欢迎来到园艺星球(共享文库)! | 帮助中心 分享价值,成长自我!
园艺星球(共享文库)
换一换
首页 园艺星球(共享文库) > 资源分类 > PDF文档下载
 

干制辣椒雄性不育系与保持系间多态性InDel标记的筛选

  • 资源ID:2919       资源大小:2.37MB        全文页数:5页
  • 资源格式: PDF        下载权限:游客/注册会员/VIP会员    下载费用:0金币 【人民币0元】
快捷注册下载 游客一键下载
会员登录下载
微信登录
下载资源需要0金币 【人民币0元】
邮箱/手机:
温馨提示:
系统会自动生成账号(用户名和密码都是您填写的邮箱或者手机号),方便下次登录下载和查询订单;
验证码:   换一换

加入VIP,免费下载
 
友情提示
2、PDF文件下载后,可能会被浏览器默认打开,此种情况可以点击浏览器菜单,保存网页到桌面,既可以正常下载了。
3、本站不支持迅雷下载,请使用电脑自带的IE浏览器,或者360浏览器、谷歌浏览器下载即可。
4、本站资源下载后的文档和图纸-无水印,预览文档经过压缩,下载后原文更清晰   

干制辣椒雄性不育系与保持系间多态性InDel标记的筛选

北方园艺2017(15)24-28 Northern Horticulture研究论文第一作者简介姜童(1995-),男,硕士研究生,研究方向为蔬菜遗传育种。E-mail583944745@qq.com.责任作者林多(1973-),女,博士,教授,研究方向为蔬菜营养生理与品质育种。E-maillinduo73@163.com.基金项目山东省农业重大应用技术创新资助项目(682214007);山 东 省 农 业 良 种 工 程 资 助 项 目(6622315070);青岛农业大学应用型人才培养特色名校建设工程教学研究资助项目(XJG2013006,XJG2013127);青岛农业大学高层次人才科研基金资助项目(6631115041);山东省自然科学基金资助项目(ZR2014CQ034)。收稿日期2017-04-01doi10.11937/bfyy.20165158干制辣椒雄性不育系与保持系间多态性InDel标记的筛选姜童,王辉,杨 延 杰,林多(青岛农业大学 园艺学院,青岛市遗传改良与育种重点实验室,山东 青岛266109)摘要以3对干制辣椒雄性不育系以及相应保持系(15005A,15006B;16011A,16012B;16063A,16064B)为试材,采用InDel标记的方法对干制辣椒雄性不育系与保持系间进行检测,以期筛选出干制辣椒雄性不育与保持系间存在多态性的标记。结果表明在44个InDel标记中,仅有一个标记CIDH776在3对不育系和保持系间存在一致的多态性,该标记在不育系中分别扩增出约为600bp和650bp左右的DNA片段,而在相应保持系中均未扩增出相应条带。初步认为,分子标记CIDH776可用于干制辣椒雄性不育系与保持系间的分子标记辅助鉴定。关键词干制辣椒;雄性不育;InDel标记中图分类号S 641.303.6 文献标识码A 文章编号1001-0009(2017)15-0024-05辣椒(Capsicum annuumL.)属茄科辣椒属一年生或有限多年生植物,因其维生素C含量高而深受消费者欢迎。辣椒雄性不育是指植物花药不能产生正常有功能的花粉的现象,通常包括花药无法产生花粉,花粉败育以及花药无法开裂这几种现象。由于辣椒杂交优势明显,目前市场上所用的大部分种子是杂交一代,但是随着国内农资以及劳动力等价格的提高,杂种一代的生产成本也逐渐增高,而雄性不育是迄今为止能够降低这一成本的有效途径之一[1]。InDel即插入缺失,是针对基因组中插入缺失位点而设计的PCR标记,广泛分布于基因组,数目众多,经PCR扩增、电泳分离以及相应的染色技术检测,得到的多态性DNA片段即为InDel标记,具有分布广、重复性好、检测方便、呈共显性except ClaCBL1in extracelular matrix.In addition,there are several cis-elements existed in upstreamsequences of watermelon CBL genes,which could response to different environmental stimuli andphytohormones.And the cis-element types and number of different watermelon CBLgenes were notidentical.These results indicated that watermelon CBL genes might involve in multiple biologicalprocesses and they had different functions.Keywordswatermelon(Citrullus lanatus);CBL gene;sequence characterization;protein structure;phylogeny;cis-elements 遗传等优点,被广泛用于植物遗传多样性分析、高密度遗传图谱构建、基因定位、种子纯度鉴定和分子标记辅助育种等研究领域[2]。