黑龙江省马铃薯晚疫病菌的交配型和multi-locus基因型分析.pdf

<p>黑龙江省马铃薯晚疫病菌的交配型和 multi -locus 基因型分析 张铉哲 韩晓旭 郭衍锦 李 璐 李媛媛 （东北农业大学农学院，黑龙江哈尔滨 150030） 摘 要：20152017年在黑龙江省哈尔滨市、绥化市和齐齐哈尔市各马铃薯主产区共采集分离了126株马铃薯晚疫病菌菌 &nbsp;株，测定交配型、mtDNA单倍型、SSR基因型并进行multi-locus基因型分析。结果显示，126株菌株中发现了A1、A2、自 育型3种交配型，分别占分离菌株总数的88.1、6.3和5.6。126株菌株中共鉴定出a和a两种mtDNA单倍型，分别 占分离菌株总数的17.5和82.5。126株菌株中共鉴定出7种SSR基因型，分别为F-01、F-02、F-03、F-05、F-06、D-03 和G-02，其中F-01基因型（77.8）为优势基因型。根据马铃薯晚疫病菌的mtDNA单倍型和SSR基因型，共划分了9种 multi-locus基因型，其中multi-locus基因型A（65.1）是黑龙江省发现的优势基因型。20152017年黑龙江省马铃薯晚疫 病菌群体结构逐年复杂，绥化市马铃薯晚疫病菌群体结构最为复杂。 关键词：马铃薯晚疫病菌；交配型；mtDNA单倍型；SSR基因型；multi-locus基因型 型，其出现频率仅为2.2。王腾等（2016）对 20112013年在黑龙江采集的菌株进行交配型测 定，A1交配型占菌株总数的51.63，其余为A2 交配型。这些研究表明晚疫病菌由于不同交配型的 出现，可以在田间进行有性生殖和无性繁殖，导致 晚疫病菌群体结构发生变化。晚疫病菌群体结构变 化对晚疫病害的防治提出了新的挑战，因此研究马 铃薯晚疫病菌群体遗传结构变化具有重要意义。 线粒体基因组具有结构简单、无组织特异性等 优点，采用检测线粒体多态性方法研究晚疫病菌群 体遗传结构变化效果更佳（May &amp; Ristino，2004）。 对马铃薯晚疫病菌线粒体DNA（mtDNA）多态性 进行研究，逐步成为国内外研究热点。Griffith和 Shaw（1998）采用改进PCR-RFLP方法将线粒体单 倍型分为a、a、b、b。Rojas和Kirk（2016） 研究表明，20082010年在密歇根州采集分离的 124株致病疫霉的mtDNA单倍型均为a型。Tian 等（2016）鉴定了中国西北地区采集分离的马铃 薯晚疫病菌mtDNA单倍型，结果检测到a、a 和b 3种单倍型，其中a为优势基因型。徐生军 （2010）利用PCR-RFLP方法，对黑龙江省采集分 离的马铃薯晚疫病菌进行mtDNA单倍型检测，共 张铉哲，男，博士，教授，硕士生导师，专业方向：植物病害综合防治， E-mail：zhe3850163.com &nbsp; 收稿日期：2017-11-13；接受日期：2018-03-06 基金项目：黑龙江省自然科学基金项目（C2016019） ，黑龙江省经济作 物现代农业产业技术协同创新体系项目（HNWJZTX201701） 中国是马铃薯生产大国，马铃薯已成为继小 麦、玉米之后的第三大作物，种植面积和产量居于 世界首位（王立 等，2013） 。黑龙江省因得天独厚 的冷凉气候和地理条件，成为我国马铃薯主产区之 一（关红颖，2011） 。然而，近几年由于黑龙江省 降雨量大等天气原因，马铃薯晚疫病发生十分严重。 马铃薯晚疫病是由致病疫霉Phytophthora &nbsp;infestans引起的马铃薯毁灭性病害，可造成巨大的 经济损失（金光辉 等，2017） 。马铃薯晚疫病菌通 过不同交配型菌株之间异宗配合进行有性生殖，有 性生殖可产生卵孢子，卵孢子可在土壤中越冬，成 为翌年的初侵染源。