黄瓜绿斑驳花叶病毒病防治研究进展.pdf

G21 G22 G23 G24 G25 G26 G21 G27 G24 G28 G29 G21 G2B G2C G2D犘犾犪狀狋犘狉狅狋犲犮狋犻狅狀收稿日期： 修订日期：基金项目：公益性行业（农业）科研专项（）；国家自然科学基金（）通信作者：黄瓜绿斑驳花叶病毒病防治研究进展刘华威，罗来鑫，朱春雨，梁超琼，刘鹏飞，李健强，（中国农业大学植物病理学系，种子病害检验与防控北京市重点实验室，北京；种苗健康北京市工程研究中心，农业部植物病理学重点实验室，北京；农业部农药检定所，北京）摘要黄瓜绿斑驳花叶病毒（犆狌犮狌犿犫犲狉犵狉犲犲狀犿狅狋狋犾犲犿狅狊犪犻犮狏犻狉狌狊，）主要危害葫芦科作物，已被世界上许多国家和地区列为检疫性有害生物。目前在我国个省、市、区已有报道发生和危害，严重影响葫芦科作物的生产；近年来该病害在国内外呈现迅猛扩展的趋势并对生产造成危害。本文综述了防治该病害的种子处理、化学及生物防治、嫁接以及转基因等分子生物学方法；分析了与寄主黄瓜互作研究的最新进展，对小分子参与调控寄主对病毒的防控策略提出了展望，并概述了下一代测序技术、基因编辑技术在植物新病毒的检测、鉴定以及培育抗病新品种等方面的应用。关键词黄瓜绿斑驳花叶病毒；防治方法；研究进展中图分类号： 文献标识码： 犇犗犐：犚犲狊犲犪狉犮犺狆狉狅犵狉犲狊狊犻狀犿犪狀犪犵犲犿犲狀狋狅犳犆狌犮狌犿犫犲狉犵狉犲犲狀犿狅狋狋犾犲犿狅狊犪犻犮狏犻狉狌狊犔犻狌犎狌犪狑犲犻，犔狌狅犔犪犻狓犻狀，犣犺狌犆犺狌狀狔狌，犔犻犪狀犵犆犺犪狅狇犻狅狀犵，犔犻狌犘犲狀犵犳犲犻，犔犻犑犻犪狀狇犻犪狀犵，（犇犲狆犪狉狋犿犲狀狋狅犳犘犾犪狀狋犘犪狋犺狅犾狅犵狔，犆犺犻狀犪犃犵狉犻犮狌犾狋狌狉犪犾犝狀犻狏犲狉狊犻狋狔，犅犲犻犼犻狀犵犓犲狔犔犪犫狅狉犪狋狅狉狔狅犳犛犲犲犱犇犻狊犲犪狊犲犜犲狊狋犻狀犵犪狀犱犆狅狀狋狉狅犾（犅犓犔犛犇犜犆），犅犲犻犼犻狀犵 ，犆犺犻狀犪；犅犲犻犼犻狀犵犈狀犵犻狀犲犲狉犻狀犵犚犲狊犲犪狉犮犺犆犲狀狋犲狉狅犳犛犲犲犱犪狀犱犘犾犪狀狋犎犲犪犾狋犺（犅犈犚犆犛犘犎），犓犲狔犔犪犫狅狉犪狋狅狉狔狅犳犘犾犪狀狋犘犪狋犺狅犾狅犵狔，犕犻狀犻狊狋狉狔狅犳犃犵狉犻犮狌犾狋狌狉犲狅犳犘犚犆犺犻狀犪，犅犲犻犼犻狀犵 ，犆犺犻狀犪；犐狀狊狋犻狋狌狋犲犳狅狉狋犺犲犆狅狀狋狉狅犾狅犳犃犵狉狅犮犺犲犿犻犮犪犾狊，犅犲犻犼犻狀犵 ，犆犺犻狀犪）犃犫狊狋狉犪犮狋 犆狌犮狌犿犫犲狉犵狉犲犲狀犿狅狋狋犾犲犿狅狊犪犻犮狏犻狉狌狊（犆犌犕犕犞）犮犪狌狊犲狊犱犲狏犪狊狋犪狋犻狀犵犱犻狊犲犪狊犲狅狀犮狌犮狌狉犫犻狋狊，犪狀犱犻狋犺犪狊犫犲犲狀犾犻狊狋犲犱犪狊狇狌犪狉犪狀狋犻狀犲狆犪狋犺狅犵犲狀犻狀犿犪狀狔犮狅狌狀狋狉犻犲狊犻狀狋犺犲狑狅狉犾犱犐狋狑犪狊狉犲狆狅狉狋犲犱犻狀犪狋犾犲犪狊狋狆狉狅狏犻狀犮犲狊犻狀犆犺犻狀犪，犮犪狌狊犻狀犵狊狌犫狊狋犪狀狋犻犪犾狔犻犲犾犱犾狅狊狊犲狊犪狀犱犾狅狑犲狉犿犪狉犽犲狋狏犪犾狌犲狅犳犮狌犮狌狉犫犻狋狊犜犺犻狊狉犲狏犻犲狑狊狌犿犿犪狉犻狕犲犱狋犺犲犮狌狉狉犲