南瓜种质资源遗传多样性的SRAP分析

<p>南瓜属 （Cucurbita L）葫芦 科 南瓜属的一年生草本植物 ， 起源于美洲 ， 在 16 世纪 中 叶明中期传入中国1。 南瓜 全 球目前栽培种主要有 5 个 ： 分别 是中 国南瓜 ， 印度南瓜 ， 美洲南瓜 ， 灰籽南瓜和黒籽南瓜 ， 在中国主要是栽培前 3 种 。 南瓜 是 人类最早栽培的古老作物之一 ， 在公元前 4050 年就 开 始了美洲南瓜的栽培 ， 公元前 50003000 年就 有 了中国南瓜和墨西哥南瓜的残片存在2。 据统计 ， 中 国已经入库保存的南瓜份数总共有 1813 份 ， 其中 中 国南瓜 1 064份 ， 印度 南 瓜 357 份 ， 美洲 南 瓜 389 份 ， 黑籽 南 瓜占 3 份3。 由于 地 区间相互引种 、 种子公司自繁自育 、 农民自繁自育 ， 导致市场上南瓜品种的名称众多 ，同名异物或同物异名的情况频繁出现 ， 给南瓜种质资源的收集工作和南瓜的育种工作造成困难 。 因此对于育种工作者来说 ， 种质资源收集完成后 ， 通过对收集的资源进行系统的评价分析 ， 才能够更加明确需要选择的育种亲本 ， 实现相应的育种目标 。SRAP（sequence-related amplified polymorphism）又称 为 相关序列扩增多态性 ， 2001 年由 美 国加州蔬菜作物系的 Li 等4发明 的 ， 是 一种基于 PCR 反应热 带 作物学报 2015， 36（12）： 2142-2148Chinese Journal of Tropical Crops收稿 日 期 2015-03-28 修回 日 期 2015-06-03基金 项 目 福建省农业科学院瓜类育种科技创新团队 （No. CXTD-1-04）； 福 建 省农业科学院科技创新团队项目 （No. CXTD-1-1304）； 福 建 省属公益类科研院所基本科研专项 （No. 2014R1026-11）。作 者 简介 卢 丽 芳 （1990 年 ）， 女 ， 在 读 硕 士 ； 研 究 方 向 ： 园 艺 植 物 分 子 生 物 学 。 * 通 讯 作 者 （Corresponding author）： 朱 海 生（ZHU Haisheng）； 温 庆 放 （WEN Qingfang）。南瓜种质资源遗传多 样性的 SRAP 分析卢丽 芳1， 朱海 生2，3，4*， 温庆 放2，3，4*， 林义 章11 福建 农 林大学园艺学院 ， 福建福州 3500022 福建省 农业科学院作物研究所 ， 福建福州 3500133 福 建 省 农业科学院蔬菜研究中心 ， 福建福州 3500134 福建 省 蔬菜工程技术研究中心 ， 福建福州 350013摘 要 本 研 究应用 SRAP 分子 标 记技术对所收集的 85 份南 瓜 资源进行亲缘关系分析 ， 从 100 对引 物 中挑出 17对 引 物 对其进行条带扩增 。 结果表明 ： 共获得条带 200 条 ， 差 异 带 有 187 条 ， 13 条 条 带 为所有南瓜品种所共有 ， 多态性比例为 93.5 。 基 于 SRAP 数 据 通 过 Ntsys2.10e 软 件 计 算出 85 份 南 瓜 资源的遗传 相似 系 数 在0.450 00.985 0。 通过 聚 类分析将所收集的南瓜资源分为 3 大类 ： 中 国 南瓜 、 印度南瓜 、 美洲南瓜 ， 亲缘关系较近的是中国南瓜与美洲南瓜 ， 二者与印度南瓜的亲缘关系较远 。