不同交配型同时存在时说明马 铃薯晚疫病菌适应性和变异性增强（闵凡祥 等， 2010）。Gallegly和Galindo（1958）在墨西哥中部首 先发现了A1和A2交配型。张志铭等（1996）首 次在国内报道了A2交配型菌株。朱杰华（2004） 首次在黑龙江采集分离的菌株中鉴定出A2交配 &nbsp;58 &nbsp; 新优品种 栽培管理 本期视点 产业市场 病虫防控 &nbsp;58 &nbsp; 研究论文 中 国 蔬 菜 &nbsp; &nbsp; CHINA VEGETABLES 2018（4）：58 - 64 检测到a和a两种单倍型。可见，4种单倍型在 不同国家和地区的分布具有一定差异。 SSR标记具有多态性高、重复性好、数量丰富、 发生频率高、批量操作等优点（李建武，2011） ， 近些年成为研究马铃薯晚疫病菌群体遗传多样性的 主要方法。对采自黑龙江的致病疫霉进行SSR基因 型分析，吴艳清等（2012）鉴定出8种基因型，F-01 型所占比例最高。而王晨（2013）的鉴定结果表明， 从黑龙江采集的菌株共鉴定出6种SSR基因型，F-01 为优势基因型。这些研究表明，黑龙江省马铃薯晚 疫病菌的SSR基因型呈现一种动态变化。 Runno-Paurson等（2016）对爱沙尼亚的马铃 薯晚疫病菌进行交配型和SSR基因型测定，结果表 明该地区出现不同交配型菌株，SSR基因型也趋于 多样化。Rekad等（2017）通过SSR标记分析、交 配型和瑞毒霉敏感性的测定，对阿尔及利亚西北部 地区的致病疫霉进行系统分析，结果表明不同交配 型的菌株其对应的优势SSR基因型有差异。Guo等 （2010）通过交配型、同工酶基因型、mtDNA单倍 型和RG57指纹的分析，发现中国地区的马铃薯晚 疫病菌基因型和表现型与其他国家有差异。 我国缺少对马铃薯晚疫病菌multi-locus基因型 的研究。本试验首先测定黑龙江省马铃薯晚疫病菌 的交配型；其次，利用PCR-RFLP方法和SSR标 记测定黑龙江省马铃薯晚疫病菌的mtDNA单倍型 和SSR基因型；第三，利用mtDNA单倍型和SSR 基因型确定黑龙江省马铃薯晚疫病菌的muti-locus 基因型；最终，分析交配型与muti-locus基因型的 相互关系。以期为马铃薯晚疫病菌的群体遗传研究 和马铃薯晚疫病的防治提供理论依据。 1 材料与方法 1.1 供试菌株及培养基 20152017年，在黑龙江省齐齐哈尔市、绥 化市、哈尔滨市各马铃薯主产区采集具有马铃薯晚 疫病主要症状的单病斑叶片，将马铃薯切成约0.5 &nbsp;cm的薯片，用70%酒精将切后的薯片消毒，将病 叶放入灭菌后的选择性培养基中，把消毒处理后的 薯片放在病叶上，加入一定的蒸馏水，用封口膜封 盖，19 黑暗培养箱中培养46 d。 供试培养基为20%番茄汁琼脂培养基和选择 性培养基（张铉哲和徐生军，2010）。 1.2 马铃薯晚疫病菌的交配型测定 交配型的测定采用对峙培养法，使用20%番 茄汁琼脂培养基。将标准菌株A1（DN-3085日本）、 A2（TBC-3韩国）与待测菌株预培养，然后将标 准菌株和待测菌株菌饼分别与A1、A2标准菌株对 峙培养，菌饼之间距离为3 cm。封盖，每个菌株重 复测定3次，19 恒温培养14 d，在显微镜下观察 菌落交界处是否产生卵孢子。若待测菌株与A2标 准菌株之间产生卵孢子，且与A1标准菌株间不产 生卵孢子，说明所测菌株是A1交配型；相反，则 是A2交配型。若与2个标准菌株间都产生卵孢子， 且自身也可产生卵孢子，则待测菌株类型为自育型。 1.3 DNA提取 将待测菌株接种到20%番茄汁琼脂培养基 中，每株菌株接种3皿，19 黑暗培养箱中培养 14 d左右，用灭过菌的滤纸吸干菌丝上的水分，装 入1.5 mL EP管中，-20 下保存用于DNA的提取。 