 信 箱 w a n l i l i 1 3 2 2 6 1 6 3 c o m 通 信 作 者 汤 谧 1 9 8 1 湖 北 武 汉 人 正 高 级 农 艺 师 博 士 主 要 从 事 西 瓜 新 品 种 研 究 选 育 及 推 广 工 作 电 子 信 箱 x t g y j s w u h a n a g r i c o m 第 6 2 卷 第 1 1 期 2 0 2 3 年 1 1 月 湖 北 农 业 科 学 H u b e i A g r i c u l t u r a l S c i e n c e s V o l 6 2 N o 1 1 N o v 2 0 2 3 万 丽 丽 王 转 茸 汤 谧 等 A L S 抑 制 类 除 草 剂 对 西 瓜 子 叶 外 植 体 分 化 的 研 究 J 湖 北 农 业 科 学 2 0 2 3 6 2 1 1 2 0 2 2 0 6 2 1 3 人 口 的 增 长 和 极 端 气 候 环 境 给 农 作 物 的 生 产 带 来 挑 战 提 高 作 物 的 产 量 和 对 逆 境 胁 迫 的 适 应 性 是 育 种 工 作 者 需 要 重 点 关 注 的 问 题 田 间 杂 草 与 农 作 物 竞 争 光 照 水 肥 和 氧 气 影 响 农 作 物 的 产 量 和 品 质 1 化 学 除 草 是 现 代 农 业 生 产 中 控 制 杂 草 的 主 要 手 段 乙 酰 乳 酸 合 成 酶 A c e t o l a c t a t e s y n t h a s e A L S A L S 抑 制 类 除 草 剂 对 西 瓜 子 叶 外 植 体 分 化 的 研 究 万 丽 丽 1 王 转 茸 1 汤 谧 1 曾 红 霞 1 张 学 军 2 3 张 娜 1 任 俭 1 孙 玉 宏 1 朱 志 坤 4 1 武 汉 市 农 业 科 学 院 武 汉 4 3 0 0 6 5 2 新 疆 农 业 科 学 院 哈 密 瓜 研 究 中 心 乌 鲁 木 齐 8 3 0 0 9 1 3 新 疆 农 业 科 学 院 海 南 三 亚 农 作 物 育 种 试 验 中 心 海 南 三 亚 5 7 2 0 1 4 4 武 汉 市 蔡 甸 区 农 业 农 村 局 武 汉 4 3 0 1 9 9 摘 要 以 西 瓜 自 交 系 D 6 6 的 子 叶 为 外 植 体 将 外 植 体 置 于 含 有 不 同 浓 度 乙 酰 乳 酸 合 成 酶 A c e t o l a c t a t e s y n t h a s e A L S 抑 制 剂 类 除 草 剂 S U 除 草 剂 I M I 除 草 剂 的 筛 选 培 养 基 上 根 据 外 植 体 的 分 化 率 确 定 最 适 宜 的 除 草 剂 浓 度 探 讨 不 同 植 物 生 长 调 节 剂 6 B A N A A 浓 度 配 比 对 不 定 芽 的 增 殖 作 用 结 果 表 明 S U 除 草 剂 中 苯 磺 隆 和 噻 吩 磺 隆 的 最 适 宜 浓 度 均 为 0 2 5 m g L 苄 嘧 磺 隆 的 最 适 宜 浓 度 为 0 5 0 m g L I M I 除 草 剂 中 灭 草 喹 和 灭 草 烟 的 最 适 宜 浓 度 均 为 1 5 0 m g L 在 M S 1 0 m g L 6 B A 0 5 m g L N A A 培 养 基 中 不 定 芽 的 增 殖 率 最 高 为 2 8 7 0 根 据 西 瓜 自 交 系 材 料 D 6 6 确 定 的 除 草 剂 最 适 宜 浓 度 同 样 适 用 于 西 瓜 杂 交 种 武 农 8 号 黑 美 人 甜 王 1 号 早 佳 8 4 2 4 子 叶 外 植 体 的 筛 选 试 验 关 键 词 子 叶 外 植 体 A L S 抑 制 类 除 草 剂 西 瓜 自 交 系 西 瓜 杂 交 种 不 定 芽 增 殖 S U 除 草 剂 I M I 除 草 剂 中 图 分 类 号 S 6 5 1 文 献 标 识 码 A 文 章 编 号 0 4 3 9 8 1 1 4 2 0 2 3 1 1 0 2 0 2 0 5 D O I 1 0 1 4 0 8 8 j c n k i i s s n 0 4 3 9 8 1 1 4 2 0 2 3 1 1 0 3 5 开 