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不同pH缓冲液处理对月季花瓣颜色的影响_刘佳棽.pdf

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不同pH缓冲液处理对月季花瓣颜色的影响_刘佳棽.pdf

北方园艺2017(23)128-133 Northern Horticulture园林花卉 第一作者简介 刘佳棽 (1965-),女 ,河南信阳人 ,本科 ,副研究员 ,现主要从事花卉种质资源的收集评价及育种等研究工作 。E-mailliujs65@126.com.责任作者 金万梅 (1971-),女 ,博士 ,研究员 ,现主要从事林果类分子生物研究及育种等研究工作 。E-mailjwm0809@163.com.基金项目 国家自然科学青年基金资助项目 (31600418);北京市科委重大资助项目 (D131100000113001);北京市农林科学院科技创新能力建设专项资助项目(KJCX20170104,KJCX20170203,KJCX20170601);北 京市农林科学院青年基金资助项目 (QNJJ201513)。收稿日期 2017-07-18doi10.11937/bfyy.20171415不同pH缓冲液处理对月季花瓣颜色的影响刘 佳 棽1,2,李 茂 福1,2,王华1,2,杨媛1,2,金 万 梅1,2(1.北京市农林科学院 林业果树研究所,北京100093;2.农业部华北地区园艺作物生物学与种质创制重点实验室,北京100093)摘要 以 ‘冰山 ’和 ‘萨曼莎 ’月季为试材 ,采用不同pH缓冲液 (1、3、5、7、9、11)处理月季切花和花瓣花青素提取物 ,利用植物比色卡对比其颜色变化 ,研究了不同pH缓冲液对白色和红色月季花瓣颜色及花青素提取物的影响 。结果表明 不同pH缓冲液处理对白色月季 ‘冰山 ’花瓣颜色影响差异不大 ,但对红色月季 ‘萨曼莎 ’的花瓣颜色影响差异较大 ,在pH1缓冲液处理中比色值由53C变为53A,而在pH 9和pH 11缓冲液处理下 ,比色值由53C变为61B;不同pH缓冲液对白色月季 ‘冰山 ’花青素提取物影响不明显 ,而对红色月季 ‘萨曼莎 ’影响较大 。随着pH缓冲液浓度的增加 ,月季 ‘萨曼莎 ’花青素溶液的颜色从深红色 、红色向棕红 、红褐色转变 ,颜色逐渐变深 、变暗 。关键词 月季 ;pH;花瓣 ;花青素 ;颜色中图分类号 S 685.12 文献标识码 A 文章编号 1001-0009(2017)23-0128-06月季花色丰富 ,为我国传统名花之一 。花色是植物重要的观赏性状之一 ,花色的优劣直接关系到其观赏价值和商业价值 。此外 ,花色还有吸引昆虫帮助授粉和抵御病虫害的作用 。有研究发现花色的呈现受到花青素的种类和含量 、花瓣的组织结构 、色素在花瓣中的分布 、细胞液的pH、可溶性糖含量 、可溶性蛋白质含量 、细胞液的胶体状态 、色素与金属离子的结合形态等因素的影响[1-2]。在玉兰花 、杜鹃花及海棠花中的研究表明 ,花色苷的成分和含量是影响花色最重要的因素[3-5]。目前对于月季的研究大多集中在花青素提取和性质[6-9]、采后保鲜机理[10-13]、基因工程[14]及品种选育等方面 。在离体条件下 ,pH对月季花瓣颜色及花青素的影响研究尚鲜见报道 。