参考Goodwin等（1992）的方法提取基因组DNA。 1.4 马铃薯晚疫病菌mtDNA单倍型测定 1.4.1 引物序列与扩增体系 线粒体DNA单 倍型分析的PCR-RFLP方法参考Griffith和 Shaw（1998）的方法。引物序列：P2：F2： 5- TTCCCTTTGTCCTCTACCCAT-3，R2： 5-TTACGGCGGTTTAGCACATACA-3；P4：F4： 5-TGGTCATCCAGAGGTTTATGTT-3，R4：5- &nbsp;CCGATACCGATACCAGCACCAA-3。所用引物由 生工生物工程（上海）股份有限公司合成。PCR扩 增体系和程序参考Zhang等（2006）的方法。 1.4.2 酶切体系 目的片段回收采用核酸回收试剂 盒生工生物工程（上海）股份有限公司 。P2引 物扩增片段使用 Msp 酶切，P4引物扩增片段使用 EcoR 酶切，酶切体系为50 L：胶回收产物10 &nbsp;L，Buffer 5 L，Enzyme 1 L，ddH 2 O补足至50 &nbsp;L。反应条件为37 水浴3 h。将酶切产物与溴 酚蓝混合，采用1.5%琼脂糖凝胶电泳检测，用凝 胶成像仪拍照。 1.5 马铃薯晚疫病菌SSR基因型测定 1.5.1 SSR引物序列与扩增体系 马铃薯 晚疫病SSR基因型划分标准参考Knapova 和Gisi（2002） 的 方 法。 引 物 序 列Pi4B： &nbsp;59 &nbsp; 新优品种 栽培管理 本期视点 产业市场 病虫防控 &nbsp;59 &nbsp; 研究论文 中 国 蔬 菜 &nbsp; &nbsp; CHINA VEGETABLES F：5 -AAAATAAAGCCTTTGGTTA-3 ，R： 5-GCAAGCGAGGTTTGTAGATT-3；Pi4G： F：5-CGCTGTGTGGATGACAAGTA-3，R： 5-TCGACCTGACATACGAGCTA-3。SSR扩增体 系和扩增程序参考王晨（2013）的方法。 1.5.2 聚丙烯凝胶电泳检测 将扩增后的样品与同 体积的Loading Buffer混合，95 变性10 min，扩 增产物用12%的变性聚丙烯酰胺凝胶电泳，银染 染色，用凝胶成像系统拍照（Gene Company Limited &nbsp;GBOX-CHEMI-XRQ）。 2 结果与分析 2.1 马铃薯晚疫病菌分离 20152017年在黑龙江省哈尔滨市、绥化市 和齐齐哈尔市各马铃薯主产区共采集分离了126株 马铃薯晚疫病菌菌株（表1）。 表1 黑龙江省马铃薯晚疫病菌菌株信息 采集年份 采集地区 菌株数 2015 齐齐哈尔 16 绥化 2 哈尔滨 4 2016 绥化 26 哈尔滨 6 2017 绥化 35 齐齐哈尔 37 2.2 马铃薯晚疫病菌交配型分析 在黑龙江省采集分离的126株马铃薯晚疫病 菌菌株中共发现了3种交配型。A1、A2和自育 型菌株分别占所分离菌株总数的88.1、6.3和 5.6。从采集年份分析结果显示，2015年采集的 22株菌株中，共鉴定出A1和A2 2种交配型，其 中，21株菌株为A1交配型（95.5），仅1株菌 株为A2交配型（4.5）。2016年采集的32株菌 株中共鉴定出3种交配型，其中26株A1交配型 菌株（81.3），4株A2交配型（12.5），2株自 育型（6.2）。2017年共分离鉴定了72株菌株， 3株菌株为A2交配型（4.2） ，5株菌株为自育型 &nbsp;（6.9），其余64株菌株为A1交配型（88.9）， 由此可见，自育型菌株比例逐年增长，各年份之间 A1交配型所占比例具有差异。 