关键词 南瓜 ； SRAP； 亲缘 关 系 ； 聚类分析中图分类号 S642.1 文献 标 识码 AAnalysis of Genetic Diversity in Squash by SRAP MarkersLU Lifang1， ZHU Haisheng2，3，4*， WEN Qingfang2，3，4*， LIN Yizhang11 College of Horticulture， Fujian Agriculture and Forestry University， Fuzhou， Fujian 350002， China2 Crops Research Institute， Fujian Academy of Agricultural Sciences， Fuzhou， Fujian 350013， China3 Vegetable Research Center， Fujian Academy of Agricultural Sciences， Fuzhou， Fujian 350013， China4 Fujian Engineering Research Center for Vegetables， Fuzhou， Fujian 350013， ChinaAbstract In this study， SRAP was used to analyse the genetic relationship of 85 accessions in squash.Seventeen pairs of primers were screened out of 100 primer pairs which produced 200 DNA bands, with 187bands of polymorphic and 13 bands for all squash. The ratio of polymorphic bands was 93.5%. Based on theSRAP data， the genetic similarity coefficient of 85 accessions in squash was between 0.450 0 to 0.985 0, whichwas calculated by Ntsys2. 10e. Through cluster analysis， Squashes were divided into three groups： Cucurbitamoschata， C. maxima， C. pepo. The relationship of C. moschata and C. pepo were close， the kinship with the C.maxima was far.Key words Squash； SRAP； Genetic relationship； Cluster analysisdoi 10.3969/j.issn.1000-2561.2015.12.006第 12 期卢丽 芳 等 ： 南瓜种质资源遗传多样性的 SRAP 分析编号 种质 名称 来源 种质类型 编号 种质名称 来源 种质类型1 密本 南 瓜 （特别种 ） 澄海 中国南瓜 44 一串 铃 1号南 瓜 （花 皮 ） 衡阳 中国南瓜2 原 种 密 本南瓜 湖北 中国南瓜 45 蜜 枣 南 瓜 （998） 澄 海 中 国南瓜3 密 本 南 瓜 晋中 中国南瓜 46 甜 面 大 南瓜 山西 印度南瓜4 夷香 密 本 山西 中国南瓜 47 五月 早 南瓜 湖北 中国南瓜5 密本 南 瓜 河北 中国南瓜 48 金密 南 瓜 河北 中国南瓜6 密本 南 瓜 江西 中国南瓜 49 金勾 南 瓜 山西 中国南瓜7 密本 南 瓜 金塔 中国南瓜 50 红栗 南 瓜 河北 印度南瓜8 密本南 瓜 山西 中国南瓜 51 一串铃 4号南瓜 衡 阳 中国南瓜9 密本 南 瓜王 金塔 中国南瓜 52 胜栗 晋 中 印度南瓜10 密 本 南 瓜 8-2-2 福 建 福 州 中国南瓜 53 黑 蜜 宝 山 西 印度南瓜11 密 本 2 号 福 建 福州 中国南瓜 54 君 川 金 栗 吉林 印度南瓜12 密本 南 瓜 山西 中国南瓜 55 黑冠 军 山 西 印度南瓜13 金钩 南 瓜 辽宁 中国南瓜 56 谢花 面 南瓜 河北 印度南瓜14 大金 钩 南瓜 河北 中国南瓜 57 黑蜜 南 瓜 山西 中国南瓜15 青丰金 钩南瓜 河北 中国南瓜 58 迷你贝 贝 日本 印度南瓜16 庭院 南 瓜 韩国 中国南瓜 59 台友 红 南瓜 台湾 印度南瓜17 星早 南 瓜 韩国 中国南瓜 60 中夏 南 瓜一号 厦门 