为此 ,该试验以白色 ‘冰山 ’和红色 ‘萨曼莎 ’月季为试材 ,探索在相同温度及光照条件下 ,利用不同pH缓冲液处理月季花瓣 ,观察其在不同pH缓冲液中花瓣颜色及花青素提取物的变化 ,以期为pH对月季花瓣颜色的分子机理研究提供数据支撑 ,也为月季切花花色的保持提供借鉴 。1 材料与方法1.1 试验材料供试月季品种白色 ‘冰山 ’、红色 ‘萨曼莎 ’均由北京市农林科学院林业果树研究所月季资源圃提供 。剪下开花状况一致的花朵 ,以塑料袋包裹迅速带回实验室备用 。1.2 试验方法1.2.1 月季生长特征的观察观察月季品种 ‘冰山 ’和 ‘萨曼莎 ’田间生长及开放过程 ,对小蕾期-大蕾期-初开期-盛开期-衰败期花瓣颜色的变化进行描述 。1.2.2 花色对比以柠檬酸 、柠檬酸钠为主要试剂 ,以盐酸和氢氧化钠调节pH,使用去离子水配制pH浓度梯度缓冲液至1、3、5、7、9、11,以去离子水为对照 。将不同月季品种的切花分别插入以上pH缓冲液中 ,每瓶放置3朵花 ,重复3次 。采用英国皇家园林协会植物比色卡对比试验中花瓣的颜色变化 。‘冰山 ’月季基础比对为白色组NN155D、‘萨曼莎 ’月季为红色组53C。每24h对所处理月季花的颜色进行观察记录并拍照 ,连续观察至花朵干枯凋谢 。1.2.3 花青素提取物的对比参照文献 [15-16],采用差示法提取月季花瓣的总花青素 ,取6个离心管各加入 ‘冰山 ’‘萨曼莎 ’花青素提取物0.5mL,然后分别加入pH缓冲液1、3、5、7、9、11溶液1mL,摇匀 ;对照分别为1.5mL‘冰山 ’‘萨曼莎 ’月季花青素提取物原液 。用比色卡对比其颜色的变化 。2 结果与分析2.1 月季 ‘冰山 ’和 ‘萨曼莎 ’田间生长过程及特征月季 ‘冰山 ’和 ‘萨曼莎 ’一般情况下在田间从花芽分化到现蕾期约45d。月季 ‘冰山 ’从现蕾期到衰败期约12d;各时期花色均为白色 ,表现稳定一 致 (图1A),比 色 卡 均 比 对 为 白 色 组NN155D。月季 ‘冰山 ’盛开期花瓣为扇形 ,无绒光 ;花瓣数约35枚 。月季 ‘萨曼莎 ’从花芽分化到现蕾期约45d,而现蕾期到衰败期约12d;各时期花色均为红色 ,表现稳定 、一致 (图1B),比色卡均比对为红色组53C。月季 ‘萨曼莎 ’盛开期花瓣为圆阔瓣 ,且有少量绒光 ;花瓣数约35枚 。说明月季 ‘冰山 ’‘萨曼莎 ’在花朵生长和开放过程中 ,生长周期较一致 ,花色均较稳定 ,无变化 。注 1.大蕾期 ;2.初开期 ;3.半开期 ;4.盛开期 。Note1.Large budding stage;2.First opening stage;3.Half opening stage;4.Ful opening stage.图 1‘冰山 ’‘萨曼莎 ’月季花朵生长及开放过程Fig.1 Flower growth and opening process of‘Iceberg’and‘Samansha’Rosa hybrid2.2 不同pH缓冲液处理对月季 ‘冰山 ’和 ‘萨曼莎 ’花瓣颜色的影响在不同pH缓冲液对 ‘冰山 ’花朵的处理中 ,第1天所有处理颜色均无差异 (图2)。处理第2天 ,在pH 1处理下 ,花柄完全失绿变灰褐色且花柄有断裂现象 ,叶片多数失绿呈灰褐色 ,花朵萎蔫变枯 、变 小 ,花 瓣 失 水 、皱 缩 ,比 色 卡 颜 色 为NN155A;在pH 9处理下 ,花瓣萎蔫变枯 、花朵变小 ,中心花瓣有失水干枯及少量脱落 ,其余处理下的枝 、叶 、花柄均为绿色 ,花朵正常 ,比色卡颜色不变为NN155A。