放 科 学 资 源 服 务 标 识 码 O S I D S t u d y o n t h e d i f f e r e n t i a t i o n o f w a t e r m e l o n c o t y l e d o n e x p l a n t s b y A L S i n h i b i t o r h e r b i c i d e s W A N L i l i 1 W A N G Z h u a n r o n g 1 T A N G M i 1 Z E N G H o n g x i a 1 Z H A N G X u e j u n 2 3 Z H A N G N a 1 R E N J i a n 1 S U N Y u h o n g 1 Z H U Z h i k u n 4 1 W u h a n A c a d e m y o f A g r i c u l t u r a l S c i e n c e s W u h a n 4 3 0 0 6 5 C h i n a 2 T h e R e s e a r c h C e n t e r o f H a m i m e l o n X i n j i a n g A c a d e m y o f A g r i c u l t u r a l S c i e n c e s U r u m q i 8 3 0 0 9 1 C h i n a 3 H a i n a n S a n y a C r o p B r e e d i n g E x p e r i m e n t a l C e n t e r X i n j i a n g A c a d e m y o f A g r i c u l t u r a l S c i e n c e s S a n y a 5 7 2 0 1 4 H a i n a n C h i n a 4 C a i d i a n D i s t r i c t B u r e a u o f A g r i c u l t u r e a n d R u r a l A f f a i r s W u h a n 4 3 0 1 9 9 C h i n a A b s t r a c t U s i n g t h e c o t y l e d o n s o f w a t e r m e l o n i n b r e d l i n e D 6 6 a s e x p l a n t s t h e e x p l a n t s w e r e p l a c e d o n a s c r e e n i n g m e d i u m c o n t a i n i n g d i f f e r e n t c o n c e n t r a t i o n s o f a c e t o l a c t a t e s y n t h a s e A L S i n h i b i t o r h e r b i c i d e s S U h e r b i c i d e s I M I h e r b i c i d e s a n d t h e o p t i m a l h e r b i c i d e c o n c e n t r a t i o n w a s d e t e r m i n e d b a s e d o n t h e d i f f e r e n t i a t i o n r a t e o f t h e e x p l a n t s T h e e f f e c t o f d i f f e r e n t p l a n t g r o w t h r e g u l a t o r s 6 B A N A A c o n c e n t r a t i o n r a t i o s o n t h e p r o l i f e r a t i o n o f a d v e n t i t i o u s b u d s w a s e x p l o r e d T h e r e s u l t s s h o w e d t h a t t h e o p t