狀狋犮狅狀狋狉狅犾犿犲狋犺狅犱狊狅犳犆犌犕犕犞犪狀犱狋狉犻犲犱狋狅犲狓狆犾狅狉犲狋犺犲狀狅狏犲犾犮狅狀狋狉狅犾狊狋狉犪狋犲犵犻犲狊，犻狀犮犾狌犱犻狀犵狀犲狓狋犵犲狀犲狉犪狋犻狅狀狊犲狇狌犲狀犮犻狀犵（犖犌犛）犪狀犱犵犲狀犲犲犱犻狋犻狀犵狋犲犮犺狀狅犾狅犵狔犳狅狉狏犻狉犪犾犱犻犪犵狀狅狊狋犻犮狊犪狀犱犻犱犲狀狋犻犳犻犮犪狋犻狅狀，犪狀犱犿犻犚犖犃犿犲犱犻犪狋犲犱狉犲狊犻狊狋犪狀犮犲狋狅犆犌犕犕犞犻狀犳犲犮狋犻狅狀犓犲狔狑狅狉犱狊 犆狌犮狌犿犫犲狉犵狉犲犲狀犿狅狋狋犾犲犿狅狊犪犻犮狏犻狉狌狊；犿犪狀犪犵犲犿犲狀狋犿犲狋犺狅犱；狉犲狊犲犪狉犮犺狆狉狅犵狉犲狊狊中国是世界上最大的蔬菜生产国，其中年的黄瓜产量为万，占世界总产量的。黄瓜作为重要的蔬菜之一，提高其产量和生产效益一直受到世界各国研究人员的重视。近年来，随着黄瓜栽培面积的增加和栽培品种的多样化，黄瓜上病害种类也随之增加，其中黄瓜绿斑驳花叶病毒（犆狌犮狌犿犫犲狉犵狉犲犲狀犿狅狋狋犾犲犿狅狊犪犻犮狏犻狉狌狊，）由于传播迅速且目前无法彻底根除，已逐渐成为严重危害葫芦科作物生产的病毒病害之一。目前，物理方法、化学药剂、生物防治、农事操作以及生物学技术已被广泛用于防治，并取得了一定的防治效果。年，农业部颁布了该病毒病的防控技术规程。但由于在种子等传播材料中存在方式的隐秘性、持久性，以及其传播途径的多样性，使得如何有效防治黄瓜绿斑驳病毒、探索合理而稳定的防治措施来控制该病害成为各国农业研究人员亟待解决的问题。 犆犌犕犕犞病原生物学研究属于烟草花叶病毒属（犜狅犫犪犿狅狏犻狉狌狊）成网络出版时间：2016-11-30 10:04:10网络出版地址：http:/www.cnki.net/kcms/detail/11.1982.S.20161130.1004.020.html员，为正单链线状病毒，粒子大小约为×的螺旋状结构，每周含有个亚基，螺距。位于核中心的基因组长度左右，其编码的、个蛋白，分别与在寄主植株体内的复制、移动相关。另外，基因组和端分别含有帽子结构和（）尾巴及类似的结构。端的帽子结构可提高的稳定性及增加翻译效率，并保护不受降解。而端结构可提供复制酶、核糖核酸结合蛋白识别和结合的位点，与寄主细胞蛋白进行竞争性结合。研究表明，的钝化温度在之间，稀释限点为，病毒粒子在下仍可以存活。自年首次被报道以来，目前在亚洲、欧洲、南美洲、北美洲和大洋洲均有发生且造成不同程度的危害（表），其中在中国境内的个省、市、自治区报道有发生且造成危害（表），。主要寄生于葫芦科作物，如：黄瓜（犆狌犮狌犿犻狊狊犪狋犻狏狌狊）、西瓜（犆犻狋狉狌犾犾狌狊犾犪狀犪狋狌狊）、甜瓜（犆狌犮狌犿犻狊犿犲犾狅）等，另外也可侵染苋色藜（犆犺犲狀狅狆狅犱犻狌犿犪犿犪狉犪狀狋犻犮狅犾狅狌狉）、曼陀罗（犇犪狋狌狉犪狊狋狉犪犿狅狀犻狌犿）、菟丝子（犆狌狊犮狌狋犪犮犺犻狀犲狀狊犻狊）、本生烟（犖犻犮狅狋犻犪狀犪犫犲狀狋犺犪犿犻犪狀犪）和珊西烟（犖犻犮狅狋犻犪狀犪狋犪犫犪犮狌犿）等。已有研究表明，是典型的种传病毒，主要寄生于种子的胚。