红色耐寒月季‘MoHa ЛNЗa’的快繁技术_李濛.pdf

p2 017 22相较于我国南方，北方城市绿化景观水平相对较低，草花品种单一，寿命短，园林负担沉重 。针对此情况，可以借鉴俄罗斯等高纬度地区城市绿化的成功经验，在寒温带城市地区绿化中引入可连续开花耐寒月季作为多年生小灌木花卉，不但观赏性高，并且抗低温效果好，因此应用前景非常广阔 。1 材料与方法1.1 外植体建立材料为驯化 2 年的红色耐寒月季 “MoHa ЛN Зa ”。选取带芽茎段的最好时期是 5 月末 。材料选取当年生半木质化枝条中饱满而未萌发的侧芽 。首先，将选好的枝条去叶，用牙刷蘸洗衣粉水轻轻刷洗后放入装有多菌灵的三角瓶中震荡清洗5 分钟 。再用流水冲洗 12 小时，剪成 68 厘米左右带腋芽的茎段 。超净台上，将茎段先用 70 ％酒精溶液浸泡 1 分钟，再置于 0.1 ％的升汞溶液中消毒 12 分钟 , 然后用无菌水冲洗 4 次，滤纸吸干后接种 。1.2 离体芽诱导培养将无菌茎段分别接种于不同配方培养基上诱导萌芽 。诱导培养基以 MS 为基本培养基，加入不同浓度的细胞分裂素和生长素 。后用正交法添加不同剂量的 6- BA 与不同浓度的 NAA进行配比试验 。组成 4 种培养基第一种 MS6- BA0.50mg/LNAA0.10mg/L 、第二种 MS6- BA0.50mg/LNAA0.20mg/L 、第三种 MS6- BA1. 00mg/LNAA0.10mg/L 、 第 四 种 MS6- BA1.00mg/LNAA0.20mg/L 。每种培养基均接种 2 到 3 个无菌茎段，培养 2 周后统计离体芽诱导率 。1.3 丛生芽继代增殖培养将诱导培养基上已萌发的 “MoHa ЛN Зa ”嫩芽切下转接到 4 种不同浓度的细胞分裂素和生长素的继代培养基中进行继 代 增 殖 培 养 。 继 代 培 养 基 为 第 五 种 MS6- BA0.50mg/LNAA0.10mg/L 、 第 六 种 MS6- BA1.00mg/LNAA0.10mg/L 、第 七 种 MS6- BA0.50mg/LNAA0.20mg/L 、第 七 种MS6- BA1.00mg/LNAA.20mg/L 。每种培养基接入 3 ～5 株嫩芽，接种时单芽茎段长 1 厘米至 2 厘米左右，培养 4 周后统计丛生芽的数量以及高于 1 厘米的芽数 。1.4 试管苗壮苗培养将生长旺盛的丛生苗切成单株接入到 2 种不同配方的壮苗培养基中培养，每瓶接 10 ～15 株 。4 周后统计试管苗的生长情况 。组成 2 种壮苗培养基为第九种 MSNAA0.10mg/L 、第十种 MSNAA0.20mg/L 。1.5 试管苗生根培养将生长键壮，高度为 5 厘米左右的试管苗接入到生根培养基中 。每种培养基接入 510 个单株，接种 15 天后统计生根情况 。2 结果与分析2.1 离体牙的诱导结果离体芽的诱导很快，接种 7 天后离体芽开始萌动，芽萌动后培养 3 周后，结果显示第一种的培养基离体芽少，出芽率为75 ％；第二种的出芽率为 100 ％，离体芽生长细弱；第四种的离体芽萌动后产生愈伤组织；第三种出芽率为 100 ％，且生长健壮 。反复试验，结果表明适合离体芽诱导的培养基为第三种 。2.2 丛生芽继代增殖结果耐寒月季 “MoHa ЛN Зa ”在 4 种继代增殖培养基中培养4 周后，芽的增殖倍数和大于 2 厘米芽的比率存在着差异 。其中第六种和 第八种两种培养基，增殖的丛生芽数量多，且生长健壮，芽的增殖倍数分别为 2.16 倍和 3.3 倍，高于 2 厘米的芽占 75. ％和 71.7 ％，明显高于其他培养基 。第五种的培养基中，丛生芽生长细弱，高于 2 厘米的芽仅占 18.25 ％；第 七 种的 培 养 基 中 ，继 代 芽 产 生 愈 伤 组 织 。反复试验，结果表明适合 “MoHa ЛN Зa ”继代增殖的培养基为第六种 。2.3 试管苗壮苗培养将生长旺盛的丛生苗切单株接入 2 种培养基培养 4 周后统计试管苗的生长情况 。结果显示第九种培养基中试管苗有70 ％生长健壮， 30 ％有分化情况；第十种培养基中试管苗100 ％生长键壮 。反复试验，结果表明适合 “MoHa ЛN Зa ”试管苗壮苗培养基为第十种 。2.4 试管苗的生根培养结果将生长粗壮的耐寒月季接入到生根培养基上培养 10 天后开始长出白色的根，根系发达，粗壮，叶片深绿，长势良好，生根率达为 95 ％，平均根长位 1.5 厘米和 2.5 厘米 。3 结论经过两年的试验，建立了俄罗斯耐寒月季 “MoHa ЛN Зa ”的组培快繁体系，组培苗能够在长春地区露地安全越冬，其越冬成活率在 80 ％以上 。该研究的结果给规模化繁殖提供了可行性，极大地保存和丰富了东北地区耐寒花卉品种 。参考文献[1] 王军娥 . 牡丹组织培养技术的研究 [D]. 西北农林科技大学 . 2008[2]C. Leifert,Helen Camotta,W. M. Waites.Effect of combi-nations of antibiotics on micropropagated Clematis, Delphinium,Hosta, Iris and Photinia [J] 1992,Plant Cell, Tissue and OrganCulture02153- 160.作者简介李 河 蒙 ，硕士，助理研究员，研究方向生物工程 。摘要红色耐寒月季 “MoHa ЛN Зa ”，是吉林省生物研究所从俄罗斯引进的一个全新的耐寒月季品种 。本实验以 “MoHa ЛN Зa ”茎段为外植体，通过植物组织培养手段建立快速繁殖 。该试验获得成功，丰富了东北地区耐寒花卉品种 。关键词俄罗斯耐寒月季 “MoHa ЛN Зa ”；组织培养；红色耐寒月季；快速繁殖中图分类号 S685.12 文献标识码 A DOI 编号 10.14025/ki.jlny.2017.22.023李 河 蒙 ，周红昕，于新海（吉林省生物研究所，吉林 长春 130000 ）红色耐寒月季 “MoHa ЛN Зa ”的快繁技术shi yan yan jiu研验究实058/p