i m a l c o n c e n t r a t i o n s o f t r i b e n u r o n m e t h y 1 a n d t h i f e n s u l f u r o n m e t h y 1 i n S U h e r b i c i d e s w e r e b o t h 0 2 5 m g L w h i l e t h e o p t i m a l c o n c e n t r a t i o n o f b e n s u l f u r o n w a s 0 5 0 m g L t h e m o s t s u i t a b l e c o n c e n t r a t i o n s f o r I M I h e r b i c i d e s s u c h i m a z a q u i n a n d i m a z a p y r w e r e b o t h 1 5 0 m g L t h e h i g h e s t p r o l i f e r a t i o n r a t e o f a d v e n t i t i o u s b u d s w a s o b s e r v e d i n M S 1 0 m g L 6 B A 0 5 m g L N A A m e d i u m w h i c h w a s 2 8 7 0 t h e o p t i m a l c o n c e n t r a t i o n o f h e r b i c i d e s d e t e r m i n e d b a s e d o n w a t e r m e l o n i n b r e d l i n e D 6 6 m a t e r i a l s w a s a l s o s u i t a b l e f o r s c r e e n i n g c o t y l e d o n e x p l a n t s o f w a t e r m e l o n h y b r i d s W u n o n g 8 B l a c k B e a u t y T i a n w a n g 1 Z a o j i a 8 4 2 4 K e y w o r d s c o t y l e d o n e x p l a n t s A L S i n h i b i t o r y h e r b i c i d e s w a t e r m e l o n i n b r e d l i n e w a t e r m e l o n h y b r i d a d v e n t i t i o u s b u d p r o l i f e r a t i o n S U h e r b i c i d e s I M I h e r b i c i d e s第 1 1 期 抑 制 剂 类 除 草 剂 具 有 广 谱 性 活 性 高 选 择 性 强 和 生 物 安 全 性 高 的 优 势 在 田 间 杂 草 防 控 中 被 广 泛 应 用 主 要 包 括 5 个 不 同 结 构 的 化 合 物 家 族 分 别 是 磺 酰 脲 类 S u l f o n y l u r e a s S U 咪 唑 啉 酮 类 I m i d a z o l i n o n e s I M I 三 唑 嘧 啶 磺 酰 胺 类 T r i a z o l o p y r i m i d i n e s T P 嘧 啶 水 杨 酸 类 P y r i m i d y l b e n z o a t e s P B 和 磺 酰 氨 羧 基 三 唑 啉 酮 类 S u l f o n l y a m i n o c a r b o n y l t r i a z o l i n o n e s S C T 2 S U 和 I M I 是 常 用 的 除 草 剂 这 2 类 除 草 剂 主 要 用 于 1 年 生 或 多 年 生 阔 叶 杂 草 的 防 除 S U 除 草 剂 主 要 有 苯 磺 隆 T r i b e n u r o n m e t h y l T M 噻 吩 磺 