中国南瓜18 巨 型 南 瓜 美国 印度南瓜 61 中 夏 南 瓜二号 厦门 中国南瓜19 无 蔓 一 号 辽宁 中国南瓜 62 绿 皮 南 瓜 F1 厦 门 印 度南瓜20 新无 蔓 一号 山西 中国南瓜 63 世龙 金 密南瓜 衡阳 中国南瓜21 短蔓 红 吉 林 印度南瓜 64 无蔓 一 号 福建福州 中国南瓜22 短蔓 红 韩 国 印度南瓜 65 李白 福 建 福州 印度南瓜23 日本南 瓜 青县 印度南瓜 66 早熟京 绿栗 甘肃 印度南瓜24 日本 南 瓜 辽宁 印度南瓜 67 红板 栗 山 西 印度南瓜25 江西 农 家种 江西 中国南瓜 68 韩香 栗 甘 肃 印度南瓜26 圆南 瓜 （三 明 ） 福建三明 印度南瓜 69 京银 栗 南瓜 山西 印度南瓜27 三 明 长 南瓜 福建三明 中国南瓜 70 晶 珠 早 南瓜 衡阳 美洲南瓜28 永定 南 瓜 1 福建 永 定 中国南瓜 71 美国 绿 丹 山西 美洲南瓜29 永定 南 瓜 2 福建 永 定 中国南瓜 72 晶莹 翠 青 县 美洲南瓜30 武夷 山 南瓜本地种 2 号 福 建 武夷山 中国南瓜 73 改良 早 青一代 河北 美洲南瓜表 1 供试 材 料及来源Table 1 The test materials and sources的新 型 标记系统 ， 具有多态性高 、 样品信息量大 、操作简便 、 重复稳定 、 可靠性高 、 费用低 、 非等位检测的优点5。 其 原 理 是通过对富含 GC 碱 基 的 外显子和富含 AT 的内 含 子及启动子的 ORF（开放 式阅 读框 ）设计一对独特的引物进行特异性扩增 ， 从而表现出多态性6。 为 了 从 分子水平上了解南瓜种质 资 源 的 遗 传 多 样 性 ， 人 们 已 经 用 RAPD7-11、ISSR10-11、 AELP12对遗传 多样性进行分析 。 关于利用 SRAP 分 子 标 记对南瓜种质资源遗传多样性进行研究的报道较少 ， 刘小俊等13利用 SRAP 对收 集 的76 份南 瓜 资源进行遗传多样性分析 。 本研究在广泛收集南瓜种质资源 、 优化南瓜 SRAP 扩增 体 系的基础上14， 对所 收 集到的 85 份南 瓜 种质资源进行遗传多样性分析 ， 建立遗传聚类图 ， 鉴定品种间的亲缘关系 ， 为南瓜种质资源的鉴定 、 分类和南瓜的育种工作提供相应的理论依据 。1 材料 与 方法1.1 材 料供 试 材料共 85 份 ， 见表 1。 包括 中 国南瓜 ，印度南瓜和美洲南瓜 3 个栽培 种 。 材料来源于全国各地 。1.2 方法1.2.1 供试 南 瓜 DNA 的提 取 参 考卢丽芳等14的方法 。1.2.2 PCR 反应 及 电泳 反应在 PCR 仪上 进 行 ，2143- -第 36 卷热 带 作 物 学 报引物 类 型 序列 （53）ME4 正向 引 物 TGAGTCCAAACCGGACCME6 正向 引 物 TGAGTCCAAACCGGTAAME7 正向引 物 TGAGTCCAAACCGGTCCME8 正向 引 物 TGAGTCCAAACCGGTGCME9 正向 引 物 TGAGTCCAAACCGGME10 正向 引 物 TGAGTCCAAACCGGEM1 反向 引 物 GACTGCGTACGAATTAATEM2 反向 引 物 GACTGCGTACGAATTTGCEN3 反向 引 物 GACTGCGTACGAATTGACEM5 反向 引 物 GACTGCGTACGAATTAACEM8 反向 引 物 GACTGCGTACGAATTCTGEM9 反 向 引 物 GACTGCGTACGAATTCGAEM10 反向 引 物 GACTGCGTACGAATTCAG表 2 SRAP 分析 所 用的正向引物序列和反向引物序列Table 2 The forward and reverse primersused in the SRAP analysis编号 种 质 名称 来源 种质类型 编号 种质名称 来源 种质类型31 武夷 山 南瓜本地种 1 号 福 建 武夷山 中国南瓜 74 西葫 芦 早青一代 