根据对感病西瓜种子不同部位的检测，其结果显示子叶、外种皮以及内种皮均被侵染，且其对应部位带毒量依次降低。侵染黄瓜后，病毒粒子可通过韧皮部对黄瓜植株体进行系统性侵染。因此，禁止感染的带毒种子在不同种植区运输是控制该病害长距离传播的关键。另外，农事操作，如嫁接、汁液接触、人工授粉、土壤带毒、灌溉水以及菟丝子等也可造成直接或间接地传播，。随着检测技术的发展，包括生物学、血清学和电镜技术等已广泛应用于检测中，尤其是方法及其衍生技术包括荧光法、免疫捕获和免疫磁珠方法均成熟应用于的检测，并可成功检测到黄瓜种子中含量为的病毒粒子。鉴于当前的防治措施对处理存在于各种传播材料中的仍留有死角、并不足以彻底截止其传播。因此在生产中除了将各种手段应用于的检测、尽量降低其传播的风险外，研究具有实效的防治措施、杜绝的发生与传播，是病害管理的重中之重，亦可以间接减少种植者的投入并增加收益。表 黄瓜绿斑驳花叶病毒病在世界范围内的发生与危害犜犪犫犾犲 犗犮犮狌狉狉犲狀犮犲犪狀犱犱犪犿犪犵犲狅犳犆狌犮狌犿犫犲狉犵狉犲犲狀犿狅狋狋犾犲犿狅狊犪犻犮狏犻狉狌狊犻狀狋犺犲狑狅狉犾犱地理分布国家发病率（或面积）产量损失（）引用文献亚洲日本亿日元印度中国韩国巴基斯坦伊朗，以色列，沙特阿拉伯，斯里兰卡，叙利亚共和国，缅甸欧洲英国芬兰俄罗斯乌克兰丹麦，挪威，瑞典，德国，罗马尼亚，希腊，西班牙，匈牙利，保加利亚，捷克斯洛伐克，波兰南美洲巴西北美洲美国加拿大大洋洲澳大利亚··卷第期刘华威等：黄瓜绿斑驳花叶病毒病防治研究进展表 黄瓜绿斑驳花叶病毒病在中国范围内的发生与危害犜犪犫犾犲 犗犮犮狌狉狉犲狀犮犲犪狀犱犱犪犿犪犵犲狅犳犆狌犮狌犿犫犲狉犵狉犲犲狀犿狅狋狋犾犲犿狅狊犪犻犮狏犻狉狌狊犻狀犆犺犻狀犪省份及地区发病率（或面积）产量损失（）引用文献辽宁吉林湖北浙江山东上海江苏安徽台湾，广西，江西，北京，四川，云南，河南，广东，湖南，新疆，甘肃，陕西，山西，海南，河北 犆犌犕犕犞侵染症状及危害侵染寄主后，造成植物组织内的酚类物质、碳水化合物浓度降低，叶绿体数量及叶绿素含量减少。寄主叶部、果实表面通常会产生花叶、斑驳症状，随着病情的发展进一步形成浓绿色的褪绿斑或突起。严重时，造成植株矮化、开花延时，并最终导致作物减产至绝收。同时，西瓜被侵染后，感病植株的果实会形成瓤状空洞、种子周围的果肉呈纤维状而失去食用价值。的侵染对作物生产造成了巨大的经济损失。年日本关东地区西瓜由于的侵染危害，造成约亿日元的损失；年报道英格兰地区的黄瓜由于早期受到侵染产量损失，但后期侵染对产量影响不大；年印度德里地区甜瓜的受侵染率为；年韩国被侵染作物达到；年巴基斯坦部分地区葫芦作物发病率达。年中国辽宁盖州由于种子带毒而导致大面积西瓜感染，失去食用价值。年中国山东、江苏、浙江均有报道在西瓜上大面积发生，。 犆犌犕犕犞防治措施根据以往研究报道，目前已有包括种子处理、化学防治、生物防治、嫁接以及分子育种技术等在内的多种方法和手段被实际应用于防治。 种子处理报道，通过处理的方法，可以使种子中的彻底失活，而处理的种子仍存在的带毒率。