“黄金芽”的组培快繁技术研究_李媛.pdf

技术研究 412025年 第 2 期 酵温度 湿度 氧气量 使各原料独具特色 可规模化 标准化生产 3 4 2 海堤岩红系列茶产品的工艺 海堤茶师历经代 代积累 匠心拼配 烘焙 摸索出了独属于海堤的拼配和焙 酵工艺 其中海堤岩红茶产品独特的低温烘焙工艺技术则赋 予了茶香气质的飞跃 激发了果香 蜜香 甜香的同时 降 低原料木香中不愉悦的部分 去掉了青草气息 多种香气完 美交织与融合最终成就了 海堤红 的恰到好处 图3 表4 海堤岩红系列低温烘焙前后香气变化 花香 果香 甜香 蜜香 木香 清香 拼配后 未烘 25 20 15 15 10 15 拼配后 已烘 40 50 33 6 20 50 80 53 66 4 海堤岩红系列茶产品的核心竞争力 海堤岩红系列茶创新结合乌龙茶做青技术 采用低 温红茶发酵工艺 做出来的产品香气高锐 果香明显 滋 味醇厚 鲜爽 有红茶的甘醇 也有乌龙茶的花香和鲜 爽 不苦不涩 口味迎合消费者市场需求 针对广大茶区 二 三春的茶鲜叶多为弃采 建议更多茶企可以结合新工 艺将二 三春的茶青利用起来 促进茶产业发展 让茶产 区创造更多经济效益 带动乡村振兴 特别鸣谢 中粮营养研究院营养代谢中心的各位研 究员对海堤岩红系列茶产品对香气的检测 黄金芽 Camellia sinensis cv Huangjinya 是原产于浙江省余姚市的一个典型光照敏感型珍稀黄化茶 树品种 该茶叶的品质优异新奇 现出 三黄 的品质特 征 即叶底纯黄 干茶亮黄 汤色明黄 在生化成分上具 有 高氨低酚 的优异品质特性 1 3 是茶中佳品 同时 因其树体全年金黄 新梢三季均呈黄色 是茶叶生产与销 售以及园林绿化兼用的珍稀黄色茶树新品种 是茶树种质 资源开发与应用的一个重大突破 目前 已有许多国内关于茶树组织培养方面的研究 报道 4 8 研究表明 不同的茶树品种 在其诱导分化和 增殖阶段 培养条件和培养基成分存在严重差异 为此 本研究主要针对 黄金芽 优良品种的组培快繁体系进行 研究 并利用 黄金芽 茶树新梢腋芽 茎段为试验材 料 研究其初代培养过程中褐化的控制 以及通过不同激 素和浓度的配比 诱导芽的分化和增殖 并通过此项研究 初步建立黄金芽的良种快繁体系 为该品种无性系快速繁 殖提供科学的理论依据 1 材料与方法 1 1 材料来源与研究地点 试验材料来自日照职业技术学院茶园 试验地点为 学校海洋工程学院组培实验室 1 2 研究方法 1 2 1 外植体的消毒 于四月中旬取当年生健壮无 病虫害的半木质化枝干 剪去顶芽和底部侧芽 保留第 黄金芽 的组培快繁技术研究 李 媛 侯可雷 日照职业技术学院海洋技术系 山东 日照 276800 摘 要 本实验以 黄金芽 茶树新梢腋芽 茎段等为试验材料 研究其组培快繁技术 结果表明 采用带有少量叶柄和腋芽的茎段作为外植体 接种前将其在2 0g L PVP溶液中浸泡30分钟 然后接种至含 有2 0g L PVP的1 2MS培养基中 这样能显著减少外植体的褐化现象 以1 2MS为基本培养基 当6 BA为 2 0mg L NAA为0 2mg L时 对茶树芽的诱导和增殖最有利 其中6 BA差异显著 关键词 黄金芽 外植体 褐变 组培快繁 中图分类号 TS271 文献识别码 A 基金项目 2017年度山东省高等学校科研计划 茶树新品种 黄金芽 的组培繁殖技术研究 项目编号 J17KB102 作者简介 李 媛 1982 女 汉族 山东临沂 硕士 副教授 研究方向 植物组织快繁 学术专业人文茶趣 42 2025年 第 2 期 2 3个侧芽 用0 1 洗洁精浸泡30min 流水冲洗1h 在超净工作台上 对外植体进行修剪 得到以下四种不同 的外植体形式 第一种是顶芽 其次是腋芽 均不包含茎 段和叶片 第三种是带有茎段但不带叶柄的腋芽 最后一 种是保留少量叶柄的腋芽 同时带有茎段 所有带有茎 段的外植体 其上端面均进行了平切处理 而下端面则 是斜切 用75 酒精浸泡30s 水漂洗3次0 1 升汞液处 理5min后 无菌水冲洗3次备用 经过消毒后的外植体 接种到培养基中 培养基配方为MS 6 BA 2 0mg L NAA 0 2mg L 1 2 2 两种基本培养基对外植体褐化及腋芽萌发的 影响 选取上述1 2 1步骤中生长效果好的外植体切取方 式修剪 将分别接种在含有6 BA 2 0mg L NAA 0 2mg