隆 T h i f e n s u l f u r o n m e t h y l H A R 苄 嘧 磺 隆 B e n s u l f u r o n m e t h y l B M 等 I M I 除 草 剂 主 要 有 灭 草 烟 I m a z e t h a p y r I P 和 灭 草 喹 I m a z a q u i n I Q 等 A L S 抑 制 类 除 草 剂 的 作 用 靶 标 是 植 物 内 源 A L S 通 过 阻 断 底 物 进 入 A L S 酶 的 活 性 位 点 并 与 之 结 合 进 而 影 响 缬 氨 酸 亮 氨 酸 异 亮 氨 酸 等 支 链 氨 基 酸 的 生 物 合 成 影 响 植 物 体 内 的 蛋 白 代 谢 最 终 灭 杀 植 物 3 尽 管 A L S 抑 制 剂 类 除 草 剂 具 有 诸 多 优 势 但 其 作 用 位 点 单 一 长 期 高 频 施 用 容 易 产 生 杂 草 耐 受 性 进 而 产 生 抗 药 性 杂 草 种 群 植 物 对 A L S 抑 制 剂 类 除 草 剂 产 生 的 抗 性 机 制 如 下 靶 标 抗 性 T a r g e t s i t e r e s i s t a n c e T S R 靶 标 基 因 A L S 保 守 区 域 发 生 突 变 引 起 氨 基 酸 的 改 变 导 致 酶 结 构 或 者 空 间 构 象 变 化 对 除 草 剂 的 敏 感 性 降 低 进 而 产 生 抗 性 A L S 蛋 白 质 的 研 究 发 现 A 9 6 P 1 7 1 A 1 7 9 W 5 4 8 和 S 6 2 7 5 个 高 度 保 守 结 构 域 中 氨 基 酸 突 变 会 提 高 植 株 对 除 草 剂 的 抗 性 4 5 非 靶 标 抗 性 N o n t a r g e t s i t e r e s i s t a n c e N T S R 通 过 减 少 除 草 剂 的 吸 收 转 运 和 活 化 能 力 提 高 除 草 剂 解 毒 降 解 和 诱 导 损 伤 修 复 能 力 6 细 胞 色 素 P 4 5 0 单 氧 化 酶 谷 胱 甘 肽 转 移 酶 G l u t a t h i o n e S t r a n s f e r a s e G S T S 和 糖 基 转 移 酶 等 通 过 催 化 除 草 剂 脱 烷 基 化 环 甲 基 羟 基 化 芳 环 的 羟 基 化 脱 硫 氧 化 或 者 催 化 有 害 物 质 的 亲 电 子 基 团 与 还 原 型 谷 胱 甘 肽 的 巯 基 偶 联 增 加 疏 水 性 使 有 害 物 质 更 容 易 穿 透 细 胞 膜 分 解 排 出 7 9 基 于 抗 A L S 抑 制 剂 类 除 草 剂 的 作 用 机 理 通 过 多 途 径 获 得 新 型 A L S 抑 制 剂 类 除 草 剂 抗 性 资 源 是 解 决 杂 草 抗 药 性 的 有 效 策 略 目 前 有 学 者 已 经 通 过 种 子 E M S 诱 变 与 除 草 剂 筛 选 相 结 合 植 株 体 细 胞 或 者 小 孢 子 细 胞 与 除 草 剂 共 培 养 等 方 式 获 得 自 发 突 变 的 抗 性 种 子 和 抗 性 细 胞 系 1 0 1 2 随 着 生 物 技 术 的 快 速 发 展 利 用 转 基 因 和 基 因 编 辑 技 术 实 现 A L S 与 除 草 剂 结 合 位 点 的 突 变 快 速 创 制 抗 除 草 剂 的 种 质 1 3 1 6 玉 米 A L S 基 因 1 6 5 位 S e r 替 换 为 P r o 获 得 抗 氯 磺 隆 除 草 剂 的 玉 米 种 质 西 瓜 内 源 A L S 基 因 1 9 0 位 P r o 替 换 为 S e r 获 得 抗 除 草 剂 的 西 瓜 种 质 1 7 此 外 随 着 基 因 编 辑 工 具 的 优 化 利 用 单 碱 基 编 辑 器 构 建 A L S 基 因 饱 合 突 变 体 库 能 够 快 速 获 得 抗 除 草 剂 的 基 因 资 源 利 用 农 杆 菌 介 导 的 遗 传 转 化 方 法 在 含 有 适 宜 除 草 剂 浓 度 的 培 养 基 上 筛 选 植 