随后，他又通过电镜观察和的方法得知基因组对温度的敏感区域位于和，该区域易受温度破坏而造成失活。然而，由于寄藏部位的特殊性以及种壳的保护，发现温度（处理）处理、磷酸三钠（）处理，或者同时采用两种方法处理种子后，结合和检测，结果显示种子仍可能带有病毒，这些处理措施效率不高且不稳定。 化学防治目前，实际生产中已开发出对多种作物病毒病有防治效果的化学制剂，其抗性机制主要是钝化病毒外壳蛋白，影响病毒在寄主体内的定殖或诱导寄主产生抗病性，尽管已进行商业化生产、用于防治作物病毒病的药物已有个，但是却仍未有针对有防治效果的药剂被开发出来（表）。其中，盐酸吗啉胍（）作为最重要、最常用的化学成分之一，可以经植物气孔进入植物体内活细胞中，通过抑制或破坏核酸和外壳蛋白的形成，阻止病毒在植株体内的复制，从而达到防治病毒病的目的。盐酸吗啉胍除了单独使用外（占防治作物病毒病害药剂的），也可与乙酸铜复配使用，目前已成为防治作物病毒病害的主要药剂（占防治作物病毒病害药剂的）。另一种被广泛应用的药剂是氨基寡糖素，它参与调节植物生长、发育的分子信号，并被证实有增强植物抗病能力的作用。香菇多糖从藻类掌状海带（犔犪犿犻狀犪狉犻犪犱犻犵犻狋犪狋犪）中提取、纯化得到，作为一个··非特异性的激发子，通过预处理植物而引起寄主体内蛋白积累、调节寄主免疫功能、刺激植物自身产生干扰素，从而使得寄主对病原微生物产生抗性。混合脂肪酸可通过诱导寄主体内的抗病基因表达、提高病原相关蛋白、酶和细胞分裂素等含量，从而使得植物产生抗病能力。表 我国目前应用于蔬菜和作物病毒病害防治的登记药剂目录犜犪犫犾犲 犆犺犲犿犻犮犪犾狊犳狅狉狋犺犲狆狉犲狏犲狀狋犻狅狀犪狀犱狋狉犲犪狋犿犲狀狋狅犳狏犻狉狌狊犱犻狊犲犪狊犲狊狅狀狏犲犵犲狋犪犫犾犲狊犪狀犱犮狉狅狆狊犻狀犆犺犻狀犪农药名称防治作物种类防治对象登记产品数个占登记产品比例盐酸吗啉胍番茄，烟草病毒病吗胍·乙酸铜·番茄，烟草，辣椒病毒病氨基寡糖素番茄，烟草，玉米病毒病，花叶病毒病香菇多糖番茄，水稻，西葫芦，辣椒，烟草，西瓜病毒病，黑条矮缩病琥铜·吗啉胍·（）番茄病毒病羟烯·吗啉胍·番茄，烟草，番茄，水稻病毒病，黑条矮缩病烷醇·硫酸铜·番茄病毒病混脂·硫酸铜番茄，烟草，西瓜，辣椒病毒病，花叶病毒病辛菌胺醋酸盐（暂无英文）辣椒，番茄病毒病辛菌·吗啉胍番茄，水稻病毒病，黑条矮缩病氯溴异氰尿酸辣椒，烟草病毒病葡聚烯糖（暂无英文）番茄病毒病宁南霉素辣椒，番茄，烟草病毒病烷醇·辛菌胺番茄病毒病烯·羟·硫酸铜··辣椒，烟草病毒病几丁聚糖水稻，番茄病毒病，黑条矮缩病低聚糖素胡椒，番茄，玉米病毒病，粗缩病混合脂肪酸烟草病毒病，花叶病毒病丙唑·吗啉胍·烟草病毒病苦参·硫黄·辣椒病毒病 生物防治在的生物防治策略中，发现狭叶钩粉草（犘狊犲狌犱犲狉犪狀狋犺犲犿狌犿犫犻犮狅犾狅狉）叶子的提取物含有内吸性的抗性诱导因子（，），在温室条件下，通过喷洒其提取物，可以提高黄瓜植株对的抗病性。随后，采用种蕨类植物提取物进行防治的试验，结果发现犃犱犻犪狀狋狌犿犮犪狌犱犪狋狌犿，犇狉狔狅狆狋犲狉犻狊犳犻犾犻狓犿犪狊和犘狅犾狔狆狅犱犻狌犿狆犪狉犪狊犻狋犻犮狌犿的提取物可有效抑制在寄主体内的复制。