从采集地区分析结果显示，哈尔滨市采集分 离的菌株均为A1型（100） ，绥化市采集分离的 菌株共鉴定出3种交配型，56株为A1交配型菌株 （88.9），5株为A2交配型菌株（7.9），2株 为自育型菌株（3.2） 。齐齐哈尔市采集分离的菌 株共测定出A1、A2和自育型3种，分别为46株 （86.8）、2株（3.8）和5株（9.4） 。以上结 果显示，哈尔滨市马铃薯主产区与其他2个马铃薯 主产区相比晚疫病菌交配型相对单一，各地区之间 不同交配型所占百分比具有明显差异。 2.3 马铃薯晚疫病菌mtDNA单倍型分析 黑龙江省采集分离的126株马铃薯晚疫病菌菌 株共鉴定出a和a 2种mtDNA单倍型，其中104 株菌株为a单倍型（82.5） ，22株菌株为a单倍 型（17.5） 。从采集年份分析结果显示，2015年 测定的22株菌株中，共测定出19株a单倍型菌 株（86.4%），3株为a单倍型菌株（13.6%）。2016 年分离鉴定的32株菌株中，24株为a单倍型菌株 （75.0%），其余8株为a单倍型菌株（25.0）。 2017年分离的72株菌株中，11株为a单倍型菌株 （15.3），61株为a单倍型菌株（84.7）。2015 年所鉴定菌株中a单倍型比例最高。 从采集地区分析结果显示，哈尔滨市采集分离 的菌株均为a单倍型（100） ，绥化市分离的63 株菌株中，共鉴定出a和a 2种单倍型，分别为 15株（23.8）和48株（76.2）。齐齐哈尔市鉴 定的53株菌株中，46株为a单倍型（86.8），7 株为a单倍型（13.2） 。可见哈尔滨市马铃薯主 产区mtDNA单倍型单一，各地区马铃薯晚疫病菌 不同mtDNA单倍型所占比例具有明显差异。 2.4 马铃薯晚疫病菌SSR基因型分析 对黑龙江省采集分离的126株马铃薯晚疫病菌 菌株进行SSR基因型分析，共鉴定出7种基因型， 分 别 为F-01、F-02、F-03、F-05、F-06、D-02 和G-02。其中F-01基因型菌株共鉴定出98株 （77.8），F-05基因型为12株（9.5%） ，F-03基 因型菌株为7株（5.5），D-02基因型菌株为4株 （3.2） ，F-06基因型菌株为3株（2.4），F-02 基因型和G-02基因型分别鉴定出1株（0.8）。 从采集年份来看（图1） ，2015年分离鉴定的 22株菌株中，共鉴定出3种基因型，分别为F-01、 F-05和F-03。2016年共鉴定出5种基因型，分别 为F01、F02、F03、F05、D02，其中F-01基因型 &nbsp;60 &nbsp; 新优品种 栽培管理 本期视点 产业市场 病虫防控 &nbsp;60 &nbsp; 研究论文 中 国 蔬 菜 &nbsp; &nbsp; CHINA VEGETABLES 菌株24株（75.0%），占比最高。2017年共鉴定出 6种基因型。可见黑龙江省马铃薯晚疫病菌SSR基 因型多样性逐年增加，F-01基因型为优势基因型， 各年份间F-01基因型所占比例存在差异（图1）。 从采集地点来看（图2） ，哈尔滨市采集分离 的菌株只有F-01和D-02 2种基因型，分别占鉴定 总菌株数的90.0和10.0。绥化市采集分离的菌 株SSR基因型最多，有7种，其中F-01基因型47 株（74.6），占比最高。齐齐哈尔市共鉴定出5种 SSR基因型（图2）。 2.5 马铃薯晚疫病菌multi-locus基因型分析 根据mtDNA单倍型和SSR基因型，20152017 年黑龙江省采集分离的菌株共划分成9种multi- locus基因型（表2），优势基因型均为multi-locus A 基因型。