贵州 美洲南瓜32 武夷 山 南瓜本地种 3 号 福 建 武夷山 中国南瓜 75 新早 青 一代 山西 美洲南瓜33 本地南 瓜子 福建莆田 中国南瓜 76 湘葫一 号 湖南 美洲南瓜34 庐 丰 安 3 福 建 莆 田 中国南瓜 77 西 葫 芦 福 建福州 美洲南瓜35 长 型 南 瓜 福建莆田 美洲南瓜 78 碧 珠 山 西 美洲南瓜36 圆 形 种 福 建福州 中国南瓜 79 京 株 甘 肃 美洲南瓜37 南 瓜 子 福 建福州 中国南瓜 80 京 香 蕉 甘 肃 美洲南瓜38 日本 甜 栗 山西 印度南瓜 81 金榜 晋 中 美洲南瓜39 日本 甜 栗 晋中 印度南瓜 82 金珠 晋 中 美洲南瓜40 日本 红 栗 荷兰 印度南瓜 83 京葫 一 号 甘肃 美洲南瓜41 进口红 栗 日本 印度南瓜 84 满田雅 绿 河北 美洲南瓜42 短蔓 京 红栗 B 甘肃 印 度 南瓜 85 雪玉 辽 宁 美洲南瓜43 短 蔓 京 绿栗 甘肃 印度南瓜续表 1 供试 材 料及来源Table 1 The test materials and sources （continued)扩 增 反 应 体 系 为 20 uL， 其 中 包 括 0.2 mmol/LdNTP， 1.5 U Taq 酶 ， 80 ng DNA， 0.16 umol/L 的 单条 引 物 ， 1.5 mmol/L 的 Mg2+， 2 uL 10×Buffer。 扩 增程 序 ： 94 5 min 预 变 性 ； 接 着进入 5 个 循 环 ， 包括 94 1 min， 35 1 min， 72 1 min； 然后 进入 35 个循 环 ， 包 括 94 1 min， 52 1min， 72 1 min； 最 后 72 延 伸 10 min。 将 扩 增 产 物 用1.8 的琼 脂 糖凝胶进行电泳检测 ， 电泳缓冲液为1×TBE， 采用 DL 2 000 DNA Marker 作为标 准分子量对照 ， 电泳时间 45 min。 电泳完 成后 ， 在 EB 中染色 10 min 左右 ， 放入 到凝胶成像分析系统中观察 、 拍照 。1.2.3 数据 统 计 根据所获得的电泳图进行数据的统计和处理 。 电泳图中的每一条带代表着模板DNA 和引 物 之间的一个结合位点 ， 根据 DNA 扩增结 果 ， 进 行人工计数 ， 统计不同品种之间有重复性的多态性扩增条带 ， 有条带的记为 1， 没有 条 带的则记为 0， 从而 形 成由 0 和 1 组成 的 原始矩阵 。 采用 Ntsys2.10e 软件 进 行数据处理 ， 获得相应的相似系数表和树状聚类图 。2 结果 与 分析2.1 引物 筛 选通过选用外观形状差异较大的 5 个南 瓜 品种对100 对引 物 进行筛选 ， 选出 13 条引 物 （表 2）将其 用于 南瓜 SRAP 分析 ， 其 中 上游引物 6 条 ， 下游 引 物7 条 。 组成 17 对多 态 性高 、 重复性好 、 条带清晰的 SRAP 引物 ， 以 此 对 85 份南 瓜 材料进行 SRAP遗传 多 样性分析 ， 结果见表 3。2.2 17 对引 物 的 SRAP 扩增 结 果由表 3 可知 ， 17 对引 物 共扩增出条带 200 条 ，平 均 每 个引物扩增出条带 11.76 条 ， 其中 差 异带有187 条 ， 13 条条 带 为所有南瓜品种所共有 ， 多态性比例为 93.5 。 其中 ME7EM1 组合 扩 增条带数最多 ， 达 到 17 条 ， 多 态 性 为 100 ， 见 图 1。ME6EM9 扩增 条 带数最少 ， 为 8 条 ， 差异 带 有 7条 ， 多态 性 为 87.5 。 17 对引 物 扩增条带的多态性 ， 最高为 100 ， 最低 为 77.78 。 结果 表 明 ，南瓜种质资源的遗传多样性很高 ， 同时也表明了SRAP 分 子 标 记能够很好地检测南瓜种质资源的遗传多样性 。