第3天 ,在pH 1处理下 ,花柄折断 ,花朵皱缩变小且干枯 ,无法比色 ;在pH 3处921 第 23期北方园艺图 2不同pH缓冲液处理下 ‘冰山 ’和 ‘萨曼莎 ’月季花朵颜色的变化Fig.2 Change of color of‘Iceberg’and‘Samansha’Rosa hybrid under different pH treatments图 3不同pH缓冲液处理下月季 ‘冰山 ’与 ‘萨蔓莎 ’花青素提取物的颜色变化Fig.3 Color change of anthocyanins extract of‘Iceberg’and‘Samansha’Rosa hybrid under different pH treatments031北方园艺12月 (上 )理下 ,花柄颜色绿色 ,花瓣正常 、挺立 ,比色卡颜色为NN155A;在pH 5、pH 7处理的 ‘冰山 ’几乎相似 ,花柄颜色绿色 ,花朵萎蔫干枯 、有变小现象 ,比色卡颜色为NN155A;在pH 9和pH 11处理下 ,花柄变黑失水 ,花朵凋谢变皱 ,花瓣干枯脱落 ,比色卡颜色为155A;对照水处理花柄颜色正常 ,花朵正 常 ,中 心 花 瓣 开 始 干 枯 ,比 色 卡 颜 色 为NN155A。第4天 ,在这些处理中 ,花瓣干枯 ,无法比色的有pH 1、pH 9、pH 11处理 ,花柄变黑 ,花朵完全衰败 ,花瓣呈褐色 ;pH 3和对照处理类似 ,花柄颜色绿色 ,花朵萎蔫变小 ,花瓣部分干枯 ,以中心花瓣最为严重 ,比色卡颜色为NN155A;pH 5、pH 7处理 ,花柄颜色绿色 ,略萎蔫 ,花朵变小 ,花瓣干枯皱缩 ,比色卡颜色为NN155A。在不同pH缓冲液对 ‘萨曼莎 ’花朵的处理中 ,第1天所有处理颜色均无差异 (图2)。第2天 ,在pH 1处理下 ,花柄失绿变浅褐色 ,花瓣失水 、皱 缩 ,出 现 少 量 干 枯 ,比 色 卡 颜 色 为53A;pH 3处理下 ,花柄略失绿 ,花瓣正常 ,无失水现象 ,比色卡颜色为53C;pH 5处理花柄绿色 ,花瓣及比色卡颜色均同pH 3处理 ;pH 7处理下 ,花柄颜色绿色 ,花瓣略失水少数边缘枯焦 ,比色卡颜色为53C;而pH 9、pH 11处理 ,花柄略失水失绿 ,花瓣正常边缘偶见干枯 ,比色卡颜色同pH 1为53A;对照枝 、叶片 、花柄和花瓣均颜色正常 ,无失水现象 ,比色卡颜色为53C。第3天 ,pH 1处理下 ,花朵干枯无法比色 ;pH 3的处理同第2天 ;pH 5、pH 7处理下 ,花柄为黄绿色 ,花朵中心瓣有少量干枯现象 ,比色卡颜色为53C;pH 9处理下 ,花柄皱缩 、干枯 ,并开始脱落 ,花色变紫 ,比色卡颜色为61A;而pH 11处理下 ,花柄不仅皱缩变黑 ,花瓣颜色更紫 ,比色卡颜色为61B。第4天 ,在pH 9、pH 11处理 ,花柄均失绿 、变皱 、发黑 ,花瓣干枯 ,中心花紫色 ,比色卡值为61B;在pH 5处理下 ,花瓣开始干枯 ,比色卡颜色为53C;pH 7处理中心花颜色略微变紫 ,比色卡颜色为59C;pH 3处理的花朵依然挺立 ,比色卡颜色为53C;对照中 ,花瓣开始干枯外 ,比色卡颜色仍为53C。对月季 ‘冰山 ’而言 ,不同pH缓冲液对其花瓣颜色影响差异不大 ,可能是白色的 ‘冰山 ’中不含花青素 ;对月季 ‘萨曼莎 ’而言 ,不同pH缓冲液对其花瓣颜色影响差异较大 ,在pH 1的处理中比色值由53C变为53A,而在碱性条件下 (pH 9和pH 11),比色值由53C变为61B。