其中2015年采集分离的马铃薯晚疫病菌 共鉴定出4种multi-locus基因型，2016年共鉴定 出7种multi-locus 基因型，其中multi-locus F基因 型只在2016年分离的菌株中出现。2017年共鉴定 出8种基因型。Multi-locus H基因型和multi-locus I &nbsp;表2 黑龙江省分离的马铃薯晚疫病菌采集年份与multi-locus基因型分析 multi-locus基因型 采集年份/个数（占比） 交配型/个数 2015 2016 2017 A1 A2 自育型 总菌株数 A 15（68.2%） 18（56.3%） 49（68.1%） 69 6 7 82 B 3（13.6%） 6（18.8%） 7（9.6%） 15 1 0 16 C 2（9.1%） 4（12.5%） 6（8.3%） 12 0 0 12 D 2（9.1%） 1（3.1%） 2（2.8%） 4 1 0 5 E 0（0） 1（3.1%） 1（1.4%） 2 0 0 2 F 0（0） 1（3.1%） 0（0） 1 0 0 1 G 0（0） 1（3.1%） 3（4.2%） 4 0 0 4 H 0（0） 0（0） 3（4.2%） 3 0 0 3 I 0（0） 0（0） 1（1.4%） 1 0 0 1 注：Aa，F-01；Ba，F-01；Ca，F-05；Da，F-03；Ea，F-03；Fa，F-02；Ga，D-02；Ha，F-06；Ia，G-02； 下表同。 图2 采集地区与马铃薯晚疫病菌SSR基因型关系 100 80 60 40 20 0 SSR基因型占比/% 年份 2015 2016 2017 F-03 F-01 F-02 F-05 G-02 D-02 F-06 100 80 60 40 20 0 SSR基因型占比/% 地点 哈尔滨市 绥化市 齐齐哈尔市 F-03 F-01 F-02 F-05 G-02 D-02 F-06 10.0 1.6 3.2 1.9 11.3 7.5 77.4 1.9 3.2 9.5 1.6 6.3 74.6 90.0 图1 采集年份与马铃薯晚疫病菌SSR基因型关系 100 80 60 40 20 0 SSR基因型占比/% 年份 2015 2016 2017 F-03 F-01 F-02 F-05 G-02 D-02 F-06 100 80 60 40 20 0 SSR基因型占比/% 地点 哈尔滨市 绥化市 齐齐哈尔市 F-03 F-01 F-02 F-05 G-02 D-02 F-06 9.1 9.1 81.8 3.1 12.6 6.2 3.1 75.0 1.4 4.2 4.2 8.2 4.2 77.8 基因型只在2017年分离的菌株中出现。Multi-locus 基因型多样性呈逐年增加的趋势。 从表3可以看出，哈尔滨市采集分离的菌株鉴 定出3种基因型，绥化市采集分离的菌株共鉴定出 9种基因型，其中multi-locus F和multi-locus I基 因型仅在绥化市出现。齐齐哈尔市采集分离的菌株 中共鉴定出7种基因型。表明绥化市各马铃薯主产 区的马铃薯晚疫病菌基因型更为丰富（表3）。 综合上述multi-locus基因型和交配型结果， multi-locus基因型为A基因型的马铃薯晚疫病菌其 交配型类型为A1、A2和自育型，基因型B和基因 型D的马铃薯晚疫病菌其交配型类型为A1和A2。 其余几种multi-locus基因型的马铃薯晚疫病菌交配 型都为A1。 &nbsp;61 &nbsp; 新优品种 栽培管理 本期视点 产业市场 病虫防控 &nbsp;61 &nbsp; 研究论文 中 国 蔬 菜 &nbsp; &nbsp; CHINA VEGETABLES 3 结论与讨论 3.1 马铃薯晚疫病菌交配型 马铃薯晚疫病菌是危害马铃薯、番茄等作物的 一种卵菌纲致病真菌，20122013年马铃薯晚疫病 在全国范围内偏重发生，发生范围广且流行快，对 马铃薯造成严重危害（黄冲和刘万才，2016）。 