2144- -第 12 期卢丽 芳 等 ： 南瓜种质资源遗传多样性的 SRAP 分析种质 类 型 中国南瓜 印度南瓜 美洲南瓜 中国 -印度 南 瓜 中国 -美洲 南 瓜 印度 -美洲 南 瓜多态性 / 45 51.5 31.5 78.5 76 81.5表 4 17 对引 物 对各种质类型南瓜的扩增多态性Table 4 The polymorphism of different Squash type by 17 primer pairs图 1 引物 ME7EM1 对 85 份南 瓜 的扩增结果Fig. 1 The amplification result of primer ME7EM1引物 总带 数 差异带 基本带 多态性 /ME10/EM10 16 15 1 93.75ME10/EM9 12 12 0 100.00ME7/EM1 17 17 0 100.00ME4/EM5 9 8 1 88.90ME4/EM2 11 10 1 90.90E6/EM9 8 7 1 87.50ME6/EM10 11 10 1 90.90ME7/EM3 12 12 0 100.00ME8/EM8 14 11 3 78.57ME9/EM1 9 7 2 77.78ME9/EM5 13 12 1 92.31ME10/EM2 11 10 1 90.90ME10/EM3 14 14 0 100.00ME10/EM5 10 9 1 90.00ME7/EM2 13 13 0 100.00ME6/EM3 9 9 0 100.00ME9/EM2 11 11 0 100.00合 计 200 187 13 93.50表 3 17 对引 物 的扩增统计结果Table 3 The amplicon of 17 primer pairs由 表 4 可 知 ， 3 个 栽 培 种的种内多态性高低顺序为 ： 印度南瓜 中国 南 瓜 美洲 南 瓜 ， 分别为51.5 、 45 、 31.5 。 而种 间 两两多态性为 ： 中国 -印度 南 瓜为 78.5 ， 中国 -美洲 南 瓜为 76 ，印 度 -美洲 南 瓜为 81.5 。2.3 85 份南 瓜 聚类结果基于 SRAP 数据 通 过 Ntsys2.10e 软件 计 算出 85南瓜 资 源的遗传相似系数 。 85 份南 瓜 遗传相似系数在 0.450 00.985 0， 平 均 为 0.7155。 其 中 材 料 10与材 料 83 的遗 传 相似系数最小 （为 0.450 0）， 说 明材 料 10 与材 料 83 的亲 缘 关系最远 。 材料 52 与材料 54 的遗 传 相似系数最大 （为 0.985 0）， 说 明 材料52 与材 料 54 的亲 缘 关系最近 。采用 Ntsys2.10e 软件 对 85 份南 瓜 资源亲缘关系进行 SRAP 分析 。 根 据 图 2 可知 ， 在 遗 传相似系数为 0.616 0 处 ， 可将 南 瓜分为 3 大类 ， 分 别 是中2145- -第 36 卷热 带 作 物 学 报12453626113314282915192032347893764494748511327303157633612251617606144457071747576857784827879808183357273234640421018212241383924525456535562656667685859435068图 2 85 份南瓜 聚类图Fig. 2 A dendrogram of 85 Squash0.55 0.66 0.77 0.88 0.98Coefficient2146- -第 12 期卢丽 芳 等 ： 南瓜种质资源遗传多样性的 SRAP 分析国南 瓜 、 印度南瓜 、 美洲南瓜 。 亲缘关系较近的是中国南瓜与美洲南瓜 ， 2 类南 瓜 与印度南瓜的亲缘关系较远 。