L VC 1000mg L 以及AC 1500mg L 的MS和1 2MS培养 基上 以观察不同培养基对腋芽启动生长的影响 1 2 3 不同抗氧化剂对外植体褐化的控制 按照上 述1 2 1步骤中生长效果好的外植体切取方式修剪消毒 2 0g LPVP 溶液浸泡外植体30min 接种于添加不同抗 氧化剂的基本培养基中 1 2 2步骤中较好的基本培养基 类型 不添加激素 基本培养基选用上述1 2 2步骤中 效果好的类型 各种抗氧化剂与吸附剂的浓度分别 1 维生素C VC 的浓度为0 5 1 0 2 0g L 2 活性炭 AC 的浓度为0 5 1 0 2 0g L 3 聚乙烯吡咯烷酮 PVP 的浓度为0 5 1 0 2 0g L 4 维生素C VC 和活性炭 AC 的浓度均为1 0g L 1 2 4 不同激素对启动增殖的影响 增殖培养基在 基本培养基中加入不同浓度的细胞分裂素6 BA NAA的浓 度固定浓度0 2mol L 见表1 每个处理接种10瓶 每瓶接 3个芽 30d后观察芽的诱导情况并对芽数进行统计 在基础培养基中添加不同浓度的细胞分裂素6 BA 同时保持NAA的浓度恒定为0 2mol L 制备增殖培养基 具体操作见表1 每个处理组接种10瓶 每瓶植入3个芽 表1 添加不同浓度的2种激素配比实验 处理号 基本培养基 NAA 6 BA 1 1 2MS 0 2 0 5 2 1 2MS 0 2 1 0 3 1 2MS 0 2 2 0 4 1 2MS 0 2 3 0 5 1 2MS 0 2 4 0 1 2 5 培养条件 培养室温度为 25 1 光照 强度1500 2000lx 光照时间为 12h d 所用培养基中 其中琼脂浓度为8g L 蔗糖浓度为30g L 活性炭1g L PVP lg L pH 5 8 2 结果与分析 2 1 外植体切取方法对培养结果的影响 表2的结果显示 外植体的处理方法与其后续的褐化 现象及萌发率之间存在显著的联系 这主要归因于取材部 位的差异 在第四种处理方法中 带有腋芽和茎段的外植 体 保留部分叶柄 接种一周后便开始萌发 随之叶柄也 会逐渐从基部脱落 第6周外植体萌发率可以达到40 0 不带叶柄的腋芽带茎段第三种处理方式比第四种萌发率 低 而单独的腋芽和顶芽萌发率很低 分别为0和0 67 此外外植体不同的处理方法 造成的创伤面积不同 伤口 越大 与消毒剂接触的面积越大 对外植体伤害越大 褐 化程度越严重 表2 不同处理方式的外植体褐变率 萌发率比较 外植体切取方式 接种数 褐化率 萌发率 顶芽 30 80 0 II腋芽 不带茎段和叶 30 56 7 0 67 III腋芽带茎段 不带叶柄 30 46 7 30 IV腋芽带茎段 留少量叶柄 30 40 40 2 2 两种培养基对外植体褐化程度及腋芽萌发生长的影响 在激素比例一致的条件下 比较两种基础培养基 发现l 2MS培养基相较于MS培养基 外植体的褐变率减少 了20 腋芽的萌发时间提前了7天 并且腋芽的后续生长 状况表现良好 因此 在这两种处理方法中 1 2MS培养 基在降低褐变和促进腋芽生长方面表现更佳 表3 不同培养基对褐化及腋芽萌动情况的影响 培养基种类 接种数 褐化率 萌发率 腋芽萌 腋芽生长状态 动时间 l 2MS 30 33 3 53 3 22 健壮 色浅绿 MS 30 40 43 3 15 健壮 色绿 2 3 不同的抗氧化剂对茶树褐化的影响 在基本培养基中加入几种不同的抗氧化剂和吸附 剂 结果表明 见表4 在培养基中加入0 5 2 0g L的维生素C 0 25 1 0g L的活性炭和0 5 2 0g L的聚乙烯吡咯烷 酮 可以有效降低外植体的褐化现象 其中 将外植体在 2 0g LPVP溶液中浸泡30min 再接种到2g LPVP的培养基 上 是抑制褐化效果最佳的方案 2 4 不同浓度6 BA对芽增殖和伸长的影响 由表5可知 在6 BA浓度不超过2 0mg L的条件下 随着6 BA浓度的增加 芽的增殖率逐渐上升 当6 BA浓 度达到2 0mg L时 芽的生成率可达66 7 而一旦6 BA 浓度超过2 0mg L 增殖率则开始减少 在6 BA浓度小 技术研究 432025年 第 2 期 于3mg L的环境下 组培的茶树叶片颜色深绿 生长状况 佳 但随着6 BA浓度的进一步提高 叶片颜色转黄 生 长势头减弱 甚至出现死亡 因此 实验结果指出 当 6 BA浓度为2 0mg L时 