王鹤等（2012）对2009年在黑龙江省采集的 菌株进行交配型检测，结果表明鉴定菌株均为A1 交配型。郭梅等（2015）研究发现，20112012 年在黑龙江省哈尔滨、绥化望奎县、齐齐哈尔克 山等地发现大量A2交配型马铃薯晚疫病菌菌株， 2011年A2交配型占被测菌株的23.08%；2012年 占被测菌株的30%。由此可见，黑龙江省马铃薯 晚疫病菌交配型逐年复杂，但2014年后有关黑龙 江省马铃薯晚疫病菌交配型方面的报道较少。本试 验对20152017年在黑龙江马铃薯主产区采集分 离出的晚疫病菌进行交配型测定，研究发现自育型 菌株出现频率逐年增加。从采集地点上发现哈尔 滨市只有A1交配型菌株，绥化市和齐齐哈尔市出 现3种交配型，说明与其他2个地区相比，哈尔滨 市马铃薯晚疫病菌交配型较为单一。这一结论与郭 梅等（2015）的研究结果基本一致。同时也说明绥 化市和齐齐哈尔市马铃薯主产区有可能发生有性生 殖，并导致马铃薯晚疫病菌的遗传多样性更加复 &nbsp;杂化。 3.2 马铃薯晚疫病菌mtDNA单倍型和SSR基因型 通过测定马铃薯晚疫病菌基因型，可对晚疫病 菌遗传变异进行探究，为防治马铃薯晚疫病提供理 论依据。本试验对20152017年在黑龙江各马铃 薯主产区采集的马铃薯晚疫病菌进行mtDNA单倍 表3 黑龙江省分离的马铃薯晚疫病菌采集地区与multi-locus基因型分析 multi-locus基因型 采集地点/个数（占比） 交配型/个数 哈尔滨市 绥化市 齐齐哈尔市 A1 A2 自育型 总菌株数 A 8（80.0%） 38（60.3%） 36（67.9%） 67 8 5 82 B 1（10.0%） 10（15.8%） 4（7.5%） 14 1 0 15 C 0（0） 6（9.5%） 6（11.3%） 12 0 0 12 D 0（0） 2（3.2%） 4（7.5%） 4 2 0 6 E 0（0） 1（1.6%） 1（1.9%） 2 0 0 2 F 0（0） 1（1.6%） 0（0） 1 0 0 1 G 1（10.0%） 2（3.2%） 1（1.9%） 4 0 0 4 H 0（0） 2（3.2%） 1（1.9%） 3 0 0 3 I 0（0） 1（1.6%） 0（0） 1 0 0 1 型鉴定，鉴定出a和a两种单倍型。其中，a单 倍型为优势基因型，与张铉哲等（2015）的研究结 果一致，但未发现b单倍型菌株。同时，本试验 对晚疫病菌进行SSR基因型测定，与李微（2015） 对20122014年黑龙江省马铃薯晚疫病菌SSR基 因型测定结果相比，鉴定出新的基因型F-06基因 型。从分离年份上看，2017年黑龙江省晚疫病菌 SSR基因型更为丰富，从采集地区方面分析，绥化 市各马铃薯产区的马铃薯晚疫病菌SSR基因型更多 样化。 3.3 马铃薯晚疫病菌multi-locus基因型 利用马铃薯晚疫病菌的交配型和multi-locus基 因型，对马铃薯晚疫病菌的表现型和基因型进行系 统综合分析。本试验中，2017年在黑龙江省采集分 离的晚疫病菌multi-locus基因型最多，说明黑龙江 省马铃薯晚疫病群体结构逐年复杂。从分离地点分 析，绥化市采集分离的马铃薯晚疫病菌multi-locus 基因型最为丰富。交配型与multi-locus基因型综合 分析结果表明，multi-locus A基因型、multi-locus &nbsp;B基因型和multi-locus D基因型与交配型没有相关 性，其余multi-locus 基因型与交配型相关。 