宁夏番茄地田间杂草携带主要病毒检测及分析.pdf

2024 Vol 44 No 07 农业与技术 null农业科学 宁夏番茄地田间杂草携带主要病毒检测及分析 戴荣 李建设 宁夏大学葡萄酒与园艺学院 宁夏 银川 nullnullnullnullnullnull 摘 要 番茄病毒病是导致番茄减产的重要原因 田间杂草是传播番茄病毒最直接的中间媒介 为明确宁夏地区 番茄田间杂草携带病毒种类与复合侵染情况 采取 nullnullnull 结合 nullnull nullnullnullnull 技术 检测了宁夏 null 个县 市 null 个乡镇 nullnull 块疑似感染番茄病毒田地采集的 nullnull 科 nullnull 种共计 nullnullnull 份杂草样本 检测结果表明 杂草携带 nullnullnull 南方番茄病 毒 检出率最高 为 nullnullnull nullnullnull 其次是 nullnullnullnull 番茄褪绿病毒 为 nullnullnull nullnullnull nullnullnullnull 番茄花叶病毒 nullnullnullnullnull 番茄黄化曲叶病毒 nullnullnullnull 番茄斑萎病毒 nullnullnullnullnull 番茄斑驳花叶病毒 null 种病毒检出率分别为 nullnullnull nullnullnull nullnullnull nullnullnull nullnull nullnullnull nullnull nullnullnull 通过对杂草携带番茄病毒复合侵染的现象进行分析 发现病毒复合侵染率达 nullnullnull nullnullnull 其中 null 种病毒类型复合侵染最严重 占复合侵染总比的 nullnullnull nullnullnull null 种病毒复合侵染率占总复合侵染的 nullnullnull nullnullnull null 种病毒复合侵染率略低 占复合侵染总比 nullnullnull nullnullnull null 种病毒侵染率最低 为 nullnull nullnullnull 杂草是番茄病毒传播的中 间媒介 番茄病毒复合侵染在杂草上呈爆发状态 因此及时清除田间杂草是最简单有效控制病毒病传播的方法 关键词 田间杂草 nullnullnull nullnull nullnullnullnull 检测 中图分类号 null nullnull 文献标志码 null DOI nullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull 收稿日期 nullnullnullnullnullnullnullnullnullnull 基金项目 宁夏回族自治区重点研发计划项目 项目编号 nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull 作者简介 戴荣 nullnullnullnullnull 女 硕士在读 研究方向 设施蔬菜栽培 通讯作者李建设 nullnullnullnullnull 男 博士 教授 博士生导师 研究 方向 设施蔬菜栽培生理与营养施肥 引言 番茄是宁夏设施冷凉露地主要栽培蔬菜之一 null 其罹患的病毒病呈现出爆发性强 传播快且危害范围 广的现象 是造成番茄减产的重要原因 null 目前 番 茄可感染病毒病的种类较多 同时番茄出现复合侵染 的情况较为普遍 nullnullnull 而田间杂草对番茄生长会造成 严重威胁 null 与番茄竞争生长空间 同时也为番茄病毒 病的传播提供了媒介 null 目前 已对宁夏番茄植株上携 带的病毒病种类做出鉴定 nullnullnullnull 但番茄田间杂草携带病 毒种类还未有报道 本研究主要针对宁夏 null 个县 市 null 个乡镇 nullnull 块疑似携带病毒的番茄地田间杂草进行采样 采取 nullnullnull nullnull nullnullnullnull 技术 明确田间杂草携带病毒种类 以期为今后番茄病毒病的防控提供更加科学的指导 1 材料与方法 1 1 试验材料 nullnullnullnull 年 null 月 对宁夏 null 个县 市 null 个乡镇共计 nullnull 块番茄田进行采样调查 对疑似发病番茄周边 地膜下杂草不取 的杂草进行拍照 采样 株型小 的杂草采集全株 株型大的杂草使用 nullnullnull乙醇消毒后 的剪刀剪取带叶片的茎秆 藤蔓 nullnullnull 条 装入装样 袋 做好标记 将采集样品立即置于液氮中速冻 保 存于 nullnullnullnull 冰箱保存备用 每剪取 null 个样品后立即用 nullnullnull乙醇擦拭剪刀消毒处理 1 2 植物总 DNA NA 的提取及 cDNA 的合成 参照试剂盒提供的方法 分别使用天根多糖多酚 植物总 nullnullnull 提取试剂盒 货号 nullnullnullnullnull 与天根多 糖多酚植物基因组 nullnullnull 提取试剂盒 货号 nullnullnullnullnull 提取田间杂草总 nullnullnullnullnullnullnull 以提取的总 nullnullnull 为模板 进行反转录 采用 nullnullnullnullnullnull 生物公司的 nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnull nullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnull 货号 nullnullnullnullnullnullnull 进行反 转录 反应的体系及步骤参照产品说明书 1 3 番茄病毒引物信息 宁夏地区番茄病毒病主要受到番茄花叶病毒 nullnullnull nullnullnullnull nullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnull nullnullnullnull 番茄黄化曲叶病毒 nullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnull nullnullnullnull nullnullnullnull nullnullnullnullnull nullnullnullnullnull 番茄斑萎病毒 nullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnull nullnullnullnullnull nullnullnullnull 番茄斑驳花叶病毒 nullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnull 南方番茄病毒 nullnullnull 番茄褪绿 病毒 nullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnull nullnullnullnull 黄瓜花叶病毒 nullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnull nullnullnull null 种病毒的侵染 并新 发现番茄褐色皱纹病毒病 nullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnull nullnullnull 42 nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull null农业科学 农业与技术 2024 Vol 44 No 