近年来,应用In-Del标记进行基因定位受到许多学者关注,在种质资源遗传多样性和亲缘关系等[3-6]领域已有大量研究,但对于干制辣椒InDel标记的研究尚鲜见报道。该研究以3对干制辣椒雄性不育系以及相应保持系为试料,采用InDel标记的方法对干制辣椒不育系与保持系相关标记进行筛选,以期筛选出InDel标记,为干制辣椒不育系与保持系相关分子标记辅助选择方面提供一定参考。1 材料与方法1.1 试验材料3对辣椒材料雄性不育系和相应保持系材料(15005A,15006B;16011A,16012B;16063A,16064B;其中A和B分别表示雄性不育系和保持系)由青岛农业大学园艺学院干制辣椒育种课题组提供;分布于辣椒12条染色体上的44对InDel引物为LI等[7]开发的辣椒InDel标记(表1),引物由上海生物工程公司合成。1.2 试验方法1.2.1 干制辣椒基因组DNA的提取采用改良CTAB法[8]和植物基因组DNA提取试剂盒2种方法,分别提取干制辣椒材料DNA。改良CTAB法具体步骤如下,①取样新鲜叶片取直径2cm的小片,加入2mL离心管中。②研磨向离心管中加入液氮用玻璃棒充分研磨至粉末状。植物基因组DNA提取试剂盒购自天根生化科技(北京)有限公司,按试剂盒说明书步骤,提取干制辣椒叶片基因组DNA。1.2.2 琼脂凝胶电泳检测取DNA样品5μL与1μL 6loadingbuff-er混匀后上样,1%琼脂糖凝胶(含荧光染料GoldViewTM)电泳检测DNA质量。电泳条件120V电泳45min,Bio-Rad凝胶成像系统下观察照相。1.2.3 InDel-PCR扩增利用干制辣椒InDel引物对6份DNA样品进行PCR扩增。PCR反应体系为DNA模板2μL(约40ng),正反引物各1μL,2Go TaqRColorless Master Mix 8μL,加ddH2O至终体积15μL;循环体系为94℃预变性5min;94℃变性30s,59.5℃退火30s,72℃延伸45s,共35个循环;72℃总延伸5min;4℃保存扩增产物,退火温度不是固定不变的,不同引物有不同的退火温度,将这44对引物按照相近温度分为3类58.0、59.0、60.0℃。1.2.4 聚丙烯酰胺凝胶电泳取2μL扩增产物于8%非变性聚丙烯酰胺凝胶进行电泳检测,分子量大小为1 000bp的Marker 2μL,250V电压下电泳50min。电泳结束后,清水冲洗玻璃板两面,使凝胶冷却,然后进行银染和显色,置于灯箱上照相。表1 试验所用的InDel引物Table 1 InDel primer sequence used in the study编号No.标记名称Marker name编号No.标记名称Marker name编号No.标记名称Marker name编号No.标记名称Marker name1 CIDH373 12 CIDH872 23 CIDH279 34 CIDH8592 CIDH440 13 CIDH437 24 CIDH304 35 CIDH8073 CIDH200 14 CIDH858 25 CIDH351 36 CIDH6144 CIDH552 15 CIDH49 26 CIDH307 37 CIDH295 CIDH325 16 CIDH634 27 CIDH404 38 CIDH3606 CIDH776 17 CIDH270 28 CIDH764 39 CIDH4267 CIDH202 18 CIDH494 29 CIDH667 40 CIDH2378 CIDH28 19 CIDH580 30 CIDH825 41 CIDH8009 CIDH69 20 CIDH293 31 CIDH377 42 CIDH84810 CIDH8 21 CIDH218 32 CIDH124 43 CIDH13111 CIDH81 22 CIDH696 33 CIDH509 44 CIDH90852 第15期北方园艺2 结果与分析2.1 基因组DNA质量检测将提取的干制辣椒材料基因组DNA进行了琼脂糖电泳检测,采用2种方法提取的DNA完整性好,而且点样孔干净。但采用改良CTAB法(图1)提取的DNA纯度、质量浓度均没有植物基因组DNA提取试剂盒(图2)的高,该研究采用植物基因组DNA提取试剂盒提取的DNA进行了后续试验。