哈尔滨市各马铃薯主产区马铃薯晚疫病菌 multi-locus基因型多样性较低，说明该地区马铃薯 晚疫病菌遗传结构较为简单；而绥化市采集的马铃 薯晚疫病菌multi-locus基因型最多，表明该地区 马铃薯晚疫病菌群体遗传结构更具多样性。总体来 说，20152017年黑龙江省各马铃薯主产区的晚疫 病菌群体结构逐年复杂，给黑龙江省马铃薯晚疫病 的防治带来了新的挑战。绥化市可能是黑龙江省马 铃薯晚疫病的起源中心，未来该地区应加强对马铃 薯晚疫病的监控。 &nbsp;62 &nbsp; 新优品种 栽培管理 本期视点 产业市场 病虫防控 &nbsp;62 &nbsp; 研究论文 中 国 蔬 菜 &nbsp; &nbsp; CHINA VEGETABLES 参考文献 关红颖.2011.黑龙江省马铃薯晚疫病的发生与防治.中国马铃薯， 25（3）：173-174. 郭梅，Vincent C，闵凡祥，吕军，高云飞，杨帅，王晓丹，Jean- louis R.2015.黑龙江省发现马铃薯晚疫病菌（Phytophthora &nbsp;infestans）A2交配型.中国马铃薯，（3）：171-174. 黄冲，刘万才.2016.近几年我国马铃薯晚疫病流行特点分析与监 测建议.植物保护，42（5）：142-147. 金光辉，李学湛，王玉成，王腾.2017.年际间干旱对晚疫病菌生 理小种复杂性的影响.植物保护，（4）：167-173. 李建武.2011.SSR标记技术在马铃薯遗传育种研究中的应用.中 国蔬菜，（20） ：1-8. 李微.2015.黑龙江省马铃薯晚疫病菌群体结构的研究硕士论 &nbsp;文.哈尔滨：东北农业大学. 闵凡祥，王晓丹，胡林双，魏琪，董学志，刘伟婷，郭梅.2010. 黑龙江省马铃薯晚疫病菌交配型的研究.中国马铃薯，24（1）： 47-49. 王晨.2013.马铃薯晚疫病菌的表现型和SSR基因型分析硕士论 文.哈尔滨：东北农业大学. 王鹤，朱杰华，杨志辉，韩彦卿，王宇，徐小虎.2012.2009年 黑龙江和吉林省马铃薯晚疫病菌表型结构研究.植物保护， 38（1） ：151-154. 王立，惠娜娜，李建军，马永强，周天旺，李继平，朱小琼，国立 耕.2013.甘肃省马铃薯主产区晚疫病菌生理小种组成与分 &nbsp;布.中国蔬菜，（11）：70-74. 王腾，闵凡祥，郭梅，杨帅，高云飞，金光辉.2016.黑龙江省马 铃薯晚疫病菌交配型及对甲霜灵敏感性测定. 植物保护，42 （1）：180-183. 吴艳清，蒋继志，郑旭，桂春爽，张紫肖，赵磊.2012.中国东北 部与河北省致病疫霉SSR基因型的组成与分析.中国农学通 报，28（15）：170-174. 徐生军.2010.马铃薯晚疫病菌的表现型与基因型的研究硕士论 文.哈尔滨：东北农业大学. 朱杰华.2004.中国马铃薯晚疫病菌群体遗传结构研究硕士论 &nbsp;文.保定：河北农业大学. 张铉哲，徐生军.2010.黑龙江省和吉林省马铃薯晚疫病菌multi- locus基因型分析. 中国马铃薯，24（2）：97-102. 张铉哲，郝璐，李微，候思宇，赵博，韩晓旭.2015.黑龙江省马 铃薯晚疫病菌交配型、瑞毒霉敏感性及mtDNA单倍型分析. 吉林农业科学，（5）：58-62. 张志铭，李玉琴，田世民.1996.中国发生马铃薯晚疫病菌 （Phytophthora infestans）A2交配型.河北农业大学学报，19 （4）：63-65. 