另外 ,不同pH对月季花瓣的新鲜程度影响较大 ,过酸或过碱溶液都不利月季花瓣保水 。在pH 3处理下 ,月季 ‘冰山 ’和 ‘萨曼莎 ’花瓣失水最慢 ,而且颜色也无变化 。2.3 不同pH缓冲液处理对月季花青素提取物的影响月季 ‘冰山 ’的花瓣中几乎不含花青素 (图3A)。在酸性条件下 (pH 1~5),‘冰山 ’花青素提取物比色卡颜色为NN155A;而在中性和碱性条件下 (pH 7~11)花青素提取物比色卡颜色与 ‘冰山 ’花 青 素 提 取 物 原 液 比 色 卡 颜 色 相 同 均为160C。月季 ‘萨 曼 莎 ’花 瓣 的 花 青 素 含 量 为341.53mg(100g)-1FW,比色卡颜色185B,在不同pH处理下 ,颜色发生较大变化 (图3B)。在酸性pH 1和pH 3下 ,花青素提取物比色卡颜色为58B;在微酸性pH 5处理下 ,花青素提取物比色卡颜色为186B;在中性pH 7条件下 ,花青素提取物颜色比色卡为186C;在碱性条件pH 9、pH11的处理下 ,花青素提取物的比色卡颜色182A。说明不同pH浓度对无花青素的白色月季‘冰山 ’几乎没有影响 ,而对花青素含量较高的红色月季品种 ‘萨蔓莎 ’影响较大 ,随着pH的升高 ,‘萨蔓莎 ’月季颜色由红色变为浅红直至褐色 ,比色值由红色组的58B、灰橙组168B、168C到灰色组182A。3 讨论植物的液泡占了细胞体积的90%,液泡对各种生理过程发挥着重要的作用 ,如pH的平衡 、渗透调节 、离 子 运 输 、代谢物的储存及细胞的生长[17-18]。花瓣的着色依赖于液泡内pH的大小 ,当花瓣刚开始展开时 ,液泡内的pH相对较低 ,从而表现红色 ,随着花瓣的发育及衰老 ,pH逐渐增加花瓣颜色加深[19]。该研究通过体外使用不同浓度的pH缓冲液处理离体月季花朵 ,结果发现在pH 3时 ,随着处理时间的增加 ,花朵颜色及发育几乎不受影响 ,说明白色和红色月季花瓣细胞液泡内的pH约为3。随着pH的升高或降低 ,无论是白色还是红色花瓣 ,随着处理时间的增加 ,花131 第 23期北方园艺朵颜色逐渐加深和变枯 ,说明pH变化打破了花瓣细胞液泡内的pH平衡 ,电化学梯度发生变化 ,造成液泡内容物内渗或外泄 ,最终导致花瓣颜色变化及枯萎 。花青素是一类广泛存在于植物花 、果实 、种子和叶中的水溶性天然色素 ,属于类黄酮化合物 ,其性质不稳定 ,易受到各种理化因素的影响 (如温度 、pH、光照 )而发生变化 ,最终植物呈现不同颜色 。该试验结果表明在红色花瓣花青素提取液中 ,随着pH升高花青素提取液的颜色由红色逐渐变成蓝褐色 ,这可能是花青素中花色苷的结构发生了变化 。说明花色苷只在酸性条件下才能保持其本色-红色 ,而在碱性条件下不能稳定存在 ,故而出现褐色 。而白色花瓣中由于花青素含量极低 ,甚至没有 ,即使在酸性条件下也不变红 。随着pH的升高 ,白色花瓣花青素提取液的颜色稍有变化 ,可能是白色花瓣提取液中其它色素基团的变化所导致的 。参考文献[1]MOL J,CORNISH E,MASON J,et al.Novel colouredflowers[J].Current Opinion in Biotechnology,1999,10(2)198-201. 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