2.2 不育系和保持系基因组DNA多态性InDel引物筛选针对每对不育系和保持系均进行了44对InDel引物的检测,其中15005A,15006B的检测结果如图3所示,在这44对InDel引物中有3对(CIDH776、CIDH28、CIDH81)在不育系和保持系间存在多态性。对其它2对材料也进行相同的筛选过程,其中16011A与16012B间有2对引物(CIDH776和CIDH279)存在多态性;16063A与16064B间也有2对引物(CIDH776和CIDH29)存在多态性。所选44对InDel引物在3对不育系和保持系间的多态性比例分别为6.8%、4.5%和4.5%;而且有一对引物CIDH776在3对不育系和保持系间存在一致的多态性,多态性比例为2.3%。注M为Marker;1~6依次为编号15005A、15006B、16011A、16012B、16063A、16064B。下同。NoteM.Marker;1-6,the order number are 15005A,15006B,16011A,16012B,16063Aand 16064B,respectively.The same as folows.图1改良CTAB法提取辣椒基因组DNA电泳检测Fig.1 Improved CTAB method for detection of genomic DNA in pepper图2植物基因组DNA提取试剂盒提取辣椒基因组DNA电泳检测Fig.2 Genomic DNA extraction kit of genomic DNA in pepper2.3 CIDH776在3对干制辣椒雄性不育系与保持系间的扩增情况通过对3对不育系和保持系进行的多态性InDel引物的筛选可知(图3~4),CIDH776标记在3对不育系和保持系间均存在一致的多态性,在3份不育系中可同时扩增出4条DNA片段,其中2条大小约为600bp和650bp的DNA片段是在不育系中所特有的;而在3份保持系中均扩增出2条DNA条带。可见该标记在供试的不育系和保持系间表现为显性标记。62北方园艺8月(上)注M为Marker;1~44为44对引物。NoteM.Marker;1-44.44pairs of primers.图3亲本15005A,15006B的聚丙烯酰胺凝胶电泳Fig.3 SDS-PAGE electrophoresis analysis of 15005A,15006B图4InDel标记CIDH776在不育系和保持系中的PCR扩增结果Fig.4 Result of PCR amplification of CIDH776insterile and maintainer3 结论与讨论该研究以3对干制辣椒雄性不育系以及保持系为试验材料,利用均匀分布于辣椒12条染色体上的44对InDel引物进行了干制辣椒雄性不育系与保持系间的PCR检测,结果筛选到1对引物CIDH776在供试的干制辣椒雄性不育系和保持系间存在一致的多态性。近年来,许多辣椒育种研究者在品种选育、辣椒不育机理探寻和不育基因定位上开展了大量工作。王得元等[9]以辣椒细胞质雄性不育系93-A及其保持系93-B为材料开展了RAPD标记研究,并获得了2个细胞质雄性不育基因相关的标记OPK-17550和OPK-171500,同时认为标记OPH-112000可能与保持系中的保持基因相关。72 第15期北方园艺王述彬等[10]也利用RAPD技术对辣椒细胞质雄性不育系21A与其相应保持系21B的基因组DNA进行了比较分析,并获得了不育系21A基因组DNA特异的RAPD片段。魏兵强等[11]也利用类似的方法获得了与不育基因相关的RAPD标记BH19-S900。这些标记对于分子辅助育种有实践意义和一定的利用价值。该试验中,利用基因组锚定标记InDel对3对干制辣椒不育系和相应保持系开展了多态性引物筛选,并从中筛选到了1个稳定的多态性标记CIDH776。LI等[7]研究认为该InDel标记在第6号染色体上,且目的片段为350bp;该试验中6份材料在目的条带处均未表现多态性,但存在650bp左右的多态性片段,可见该处的扩增片段为非特异性扩增。尽管该标记在3对不育系和保持系间存在一致的多态性,该多态性用于区分不育系和保持系。但对于该InDel CIDH776标记的应用范围及多态性片段的序列信息等尚需进一步研究。参考文献[1]傅鸿妃,柴伟国,吕晓菡,等.雄性不育在我国辣椒品种选育中的应用及不育基因定位研究进展[J].现代农业科技,2016(3)119-121.[2]张志刚,赵智中,李巧云,等.大白菜InDels标记开发及其在剩余杂合体鉴定中的应用[J].农业生物技术学报,2016,24(4)510-518.[3]姚国新,黄文超.利用水稻籼粳分化InDel标记鉴定育种材料的籼粳属性[J].