对茶树丛生芽的诱导和增殖最为 有利 表4 维生素C 活性炭 聚乙烯吡咯烷酮 对茶树腋芽褐变的影响 抗氧化剂 浓度 接种数 褐变率 平均褐变率 维生素C 0 5 30 23 3 24 4 1 0 30 23 3 2 0 30 26 7 活性炭 0 5 30 30 28 9 1 0 30 26 7 2 0 30 30 聚乙烯吡咯烷酮 0 5 30 20 18 9 1 0 30 20 2 0 30 16 7 对照 0 30 11 36 7 表5 6 BA 对芽诱导和增殖的影响 70d 处理 接种外植 出芽数 出芽率 平均侧芽 芽生长情况 体个数 高度 cm 1 30 11 36 7 1 0 色黄绿 较健壮 2 30 14 46 7 1 5 色黄绿 健壮 3 30 20 66 7 1 8 色黄绿 健壮 4 30 14 46 7 1 1 色黄白 较萎蔫 5 30 10 33 3 1 0 色黄白 萎蔫 3 讨论 茶树组培过程中易污染而且茶树组织酚类物质含量 较高易褐变 组培成活率低 在众多导致茶树组织培养 褐化的因素中 本项研究首先对培养材料的种类进行了 筛选 在茶树组培褐化的众多影响因素中 本研究首先 对外植体的类型进行了选择 研究发现外植体的褐化与萌 发直接受其组织受损程度的影响 相较于其他种类的外植 体 腋芽带茎段且保留少量叶柄的外植体 其褐化率降低 明显 萌发率也较高 通过试验观察外植体褐化和腋芽生 长对培养基种类的反应 结果表明 在保持激素浓度和比 例不变的条件下 使用l 2MS培养基 可以显著降低褐变 率 缩短腋芽的萌动时间 并提高萌发率 这是因为与MS 培养基相比 l 2MS培养基无机盐含量低 可以减少酚类 物质外溢 减轻外植体褐变 9 10 通过在培养基中引入 不同种类和浓度的抗氧化剂 研究其对褐变抑制作用的影 响 结果表明PVP的效果最佳 其次是VC和AC 所有实验 组均优于未处理的对照组 这与油茶 nullnull 和中国李 nullnull 的研 究发现相一致 在启动茶苗培养的过程中 使用了较多的细胞分裂 素6 BA 从而实现了良好的增殖效果 在茶苗启动培养的 过程中 细胞分裂素多使用6 BA 并取得了较好的增殖 效果 6 BA为常见的细胞分裂素之一 促进芽丛生长 NAA 为常见的生长素之一 低浓度时促进腋芽的生长 不同激素的配比是影响外植体能否成功启动的关键因素 之一 而NAA浓度过高将会抑制植物生长 因此本试验在 NAA浓度选择中 选用较低的浓度 本试验结果表明 当 NAA 0 2mg L 6 BA2 0mg L时 对黄金芽外植体的诱导 增殖效果最佳 6 BA浓度低时 植物生长状况良好 叶 片呈黄绿色 然而 激素水平一旦提升 植物的生长势 头便会减弱 叶片颜色会变得浅黄乃至枯萎 甚至导致 植物死亡 这说明是茶树的萌发芽对激素比较敏感 对 激素浓度的适应范围较窄所致 另外 在实验过程中发 现此配方增殖系数偏低 芽的生长也比较慢 尚需要进 一步实验研究 参考文献 1 王开荣 李明 梁月荣 等 茶树新品种黄金芽选育研究 J 中国茶叶 2008 4 21 23 2 俞慧玲 茶叶珍稀品种黄金芽引种对比试验报告 J 中 国茶叶 2014 6 33 3 李明 张龙杰 王开荣 等 光照敏感型白化茶新品种 黄 金芽 白化特性研究 J 茶叶 2008 2 98 102 4 周健 茶树组培快繁技术的优化研究 J 茶叶科 学 2005 3 l72 176 5 谭和平 不同茶树品种组织快繁技术研究 J 四川茶叶 研究 2003 1 102 103 6 刘德华 周带娣 茶树茎段培养胚性状态的调控及其分化 J 湖南农业大学学报 2000 2 110 112 7 成浩 李素芳 茶树微繁殖技术的研究与进展 J 中国茶 叶 1996 2 29 31 8 黄亚辉 茶树茎尖培养研究初报 J 茶叶通 讯 1992 2 29 30 9 崔堂兵 郭勇 张长远 植物组织培养中的褐变现象的产 生机理及克服方法 J 广东农业科学 2001 3 16 19 10 曹昆 李霞 木本植物组织培养不定芽诱导研究 进展 EJ 江苏林业科技 2008 5 43 48 11 阙生全 彭凌 朱必凤 等 油茶组织培养过程中防止褐 变的研究 韶关学院学报 自然科学版 2006 3 67 69 12 邹英宁 李国怀 樊青峰 等 不同抗氧化剂对中国李茎 段培养的影响 J 华中农业大学学报 2006 1 84 86