第一类 ： 中国南瓜 （41份 ）， 包 括 密本南瓜特别种 （1）、 原 种 密本南瓜 （2）、 夷 香 密本 （4）、 密 本 南瓜 （5）、 密 本 南瓜 （3）、 密 本 南瓜 （6）三 明 圆 南瓜（26）、 密 本 2 号 （11）、 本 地 南瓜子 （33）、 大 金 钩南瓜 （14）、 永定 南瓜 1号 （28）、 永定 南瓜 2 号 （29）、青丰 金钩南瓜 （15）、 无 蔓 一号 （19）、 新 无 蔓一号（20）、 武 夷 山南瓜 本 地 种 3 号 （32）、 庐 丰 安 3（34）、 密 本 南瓜 （7）、 密 本 南瓜 （8）、 密 本 南瓜王（9）、 南 瓜 子 （37）、 无 蔓 一 号 （64）、 金 勾 南 瓜（49）、 五 月 早南瓜 （47）、 金 密 南瓜 （48）、 一 串 铃一号南瓜 （51）、 金钩 南瓜 （13）、 三明 长南瓜 （27）、 武夷山 南瓜本地种 2 号 （30）、 武 夷 山南瓜本地种 1 号（31）、 黑 密 南瓜 （57）、 世 龙 金密南瓜 （63）、 圆 形 种（36）、 密本 南瓜 （12）、 江西 农家种 （25）、 庭院 南瓜（16）、 星 早 南瓜 （17）、 中 夏 南瓜 1 号 （60）、 中 夏 南瓜 2 号 （61）、 一 串 铃 1 号南 瓜 （花 皮 ）（44）、 蜜 枣 南瓜 （998）（45）。第 二 类 ： 美洲南瓜 （17 份 ）， 有 晶 珠早南瓜（70）、 美 国 绿丹 （71）、 西 葫 芦早青一代 （74）、 新 早青 一代 （75）、 湘 葫 一号 （76）、 雪 玉 （85）、 西 葫 芦（77）、 满 田 雅绿 （84）、 金 珠 （82）、 碧 珠 （78）、 京 珠（79）、 京 香 蕉 （80）、 金 榜 （81）、 京 葫 一号 （83）、 长型 南 瓜 （35）、 晶莹 翠 （72）、 改良 早青一代 （73）。第三 类 ： 印度南瓜 （27份 ）， 有 日 本南瓜 （23）、甜 面 大南瓜 （46）、 日 本 红栗 （40）、 短 蔓 红栗 （42）、密 本 南瓜 （10）、 巨 型 南瓜 （18）短蔓 红 （21）、 短 蔓 红（22）、 进 口 红栗 （41）、 日 本 甜栗 （38）、 日 本 甜栗（39）、 日 本 南瓜 （24）、 胜 栗 （52）、 君 川 金栗 （54）、谢 花 面南瓜 （56）、 黑 蜜 宝 （53）、 黑 冠 军 （55）、 绿 皮南 瓜 F1（62）、 李 白 （65）、 早 熟 京绿栗 （66）、 红 板栗 （67）、 韩 香 栗 （68）、 迷 你 贝贝 （58）、 台 友 红南瓜（59）、 短 蔓 京绿栗 （43）、 红 栗 南瓜 （50）、 京 银 栗南瓜 （69）。3 讨论 与 结论SRAP 分子 标 记在蔬菜15-17、 花卉18、 果树19的亲 缘 关 系鉴定和遗传多样性分析上应用广泛 ， 在南瓜上应用不多 。 仅刘小俊等13利用 SRAP 分子 对 南瓜种质资源遗传多样性进行分析 ， 结果表明 SRAP分子 标 记将 76 份南 瓜 材料分为 3 大类 ， 分 别 是中国南瓜 、 美洲南瓜和印度南瓜 。 刘小俊等8应用RAPD 分子 标 记对 30 份在 中 国栽培的南瓜进行遗传多样性分析 ， 分类结果与其应用 SRAP 标记 获 得的分类结果一致 。 李俊丽等9对 70份南 瓜 的遗传多样性进行 RAPD 分 析 ， 结 果 将其分为 3 类 ， 分 别是 中 国南瓜 、 印度南瓜 、 美洲南瓜 ， 认为亲缘关系最近的是中国南瓜和美洲南瓜 ， 但 2 类南 瓜 与印度南瓜的关系较远 。 张天明12对 4 个 南 瓜 属栽培种进行 AFLP 分析 ， 聚 类 结果能够将 4 个栽 培 种分开 ，且美洲南瓜与黑籽南瓜关系较近 ， 两者与中国南瓜的亲缘关系稍远 ， 三者与印度南瓜的关系最远 。 赵福宽等7应用 RAPD 分子 标 记对 76 份南 瓜 进行亲缘关系分析 ， 分类结果与刘小俊等13、 李俊 丽 等9的分 类 结果一致 ， 并认为中国南瓜 、 印度南瓜 、 美洲南瓜 3 个栽 培 种的种间差异明显 。 此外 ， 肖祖梅10应用 RAPD 和 ISSR 分子标 记对观赏南瓜进行遗传多样性分析 ， 杨正安等11应 用 ISSR 和 RAPD 分 子 标记 对云南黑籽南瓜进行亲缘关系分析 。 