最近，利用弱毒株系预接种的方式开发出一种保护香瓜免受野生进一步侵染的防治方法。另外，嫁接技术一直以来是葫芦科作物在生产中普遍应用的农事操作技术，也是防治病虫害的有力措施之一。然而，赵慧茹试验证明可从西瓜砧木中运输到其接穗中，从而使得通过嫁接传播而潜在地成为田间的初侵染来源。 抗病分子育种防治由于传播途径的多样性，已采取的防治措施仍不足以彻底杜绝的传播，或者防治效率不高需要投入较多的防治费用，因此，培育抗病性强、抗性稳定的新品种是大势所趋，而基于分子水平的抗病育种成为相对稳定、长期、经济的有效策略。目前，已尝试在一些重要的经济作物上培育转基因抗病性植株，尽管不同寄主的抗性信号以及病··卷第期刘华威等：黄瓜绿斑驳花叶病毒病防治研究进展原侵染机制存在多样性和复杂性，但基于内源基因和外源基因介导培育抗性植株仍是常用的途径之一。通过对大量不同香瓜品种的抗病性测定，成功地筛选到个抗的香瓜野生品种，并进一步通过嫁接、杂交等手段将抗性基因转移到其他葫芦科栽培品种上，以此达到抗病、防病目的，而基于转基因途径防治技术的应用则进一步拓展了对该病害的防治方法。年试验验证了烟草花叶病毒（犜狅犫犪犮犮狅犿狅狊犪犻犮狏犻狉狌狊，）外壳蛋白介导植株的抗性，结果表明由于外壳蛋白的介导作用，接种的转基因烟草植株发病时间延迟，且接种植株上没有产生症状。随后，发现由外壳蛋白介导产生的抗性在南瓜植株中也存在一定的广谱性和遗传性。在已有的研究基础上，发表了由复制酶基因介导产生抗性植株的专利方法；克隆了外壳蛋白、并通过重组载体获得了抗的西瓜植株，并且在获得的株第一代转基因植株中有株具有抗性；年克隆移动蛋白后，通过基因重组和农杆菌介导的方法获得抗的甜瓜植株，进一步由和的方法证明移动蛋白基因可稳定遗传至第三代植株体内。然而，植物病毒在自然条件下通常都是以复合侵染的形式存在，而基于外源基因产生的抗性植株往往存在抗病谱窄、仅抵抗同种病毒侵染等缺陷。因此，在田间条件下，随着转基因植株抗性压力的不断选择和抗性的丧失，亟须培育多病毒基因片段介导的抗性植株。年通过农杆菌介导，将融合了西瓜银斑病毒（犠犪狋犲狉犿犲犾狅狀狊犻犾狏犲狉犿狅狋狋犾犲狏犻狉狌狊，）基因和黄瓜花叶病毒（犆狌犮狌犿犫犲狉犿狅狊犪犻犮狏犻狉狌狊，）、西瓜花叶病毒（犠犪狋犲狉犿犲犾狅狀犿狅狊犪犻犮狏犻狉狌狊，）和的外壳蛋白基因的重组载体转入西瓜栽培种，并由证明单个或多个基因拷贝被成功插入到西瓜基因组中，且在植株中存在对的抗性。利用（）技术在感染的黄瓜植株体内成功鉴定到个差异表达蛋白，（）和（）分析发现这些蛋白注释有不同的功能，其中个蛋白分别参与个代谢通路中，这些代谢通路进一步可融合形成个相对独立的网络关系调控图，从而根据其相互调控关系，有目的地筛选合适的内源病程相关基因来培育抗病植株防治病害。 防治策略展望结合该病害的当前防治现状，作者对基于小分子介导寄主抗病的途径进行了展望，并介绍了下一代测序技术、基因编辑技术在植物病毒病害防治措施中的应用。 