物 的 外 植 体 能 够 获 得 抗 A L S 抑 制 类 除 草 剂 的 新 种 质 资 源 1 8 2 0 遗 传 转 化 的 程 序 包 含 农 杆 菌 侵 染 共 培 养 选 择 培 养 分 化 培 养 和 植 株 再 生 等 遗 传 转 化 后 的 组 织 培 养 程 序 中 可 以 施 加 不 同 类 型 的 A L S 抑 制 类 除 草 剂 作 为 再 生 细 胞 的 选 择 剂 经 过 分 化 培 养 获 得 抗 不 同 类 型 除 草 剂 的 再 生 植 株 不 同 的 作 物 种 类 外 植 体 类 型 对 除 草 剂 的 敏 感 性 存 在 差 异 筛 选 适 宜 的 除 草 剂 浓 度 对 鉴 定 抗 除 草 剂 种 质 资 源 显 得 尤 为 重 要 本 研 究 以 西 瓜 子 叶 为 试 验 材 料 置 于 不 同 浓 度 A L S 抑 制 类 除 草 剂 的 培 养 基 中 研 究 除 草 剂 对 西 瓜 组 织 培 养 外 植 体 再 生 的 影 响 为 建 立 高 效 的 西 瓜 抗 除 草 剂 遗 传 转 化 体 系 提 供 科 学 依 据 1 材 料 与 方 法 1 1 材 料 试 验 材 料 为 西 瓜 自 交 系 D 6 6 西 瓜 杂 交 种 武 农 8 号 黑 美 人 甜 王 1 号 早 佳 8 4 2 4 1 2 试 剂 M S 培 养 基 含 维 生 素 购 自 荷 兰 D u c h e f a 公 司 植 物 生 长 调 节 剂 6 B A 1 m g m L 和 I A A 1 m g m L 均 购 自 生 工 生 物 工 程 上 海 股 份 有 限 公 司 琼 脂 粉 A g a r 西 格 玛 奥 德 里 奇 上 海 贸 易 有 限 公 司 抑 菌 剂 特 美 汀 均 购 自 上 海 泰 坦 科 技 股 份 有 限 公 司 A L S 抑 制 类 除 草 剂 磺 酰 脲 类 的 苯 磺 隆 噻 吩 磺 隆 苄 嘧 磺 隆 和 咪 唑 啉 酮 类 的 灭 草 喹 灭 草 烟 均 购 自 西 格 玛 奥 德 里 奇 上 海 贸 易 有 限 公 司 1 3 方 法 1 3 1 A L S 抑 制 类 除 草 剂 的 配 制 分 别 称 取 1 0 m g 苯 磺 隆 噻 吩 磺 隆 苄 嘧 磺 隆 灭 草 烟 和 灭 草 喹 固 体 粉 末 用 1 0 0 L 2 m o l L N a O H 液 体 溶 解 最 后 用 去 离 子 水 定 容 1 3 2 除 草 剂 筛 选 西 瓜 种 子 置 于 7 5 乙 醇 中 消 毒 3 0 s 1 5 次 氯 酸 钠 消 毒 2 0 m i n 无 菌 去 离 子 水 冲 洗 3 5 次 接 种 于 M S 0 4 5 m g L 6 B A 培 养 基 2 6 暗 培 养 2 3 d 直 至 胚 根 伸 长 至 0 2 0 5 c m 从 子 叶 和 胚 根 接 触 位 置 切 开 去 除 子 叶 远 轴 端 1 3 的 部 分 将 剩 下 的 2 3 子 叶 作 为 外 植 体 将 外 植 体 转 移 至 除 草 剂 筛 选 培 养 基 M S 1 0 m g L 6 B A 除 草 剂 0 8 g L A g a r 2 0 0 m g L 特 美 汀 培 养 基 其 中 除 草 剂 分 别 为 T M H A R B M I Q 和 I P S U 除 草 剂 设 置 不 同 浓 度 A 0 0 1 m g L B 0 0 5 m g L C 0 2 5 m g L D 0 5 0 m g L 苯 磺 隆 除 草 剂 对 应 的 筛 选 培 养 基 分 别 为 T M A 万 丽 丽 等 A L S 抑 制 类 除 草 剂 对 西 瓜 子 叶 外 植 体 分 化 的 研 究 2 0 3湖 北 农 业 科 学 2 0 2 3 年 T M B T M C T M D 噻 吩 磺 隆 除 草 剂 对 应 的 筛 选 培 养 基 分 别 为 H A R A H A R B H A R C H A R D 苄 嘧 磺 隆 除 草 剂 对 应 的 筛 选 培 养 基 分 别 为 B M A B M B B M C B M D I M I 除 草 剂 设 置 不 同 浓 度 a 0 