07 nullnullnull nullnullnullnullnullnull 同时检测另外常见的 null 种侵染番茄的 病毒 烟草花叶病毒 nullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnull nullnullnull 番茄环纹斑点病毒 nullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnull nullnullnullnull nullnullnullnullnull nullnullnullnull 引物相关信息见表 null 1 4 T C C 及电泳检测 nullnullnullnullnullnullnullnullnullnull 检测 利用病毒特异性引物 见表 null 按下述体系与条件扩增 体系 nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnull nullnullnull nullnullnullnull 货号 nullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnull 上下引物各 nullnull nullnullnull nullnullnullnull 模板 nullnullnull nullnullnull null null nullnullnull 条件 nullnullnull null nullnullnullnull nullnullnull null nullnullnull nullnullnull null nullnullnull nullnullnull null nullnullnull nullnull 个循 环 nullnullnull延伸 nullnullnullnullnull 扩增完成 分别取 nullnullnull 扩增产 物在 nullnull nullnull琼脂糖凝胶上电泳检测 并用全自动凝胶 成像系统记录结果 表 1 用于 T PC 扩增番茄病毒的特异性引物 引物 名称 引物序列 nullnullnullnullnull 扩增片 段大小 nullnullnull 参考 文献 nullnullnullnull null nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnull null nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnull nullnull nullnullnullnullnull null nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnull null nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnull nullnull nullnullnullnull null nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnull null nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnull nullnull nullnullnull null nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnull null nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnull nullnull nullnullnullnullnull null nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnull null nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnull nullnull nullnullnull null nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnull null nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnull nullnull nullnullnull null nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnull null nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnull nullnull nullnullnullnull null nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnull null nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnull nullnull nullnullnullnull null nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnull null nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnull nullnull nullnullnullnullnullnull null nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnull null nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnull nullnull 2 结果与分析 2 1 杂草感染病毒的表现特征 通过走访拍照采样发现 与正常生长的杂草相 比 感染病毒的苦苣菜上部新叶出现浅黑褐色斑点 见图 nullnull 下部老叶斑点颜色加深 斑点扩大 轻微萎 缩 叶片蜷曲 可从叶片扩展至整棵植株 见图 nullnull 叶片背部叶脉由绿转紫 茎秆支撑力变弱 植株倒 伏 部分叶片发生脱落 见图 nullnull 马齿苋叶片出现黄 色斑点 见图 nullnull 反枝苋新叶呈现黄色斑点 老叶边 缘黄化 褪绿 从边缘辐射至叶脉 出现枯斑 见图 nullnull 打碗花叶片出现黄绿相间的花叶 见图 nullnull 茎秆 发黄变脆 叶片向下卷曲 蔓延至整棵植株 凹头苋 叶片背部与长鬃蓼叶片正面 见图 nullnull 图 nullnull 均出 现浅褐色斑点 集中密集 乳苣叶片出现古铜色斑块 见图 nullnull 部分斑块枯萎 叶片背部也清晰可见 2 2 宁夏番茄田间不同种类杂草所携带病毒检测结果 通过对采集的 nullnull 科 nullnull 种 nullnullnull 份杂草样品提取总 nullnullnullnullnullnullnull 利用特异性引物进行 nullnullnullnullnullnullnullnullnullnull 扩 增 如表 null 所示 结果表明 共检测出 null 种病毒 分 别为 nullnullnullnull nullnullnullnullnull nullnullnullnull nullnullnullnullnull nullnullnull nullnullnullnull 其中 nullnullnull 份样品检出病毒 有 nullnullnull 个样品未检测到 病毒 病毒检出率高达 nullnullnull nullnullnull 注 nullnullnull 为苦苣菜 菊科 null 为马齿苋 