小犚犖犃介导调控防治犆犌犕犕犞沉默是真核生物通过核酸序列特异性的相互作用、在水平抑制基因表达、抵抗外来核酸入侵的一种防御机制，这种机制被称之为转录后基因沉默（，）。年记录了感染烟草环斑病毒（犜狅犫犪犮犮狅狉犻狀犵狊狆狅狋狏犻狉狌狊）的烟草植株呈现坏死斑症状，而其上部新叶在第二次接种后对该病毒侵染呈免疫现象、且无坏死斑产生，从而开始最早的沉默（）报道。近年来，由（）和（）介导调控的干扰技术（，）已经成为改善作物生产的重要途径。基于的技术已被广泛应用于作物增产，增强对细菌、真菌、病毒、线虫等有害微生物的抗性，以及改善作物的营养成分组成。年，发现获得的株转外壳蛋白拟南芥植株中的株对产生高抗，植株接种后无系统扩展症状，杂交表明转基因植株体内含有的特异干扰，对的复制具有较高的抑制率并对的侵染有较强抗性，其抗性可稳定遗传至代。但介导的转基因植株易受寄主、环境影响以及存在外源基因与寄主基因组易发生重组等潜在风险。相对于的策略，由于具有更高的特异性和更可观的预见性，以及其在调节植株生长、发育和应答外界压力时的优异表现而日益受到重视。尤其最近几年，由于作物品种差异以及外界不同因子对寄主造成的压力因素，大量的得到鉴定并挖掘出其调控的靶基因，为进一步研究所调控的，远比自身数量更多的靶基因与生物物种或生物学多样性之间的关联性奠定基础。年，··í利用深度测序技术在感染啤酒花类病毒（犎狅狆狊狋狌狀狋狏犻狉狅犻犱，）的黄瓜（犆狌犮狌犿犻狊狊犪狋犻狏狌狊）植株内获得个保守的和个新的特异性，并通过杂交进一步得到验证，其所调控的靶基因分别参与寄主蛋白蛋白互作、组织发育、调节次生代谢等生物过程。结合高通量测序和降解组测序的方法从黄瓜（犆狊犪狋犻狏狌狊）叶和根组织中鉴定出个，发现部分只在特定组织中表达。其中，个首次在黄瓜中鉴定到的已知调控的靶基因分别参与黄瓜发育、抗氧化、信号转导、转录调控等功能。通过黄瓜（犆狌犮狌犿犻狊狊犪狋犻狏狌狊）和南瓜（犆犿狅狊犮犺犪狋犪）之间的嫁接，在其叶和根部组织中鉴定出个已知的和个新的，并由生物学分析明确嫁接操作可直接导致及其靶基因的表达变化，反之，也间接证明可以通过介导靶基因而显著影响嫁接苗的生理过程。从感染的黄瓜植株（犆狊犪狋犻狏狌狊中农）体内获得个新的，其调控的多个靶基因分别参与黄瓜的细胞分化、生长发育、次级代谢、生物或非生物应答、光合作用以及作物产量相关的生物过程。鉴于在植物的抗逆生理和生长发育过程中出众的调控能力，尤其在基因调控网络关键点所起的作用，以及所调控靶基因之间的相互关系，极其有助于在基因转录水平挖掘更多的病程相关基因，从而使得利用介导的转基因植株或利用其所调控的病程相关基因培育抗病品种的研究具有较大的发展潜力。 下一代测序技术和基因编辑技术在防治犆犌犕犕犞中的应用在实际生产中，防治病害的前提是准确发现、鉴定该病害，并通过进一步分析病害与寄主植物的互作关系及其各自基因组的特点，从而根据其特性去制定相应的防治策略。作为一种系统侵染的典型种传病害，缺乏准确、高效的检测手段是其近年来快速传播的重要因素。