2 5 m g L b 0 5 0 m g L c 1 0 0 m g L d 1 5 0 m g L 灭 草 喹 除 草 剂 对 应 的 筛 选 培 养 基 分 别 为 I Q a I Q b I Q c I Q d 灭 草 烟 除 草 剂 对 应 的 筛 选 培 养 基 分 别 为 I P a I P b I P c I P d 不 含 有 除 草 剂 的 培 养 基 为 对 照 C K 组 织 培 养 的 温 度 为 2 5 2 光 照 度 为 1 5 0 0 3 0 0 0 l x 1 6 h 光 照 8 h 黑 暗 培 养 每 个 处 理 3 次 重 复 分 别 在 培 养 1 0 2 5 3 5 d 后 记 录 外 植 体 的 分 化 率 计 算 公 式 如 下 分 化 率 分 化 出 愈 伤 数 或 者 不 定 芽 的 外 植 体 数 接 种 外 植 体 总 数 1 0 0 1 死 亡 率 外 植 体 死 亡 数 接 种 外 植 体 总 数 1 0 0 2 1 3 3 西 瓜 子 叶 诱 导 不 定 芽 将 诱 导 生 成 的 1 2 c m 不 定 芽 转 移 到 含 有 不 同 浓 度 6 B A 和 N A A 的 M S 培 养 基 中 其 中 6 B A 浓 度 分 别 为 0 5 1 0 2 0 m g L N A A 浓 度 分 别 为 0 1 0 5 1 5 m g L 每 个 处 理 接 种 6 8 个 不 定 芽 3 次 重 复 3 0 d 后 统 计 芽 增 殖 率 计 算 公 式 如 下 芽 增 殖 率 新 增 出 芽 数 原 有 芽 数 1 0 0 3 1 3 4 数 据 分 析 试 验 数 据 用 E x c e l 2 0 1 7 软 件 统 计 在 S P S S 2 6 0 软 件 中 采 用 D u n c a n s 法 进 行 多 组 样 本 间 差 异 显 著 性 分 析 2 结 果 与 分 析 2 1 S U 除 草 剂 对 西 瓜 子 叶 外 植 体 的 分 化 作 用 将 西 瓜 自 交 系 D 6 6 的 子 叶 作 为 外 植 体 置 于 不 同 类 型 和 浓 度 的 S U 除 草 剂 筛 选 培 养 基 1 0 2 5 3 5 d 后 统 计 外 植 体 的 分 化 率 和 死 亡 率 图 1 由 表 1 表 2 表 3 可 知 随 着 S U 除 草 剂 浓 度 的 增 加 外 植 体 死 亡 率 呈 上 升 趋 势 分 化 率 呈 下 降 趋 势 外 植 体 在 0 2 5 m g L 苯 磺 隆 培 养 基 上 培 养 1 0 d 后 外 植 体 的 分 化 率 为 0 培 养 3 5 d 后 外 植 体 的 死 亡 率 为 4 2 0 外 植 体 在 0 2 5 m g L 噻 吩 磺 隆 培 养 基 上 培 养 1 0 d 后 外 植 体 的 分 化 率 为 0 培 养 3 5 d 后 外 植 体 的 死 亡 率 为 5 5 7 在 0 5 0 m g L 苄 嘧 磺 隆 培 养 基 上 培 养 1 0 d 后 外 植 体 的 分 化 率 为 0 培 养 3 5 d 后 外 植 体 的 死 亡 率 为 5 2 7 本 试 验 中 筛 选 的 是 非 转 基 因 西 瓜 材 料 外 植 体 没 有 分 化 表 明 该 处 理 下 外 植 体 不 具 备 分 化 能 力 为 今 后 开 展 转 基 因 抗 除 草 剂 西 瓜 种 质 的 筛 选 提 供 参 考 依 据 因 此 将 最 早 出 现 外 植 体 分 化 率 为 0 时 除 草 剂 的 浓 度 定 义 为 最 适 宜 筛 选 浓 度 苯 磺 隆 和 噻 吩 磺 隆 除 草 剂 的 最 适 宜 筛 选 浓 度 均 为 0 2 5 m g L 苄 嘧 磺 隆 的 最 适 宜 筛 选 浓 度 为 0 5 0 m g L a b c d e f g h i a b c 分 别 为 在 筛 选 培 养 基 M S 1 0 m g L 6 B A 0 2 5 m g L 苯 磺 隆 0 8 g L A g a r 2 0 0 m g L 特 美 汀 上 生 长 1 0 2 5 3 5 d 的 子 叶 外 植 体 d e f 分 别 为 在 筛 选 培 养 基 M