杂交水稻,2013,28(3)53-57.[4]葛敏,蒋璐,张晓林,等.利用Insertion/Deletion(InDel)分子标记检测玉米互交种混杂的原理及应用[J].分子植物育种,2013,11(1)37-47.[5]申璐,沈炎林,柴敏,等.采用InDel和SSR标记分析番茄品种基因组DNA 多态性[J].中国农业大学学报,2011,16(2)34-42.[6]李斯更,沈镝,刘博,等.基于黄瓜基因组重测序的InDel标记开发及其应用[J].植物遗传资源学报,2013,14(2)278-283.[7]LI W,CHENG J,WU Z,et al.An InDel-based linkage mapof hot pepper(Capsicum annuum)[J].Molecular Breeding,2015,35(1)1-10.[8]谢立波,郭亚华,孟凡娟,等.辣椒RAPD扩增体系的建立[J].安徽农业科学报,2010,38(34)19272-19274.[9]王得元,王鸣,郑学勤,等.用RAPD分析辣椒细胞质雄性不育基因[J].核农学报,2005,19(2)99-102.[10]王述彬,刘金兵,潘宝贵,等.辣椒细胞质雄性不育系与其保持系基因组DNA的RAPD分析[J].上海农业学报,2008,24(1)8-10.[11]魏兵强,王兰兰,陈灵芝,等.辣椒胞质雄性不育基因的分子标记[J].西北农业学报,2010,19(10)166,168-173.Selection of InDel Markers Associated With Male Sterile Gene in Dry PepperJIANG Tong,WANG Hui,YANG Yanjie,LIN Duo(Horticultural Colege,Qingdao Agricultural University/Key Laboratory of Genetic Improvement and Breeding ofQingdao,Qingdao,Shandong 266109)AbstractThree pairs of drypepper male sterile lines and maintain lines(15005A,15006B;16011A,16012B;16063A,16064B)were used as materials,and polymorphism InDel markers was selectedbetween sterile lines and correspondingmaintainer lines.The results indicated that onlyone markerCIDH776in the 44InDel markers showed the same polymorphism between three pair of male sterilelines and correspondingmaintainer lines.Two DNA fragments about 600bpand 650bpwere amplifiedin three male sterile lines,but there was no amplification in correspondingmaintainer lines.Therefore,InDel marker CIDH776could be used for molecular marker assisted identification of male sterile lineand maintainer line.Keywordsdrypepper;male sterile;InDel marker82北方园艺8月(上)

注意事项

本文(干制辣椒雄性不育系与保持系间多态性InDel标记的筛选)为本站会员(杨延杰 副教授)主动上传,园艺星球(共享文库)仅提供信息存储空间,仅对用户上传内容的表现方式做保护处理,对上载内容本身不做任何修改或编辑。 若此文所含内容侵犯了您的版权或隐私,请立即通知园艺星球(共享文库)(发送邮件至admin@cngreenhouse.com或直接QQ联系客服),我们立即给予删除!

温馨提示:如果因为网速或其他原因下载失败请重新下载,重复下载不扣分。




固源瑞禾
关于我们 - 网站声明 - 网站地图 - 资源地图 - 友情链接 - 网站客服 - 联系我们

copyright@ 2018-2020 华科资源|Richland Sources版权所有
经营许可证编号:京ICP备09050149号-1

     京公网安备 11010502048994号


 

 

 

收起
展开