年，随着下一代测序技术（，）在病毒、类病毒基因组测序、病害检测、诊断、病害流行学以及抗性基因挖掘中的普及应用，基于其高通量测序数据的结果、且不需提供特异性病毒检测试剂的特点，再结合（，：）软件在病原物鉴定及其生物信息学中的强大分析能力，从而使得逐渐成为病害诊断的常规方法，也进一步使得各种侵染或隐藏于传播材料或寄主体内的病毒越来越易于被发现。目前，基于技术鉴定病害的方法，已从植物体内成功鉴定出个新的、病毒和个类病毒类病毒。随后，等通过研究野生马铃薯近缘种少花龙葵（犛狅犾犪狀狌犿犪犿犲狉犻犮犪狀狌犿）携带的抗性基因，结合（单分子实时测序）和（抗性基因）的新一代测序技术成功分离出对枯萎病有广泛抗性的基因。这些新测序技术的应用最大可能地快速发现并鉴定植物材料中携带的病毒，并且极大地缩短了分离抗性基因的时间，间接地减少了作物因病害造成的损失。最近几年，相对于（）和（）基因编辑技术的繁琐费时，高效稳定的第三代基因编辑技术（）逐渐受到研究人员的青睐。是最初在犈犮狅犾犻体内被发现，形成于细菌与病毒的互作过程中、由病毒的部分片段嵌入细菌基因组而形成的（脱氧核糖核酸）片段区域。因此，当病毒再次侵染时，由于蛋白酶对病毒基因组的识别、切割而使得寄主产生免疫应答，从而达到保护寄主的目的。目前，该技术已经被成功地应用于改善植物的生物学性状，或利用其特性来增加植物抵御病虫害的能力。例如：通过利用系统定点突变双子叶植物拟南芥的、基因，结果表明该系统可以准确地造成特定位点双链断裂，且获得效率较高的代纯合突变体。证明在本生烟（犖犫犲狀狋犺犪犿犻犪狀犪）中表达可有效地推迟或减少番茄黄化曲叶病毒（犜狅犿犪狋狅狔犲犾犾狅狑犾犲犪犳犮狌狉犾狏犻狉狌狊，）的积累，从而消除或减轻寄主植物被感染的症状。不同于系统中引导的剪切，最近由刚发现的基因编辑技术中引导的剪切，由于其更加高效精确以及具有更大的灵活性而更加有潜··卷第期刘华威等：黄瓜绿斑驳花叶病毒病防治研究进展力地具有广泛的应用前景。随着基因编辑技术越来越成熟地成功应用于精准农业生产，侵染双子叶葫芦科作物的病毒病害将有望得到有效、彻底的控制。参考文献（），：，中华人民共和国农业部黄瓜绿斑驳花叶病毒防控技术规程，犆狌犮狌犿犫犲狉犵狉犲犲狀犿狅狋狋犾犲犿狅狊犪犻犮狏犻狉狌狊，：，：，犆狌犮狌犿犫犲狉犵狉犲犲狀犿狅狋狋犾犲犿狅狊犪犻犮狏犻狉狌狊（），（）：，：，：，犻狀狏犻狏狅，（）：，（）：，犛狇狌犪狊犺犿狅狊犪犻犮（犆狌犮狌犿犻狊犿犲犾狅），（）：，犆狌犮狌犿犫犲狉犵狉犲犲狀犿狅狋狋犾犲犿狅狊犪犻犮狏犻狉狌狊，（）：陈红远，赵文军，程毅，等辽中地区西瓜花叶病病原的分子鉴定植物病理学报，（）：，（）：，（）：，犆狌犮狌犿犫犲狉犵狉犲犲狀犿狅狋狋犾犲犿狅狊犪犻犮狏犻狉狌狊，（）：，犆狌犮狌犿犫犲狉犵狉犲犲狀犿狅狋狋犾犲犿狅狊犪犻犮狏犻狉狌狊，（）：，犆狌犮狌犿犫犲狉犵狉犲犲狀犿狅狋狋犾犲犿狅狊犪犻犮狏犻狉狌狊（），（）：，：，（）：，犆狌犮狌犿犫犲狉犵狉犲犲狀犿狅狋狋犾犲犿狅狊犪犻犮狏犻狉狌狊，：，犆狌犮狌犿犫犲狉犵狉犲犲狀犿狅狋狋犾犲犿狅狊犪犻犮狏犻狉狌狊，（）：