马齿苋科 null 为反 枝苋 苋科 null 为打碗花 旋花科 null 为凹头苋 苋科 null 为长 鬃蓼 蓼科 null 为乳苣 菊科 图 1 几种杂草侵染病毒田间症状 不同病毒感染的杂草种类与感染率有一定差异 nullnullnull 可侵染的杂草种类和数量最多 除黄花蒿外 nullnull 科 nullnull 种 nullnullnull 株杂草被感染 杂草种类间感染率略有 差异 节节草感染率最高为 nullnullnull nullnullnull 马唐的感染率 最低为 nullnull nullnullnull 其次是 nullnullnullnull 可侵染 nullnull 科 nullnull 种杂 草 采集的菊科杂草 nullnullnull 可被侵染 nullnullnullnull 可感染 nullnull 科 nullnull 种杂草 菊科可侵染杂草种类最多 包括欧洲 千里光 花叶滇苦菜等 null 种杂草 受到 nullnullnullnullnull 侵染 的杂草高达 nullnull 种 采集的禾本科杂草均可感染此病 毒 以冰草最甚 侵染率高达 nullnullnullnull nullnullnullnull 可侵染 的杂草种类最少 涉及 null 科 nullnull 种杂草 十字花科的 null 种杂草皆可感染此病毒 nullnullnull 独行菜样品检测出此病 毒 nullnullnullnullnull 可侵染的杂草种类最少 涉及 null 科 null 种杂 草 包括马唐 早熟禾 苦苣菜 黄花蒿 藜 地 52 nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull 2024 Vol 44 No 07 农业与技术 null农业科学 肤 打碗花与野西瓜苗 从被感染杂草种类的角度来分析 nullnullnull 感染杂草 的情况依次为其他科 苋科 藜科 菊科 蓼科 禾 本科 nullnullnullnull 感染率排序为苋科 null其他科 null藜科 null菊科 蓼科 null禾本科 nullnullnullnull 感染杂草的种类最低为藜科 禾 本科 菊科 苋科感染率相差不大 蓼科未检测到被 侵染杂草 nullnullnullnullnull 感染率排序为苋科 null禾本科 null菊科 null 藜科 null蓼科 null其他科 nullnullnullnull 感染率的高低顺序为其他 科 null苋科 null菊科 其中禾本科 蓼科与藜科未检测到杂 草感染 nullnullnullnullnull 感染率排序为其他科 null禾本科 null藜科 null 菊科 蓼科与苋科未检测到感染样本 对杂草感染番茄病毒种类整理并进行数据分析 nullnullnull 的检出比例最高为 nullnullnull nullnullnull 是危害宁夏范围最 广的病毒 其次是 nullnullnullnull 检出率为 nullnullnull nullnullnull nullnullnullnull nullnullnullnullnull 的检出率分别为 nullnullnull nullnullnull nullnullnull nullnullnull nullnullnullnull nullnullnullnullnull 总检出率较低 分别为 nullnull nullnullnull nullnull nullnullnull 表 2 宁夏番茄田间杂草及其携带病毒种类 科名 杂草名称 样本 数量 阳性 样本 数 检出率 nullnull nullnullnullnull nullnullnullnullnull nullnullnullnull nullnullnull nullnullnullnullnull nullnullnull nullnullnull nullnullnullnull nullnullnullnull nullnullnullnullnullnull 禾本科 狗尾草 nullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnull nullnull nullnull nullnullnullnullnullnull nullnull nullnull nullnullnull nullnull nullnullnull nullnull null null null nullnullnull nullnull null nullnullnull nullnull null null 马唐 nullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnull nullnullnullnullnull nullnull nullnull nullnullnull nullnull nullnull nullnull null null nullnull nullnull nullnull nullnull null nullnullnull nullnull null null 牛筋草 nullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnull nullnull nullnullnullnullnullnullnull nullnull null nullnull nullnull nullnullnull nullnull null null null nullnullnull nullnull null nullnullnull nullnull null null 糠稷 nullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnull null null null nullnullnull nullnull null null null nullnullnull nullnull null nullnullnull nullnull null null 早熟禾 nullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnull null null null nullnull null null nullnull nullnull null null null null 冰草 nullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnull nullnullnullnullnullnullnull null null null nullnullnull null null null nullnull null nullnull null null 芦苇 nullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnull nullnullnullnullnull nullnull nullnullnullnullnullnull null null null nullnull null null null nullnull null nullnull null null 菊科 苦苣菜 nullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnull nullnull null null nullnull nullnull nullnullnull nullnull null nullnull nullnull nullnullnull nullnull null nullnullnull nullnull null null 欧洲千里光 nullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnull nullnull nullnull null nullnullnull nullnull nullnullnull nullnull null null null nullnullnull nullnull null nullnull null null 蒲公英 nullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnull null null null nullnullnull null null null null nullnull null null null null 乳苣 nullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnull nullnull nullnull nullnull nullnullnullnullnull nullnull nullnull null nullnullnull nullnull null null null nullnullnull nullnull null nullnullnull nullnull null null 花叶滇苦菜 nullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnull nullnull nullnullnullnull null null nullnullnull nullnull null null null null nullnull null nullnullnull null null null 长裂苦苣菜 nullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnull nullnull null null nullnullnull nullnull nullnullnull nullnull null null nullnullnull nullnull null null null null 抱茎苦荬菜 nullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnull null null null null null null null nullnullnull nullnull null nullnullnull nullnull null null 野蓟 nullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnull nullnull null nullnull nullnull nullnull nullnull null null null nullnullnull nullnull null nullnullnull nullnull null null 野艾蒿 nullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnull nullnullnullnullnullnull nullnull null nullnullnull nullnull null null null null nullnullnull nullnull null nullnull nullnull null null 青蒿 nullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnull null null null null null null null nullnullnull nullnull null nullnullnull nullnull null null 黄花蒿 nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnull null null null null null null nullnullnull null null nullnullnull null null 泥胡菜 nullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnull nullnullnullnullnull null null null null null null null nullnull null null null null 黄鹌菜 nullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnull nullnull nullnullnull null null null null null null null nullnull null null null null 毛连菜 nullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnull nullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnull null null nullnullnull nullnull nullnullnull nullnull nullnullnull nullnull null null nullnullnull nullnull null null null null 卷耳草 nullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnull null null nullnullnull nullnull nullnullnull nullnull null null null nullnullnull nullnull null nullnullnull nullnull null null 蓼科 酸模叶蓼 nullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnull null null null nullnull null null null nullnull null nullnull null null 长鬃蓼 nullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnull null null null nullnullnull nullnull null null null nullnullnull nullnull null nullnullnull nullnull null null 酸模 nullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnull nullnull null null null null null null nullnullnull nullnull nullnullnull nullnull 藜科 杂配藜 nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnull nullnull nullnull null nullnull nullnull nullnullnull nullnull null null null nullnullnull nullnull null nullnullnull nullnull null null 藜 nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnull nullnull nullnull nullnull nullnull nullnull nullnullnull null