S 1 0 m g L 6 B A 0 2 5 m g L 噻 吩 磺 隆 0 8 g L A g a r 2 0 0 m g L 特 美 汀 上 生 长 1 0 2 5 3 5 d 的 子 叶 外 植 体 g h i 分 别 为 在 筛 选 培 养 基 M S 1 0 m g L 6 B A 0 5 0 m g L 苄 嘧 磺 隆 0 8 g L A g a r 2 0 0 m g L 特 美 汀 上 生 长 1 0 2 5 3 5 d 的 子 叶 外 植 体 图 1 外 植 体 在 S U 除 草 剂 培 养 基 上 的 生 长 情 况 表 1 外 植 体 在 T M 培 养 基 上 的 生 长 情 况 单 位 培 养 基 T M A T M B T M C T M D 培 养 1 0 d 死 亡 率 0 0 9 0 2 6 3 分 化 率 2 7 7 1 3 3 0 0 培 养 2 5 d 死 亡 率 0 0 2 0 7 5 0 3 分 化 率 4 4 3 1 4 3 0 0 培 养 3 5 d 死 亡 率 0 0 4 2 0 8 6 0 分 化 率 5 1 7 1 6 7 0 0 表 2 外 植 体 在 H A R 培 养 基 上 的 生 长 情 况 单 位 培 养 基 H A R A H A R B H A R C H A R D 培 养 1 0 d 死 亡 率 0 1 3 1 8 0 4 1 3 分 化 率 1 7 3 1 3 3 0 0 培 养 2 5 d 死 亡 率 0 8 0 4 0 3 6 3 0 分 化 率 2 2 3 1 2 0 0 0 培 养 3 5 d 死 亡 率 3 0 1 7 7 5 5 7 9 1 3 分 化 率 2 3 7 1 7 3 0 0 表 3 外 植 体 在 B M 培 养 基 上 的 生 长 情 况 单 位 培 养 基 B M A B M B B M C B M D 培 养 1 0 d 死 亡 率 0 0 0 1 1 3 分 化 率 4 5 0 2 8 3 1 1 0 0 培 养 2 5 d 死 亡 率 0 0 9 3 0 3 分 化 率 6 2 3 4 0 7 1 5 3 0 培 养 3 5 d 死 亡 率 0 4 0 2 1 3 5 2 7 分 化 率 7 2 3 6 7 3 2 3 3 0 2 2 I M I 除 草 剂 对 西 瓜 子 叶 外 植 体 的 分 化 作 用 将 西 瓜 自 交 系 D 6 6 的 子 叶 作 为 外 植 体 置 于 不 同 类 型 和 浓 度 的 I M I 除 草 剂 培 养 基 中 由 表 4 表 5 可 2 0 4第 1 1 期 知 在 1 5 0 m g L 灭 草 喹 除 草 剂 培 养 基 上 西 瓜 子 叶 外 植 体 的 分 化 率 为 0 培 养 3 5 d 后 外 植 体 的 死 亡 率 达 4 9 3 在 1 5 0 m g L 灭 草 烟 除 草 剂 培 养 基 上 西 瓜 子 叶 外 植 体 的 分 化 率 为 0 培 养 3 5 d 后 外 植 体 的 死 亡 率 达 4 5 5 将 最 早 出 现 外 植 体 分 化 率 为 0 时 除 草 剂 的 浓 度 定 义 为 最 佳 筛 选 浓 度 西 瓜 子 叶 外 植 体 在 灭 草 喹 和 灭 草 烟 培 养 基 上 筛 选 浓 度 均 为 1 5 0 m g L 表 4 外 植 体 在 I Q 培 养 基 上 的 生 长 情 况 单 位 组 合 编 号 I Q a I Q b I Q c I Q d 培 养 1 0 d 死 亡 率 0 0 0 0 分 化 率 1 4 7 9 0 7 0 0 培 养 2 5 d 死 亡 率 0 0 8 3 2 2 1 分 化 率 2 1 3 1 3 3 1 1 3 0 培 养 3 5 d 死 亡 率 0 0 1 5 3 4 9 3 分 化 率 2 3 3 1 9 3 1 2 1 0 表 5 外 植 体 在 I P 培 养 基 上 的 生 长 情 况 单 位 组 合 编 号 I P a I P b I P c I P d 培 养 1 0 d 死 亡 率 0 0 0 0 分 化 率 1 3 0 9 0 3 7 0 培 养 2 5 d 死 亡 率 0 0 9 0 1 8 5 分 化 率 1 9 3 