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The results indicated that 3 mating types of A1，A2 and &nbsp; &nbsp;63 &nbsp; 新优品种 栽培管理 本期视点 产业市场 病虫防控 &nbsp;63 &nbsp; 研究论文 中 国 蔬 菜 &nbsp; &nbsp; CHINA VEGETABLES QuEChERS 法动态监测及评价山西省韭菜 中12 种农药残留 郭丽丽 1花 锦 2* （ 1 山西中医药大学制药与食品工程学院，山西晋中 030619； 2 山西出入境检验检疫局检验检疫技术中心， 山西太原 030024） 摘 要：采用乙腈超声提取，经PSA、C 18 基质分散净化，通过液质联用及气质联用建立了韭菜中吡虫啉、敌敌畏、毒死蜱、 多菌灵、腐霉利、甲胺磷、甲氰菊酯、克百威、六六六、氯丹、 （高效）氯氟氰菊酯、阿维菌素等12种农药的QuEChERS（quick， easy，cheap，effective，rugged，safe）快速检测方法，并对山西省市售韭菜的农药残留状况进行了动态监测和评价。结果表明： 山西省韭菜中农药残留的总检出率为80%，超标率为20%，使用比较多的农药为吡虫啉、敌敌畏、多菌灵、腐霉利、甲氰 菊酯和（高效）氯氟氰菊酯，腐霉利超标是韭菜产品不合格的主要因素。8月后太原及周边地区韭菜中的农药残留水平较高， 且该地区农贸市场与超市韭菜中农药残留的检出率相近，但前者超标率（27.3%）明显高于后者（9.1%）。 关键词：QuEChERS；韭菜；农药残留；监测；评价 &nbsp;2012） 。然而韭菜生产中韭蛆、灰霉病等病虫害多 发，种植过程中需要适量使用农药以减少病虫害损 失（Farha et al.，2017）。但是一些菜农为了追求产 量，经常采用灌根的方法将一些高毒农药用于韭蛆 的防治（宋丹 等，2016） ，造成韭菜中农药残留超 标，中毒事件频频发生（王文娇 等，2011）。2017 年11月1日起，山东省全面启动实施韭菜产品“双 证制”管理，严禁无合格证和市场销售凭证 的韭菜产品进入食用农产品市场、生产加工、餐饮 服务环节。这一举措反映出韭菜农药残留问题的日 益严重性，相关部门应加强韭菜中农药残留的监测 郭丽丽，女，讲师，专业方向：食品安全与检测，E-mail： cauguolili163.com &nbsp; *通讯作者（Corresponding author）：花锦，女，工程师，专业方向：食 品安全，E-mail：hua-jin1986163.com 收稿日期：2017-12-12；接受日期：2018-02-01 基金项目：国家认监委检验检疫行业标准项目（2012B131） ，山西中医 药大学博士科研启动项目（2015BK11） 韭菜是我国的特色蔬菜，味道鲜美、香味独特， 具有丰富的营养价值。韭菜含有VC、VB 1 等多种 维生素及矿物质，还含有丰富的纤维素，可以促进 肠道蠕动。韭菜中硫化物的独特辛香味具有一定的 杀菌消炎作用，有助于提高人体免疫力（商飞飞， self-fertility were found in 126 strains isolated，accounting for 88.1%，6.3% and 5.6% of the total isolates， respectively. Two mtDNA haplotypes，a and a，were identified，accounting for 17.5% and 82.5% of the total &nbsp;number of isolates，respectively. Seven SSR genotypes，F-01，F-02，F-03，F-05，F-06，D-03 and G-02， were identified from 126 isolates tested. Among them，the F-01 genotype（77.8%）was dominant ge</p>