除了应用分子标记对南瓜的亲缘关系和遗传多样性进行分析外 ， 形态学标记 、 细胞学标记和同工酶标记在南瓜上也有应用 ， 如李俊丽20对 70 份南 瓜 资源的 45 个植物 学 性状进行鉴定 ， 通过聚类 ， 将 70 份南 瓜 分为 3 大类 群 ， 分 别是中国南瓜 、 美洲南瓜和印度南瓜 ， 且美洲南瓜与中国南瓜的亲缘关系最近 ， 印度南瓜与中国南瓜 、 美洲南瓜与印度南瓜的关系稍远 。 巴林21对南 瓜 F1 代杂 种 的一价染色体和细胞二价染色体进行比较 ， 认为中国南瓜和美洲南瓜的亲缘关系最近 ， 与印度南瓜的关系次之 。 孙正海等22对中 国 南瓜 、 美洲南瓜 、 印度南瓜的 41个品 种 进行过氧化物同工酶分析 ， 聚类分析表明中国南瓜和美洲南瓜亲缘关系近 ， 两者与印度南瓜的关系较远 。本研究对 100 对 SRAP 引 物 进 行筛选 ， 挑出17 对引 物 进行扩增 ， 获得扩增条带 200 条 ， 其中差 异 带 187 条 ， 多态 性 比例为 93.5 ， 表明 所 收集的南瓜种质资源的遗传基础范围较广 。 从种间差异来看 ， 印度 -美洲 南 瓜 中国 -印度 南 瓜 中国 -美洲南 瓜 。 从 种内差异来看 ， 印度南瓜 中国 南 瓜 美洲 南 瓜 ， 这 一结果与孙正海等22对中 国 南瓜 、 美洲南瓜 、 印度南瓜的 41 个品 种 进行过氧化物同工酶分析获得的结果不一致 ， 孙正海等22认为 中 国南瓜种内差异最大 ， 印度南瓜种内差异最小 。 通过聚类分析 ， 将收集的 85 份南 瓜 分为 3 大类 ， 分 别 是中国南瓜 、 印度南瓜 、 美洲南瓜 ， 亲缘关系较近的是中国南瓜和美洲南瓜 ， 它们与印度南瓜的亲缘关系则较远 。 分类结果与刘小俊8、13、 李俊 丽9、 张天 明12、赵福 宽 等7应用 RAPD、 SRAP、 AFLP 分子 标 记技2147- -第 36 卷热 带 作 物 学 报术得 到 的结果一致 ， 与形态学标记 、 细胞学标记和同工酶标记获得的结果也一致 。由于市场上南瓜品种名称众多 ， 同名异物或异物同名的现象严重 ， 加上地区间的引种频繁 ， 对育种工作造成困难 。 如本研究中 ， 10 号材 料 在种质资源收集时 ， 将其归类为中国南瓜 ， 实验后 ， 根据聚类树状图 ， 发现其属于印度南瓜 ， 通过对其田间植株形态 、 果实外观特征进行观察鉴定 ， 确定其为印度南瓜 。 印度南瓜类群中 ， 52 号 胜 栗 与 54 号 君川 金 栗 2 个品 种 名称不同 ， 但两者间的遗传相似系数达到 0.985 0， 认为 二 者是同一个品种 ， 即同物异名 。 中国南瓜类群中 ， 19 号材 料 、 11 号材 料 、12 号材 料 均命名为密本类南瓜 ， 但相互间的遗传相似系数存在差异 ， 如 1 号材料 与 2 号材料 间遗传相似系数最大为 0.9800。 1 号 与 9 号 、 12 号 ， 2 号与 9 号 、 12 号 ， 3 号与 12 号 ， 4 号与 12 号 ， 5 号与 12 号 ， 6 号与 12 号 ， 9 号与 11 号 ， 11 号与 12号 ， 这些 材 料间的遗传相似系数均小于 0.900， 表明 11 个密 本 类南瓜中并非都是密本南瓜 ， 存在同名异物现象 。本研究通过 SRAP 分子 标 记 ， 揭示了南瓜种质资源的遗传多样性 ， 掌握了不同南瓜栽培种间的遗传多态性和种内多态性的情况 ， 对所收集的南瓜进行分类 ， 建立了遗传聚类图 ， 鉴定了品种间的亲缘关系 ， 为南瓜亲本的选配和品种选育提供了理论依据参考 文 献1 张 箭 . 南瓜 发 展传播史初探 J. 烟台 大 学学报 （哲学社会科学版 ）， 2010， 23（1）： 100-108.2 林 德 佩 . 南 瓜 植 物的起源和分类 J. 中 国 西 瓜甜瓜 ，2000（1）： 36-38.3 戚 春 章 ， 胡 是麟 ， 漆小泉 . 中 国 蔬 菜种质资源的种类及分布 J. 作物 品 种资源 ， 1997（1）： 2.4 Li G， Quiros C F. 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