1 3 7 6 7 0 培 养 3 5 d 死 亡 率 0 7 3 1 3 2 4 5 5 分 化 率 2 1 0 1 5 7 9 3 0 2 3 不 同 植 物 生 长 调 节 剂 浓 度 配 比 对 不 定 芽 增 殖 培 养 的 影 响 6 B A 浓 度 分 别 为 0 5 1 0 2 0 m g L N A A 浓 度 分 别 为 0 1 0 5 1 5 m g L 将 诱 导 生 成 的 不 定 芽 置 于 不 同 植 物 生 长 调 节 剂 浓 度 配 比 的 培 养 基 中 由 表 6 可 知 不 同 植 物 生 长 调 节 剂 6 B A N A A 均 能 促 进 不 定 芽 的 增 殖 在 M S 1 0 m g L 6 B A 0 5 m g L N A A 的 培 养 基 中 不 定 芽 的 增 殖 率 最 高 为 2 8 7 0 2 4 西 瓜 杂 交 种 的 子 叶 外 植 体 在 除 草 剂 培 养 基 上 的 分 化 研 究 将 西 瓜 杂 交 种 武 农 8 号 黑 美 人 甜 王 1 号 早 佳 8 4 2 4 和 西 瓜 自 交 系 D 6 6 发 芽 2 d 后 的 子 叶 作 为 外 植 体 置 于 除 草 剂 培 养 基 表 7 3 5 d 后 统 计 4 种 西 瓜 杂 交 种 和 西 瓜 自 交 系 D 6 6 外 植 体 的 分 化 率 和 死 亡 率 4 种 西 瓜 杂 交 种 和 西 瓜 自 交 系 D 6 6 在 0 2 5 m g L T M 0 2 5 m g L H A R 0 5 m g L B M 1 5 m g L I Q 和 1 5 m g L I P 除 草 剂 培 养 基 中 的 分 化 率 均 为 0 西 瓜 外 植 体 在 5 种 除 草 剂 T M H A R B M I Q I P 处 理 下 的 死 亡 率 分 别 为 4 0 0 5 0 5 5 4 7 6 5 0 4 0 9 5 2 0 4 0 7 5 2 5 3 9 5 4 5 2 3 结 论 1 西 瓜 自 交 系 D 6 6 子 叶 外 植 体 在 含 有 S U 除 草 剂 苯 磺 隆 和 噻 吩 磺 隆 的 培 养 基 上 最 适 宜 浓 度 均 为 万 丽 丽 等 A L S 抑 制 类 除 草 剂 对 西 瓜 子 叶 外 植 体 分 化 的 研 究 表 6 不 同 植 物 生 长 调 节 剂 配 比 对 不 定 芽 增 殖 培 养 的 影 响 处 理 1 2 3 4 5 6 7 8 9 6 B A 浓 度 m g L 0 5 1 0 2 0 0 5 1 0 2 0 0 5 1 0 2 0 N A A 浓 度 m g L 0 1 0 1 0 1 0 5 0 5 0 5 1 5 1 5 1 5 增 殖 率 1 1 5 3 2 6 3 3 1 5 0 0 2 3 6 7 2 8 7 0 1 2 3 3 2 2 3 3 1 9 0 0 1 1 6 7 不 定 芽 生 长 状 况 分 化 明 显 生 长 缓 慢 不 定 芽 发 育 正 常 分 化 明 显 生 长 缓 慢 不 定 芽 发 育 正 常 分 化 明 显 生 长 慢 不 定 芽 发 育 畸 形 分 化 明 显 生 长 缓 慢 不 定 芽 发 育 正 常 分 化 明 显 生 长 缓 慢 不 定 芽 发 育 正 常 分 化 不 明 显 生 长 慢 不 定 芽 畸 形 分 化 明 显 生 长 缓 慢 不 定 芽 发 育 正 常 分 化 明 显 生 长 缓 慢 不 定 芽 发 育 正 常 分 化 不 明 显 生 长 慢 不 定 芽 畸 形 表 7 西 瓜 子 叶 外 植 体 在 S U 和 I M I 除 草 剂 培 养 基 上 的 生 长 情 况 材 料 D 6 6 武 农 8 号 黑 美 人 甜 王 1 号 早 佳 8 4 2 4 D 6 6 武 农 8 号 黑 美 人 甜 王 1 号 早 佳 8 4 2 4 D 6 6 武 农 8 号 黑 美 人 甜 王 1 号 早 佳 8 4 2 4 D 6 6 武 农 8 号 黑 美 人 甜 王 1 号 早 佳 8 4 2 4 D 6 6 武 农 8 号 黑 美 人 甜 王 1 号 早 佳 8 4 2 4 除 草 剂 类 型 T M T M T M T