抗黄萎病番茄种质材料的筛选.pdf

抗 黄 萎 病 番 茄 种 质 材 料 的 筛 选 王 明 耀 1 王 学 颖 1 鹿 秀 云 2 张 桂 海 1 张 钊 1 黄 志 辉 1 田 庆 武 1 王 长 浩 1 马 德 明 1 1 廊 坊 市 农 林 科 学 院 蔬 菜 研 究 所 河 北 廊 坊065000 2 河 北 省 农 林 科 学 院 植 物 保 护 研 究 所 河 北 保 定071000 摘要 通 过对117 份番 茄种质材 料 品种或品系 断根后分别接种1 10 7 番茄黄 萎病 菌 1 10 7 茄 子 黄 萎 病 菌 清 水 对 照 并 进 行 田 间 检 测 筛选 出高抗黄萎病的番茄种质材料15 份 感黄萎病 的种质材料2 份 经 对17 份材 料29 个样 本的DNA 分 子检 测 结 果与 田间 抗 性 表 现的吻 合度为75 86 该研究为筛选适合茄 子生产用抗黄萎病砧木 番 茄 育种 提供 抗源 材料 并 为 实 验 室 番 茄 抗 性DNA 分 子 检 测 提供理论 依据 关键词 番茄种质 抗黄萎病 筛选 DNA 抗 性分子检测 中图分类 号 S641 2 文献标识码 A 文章编号 0517 6611 2020 06 0048 02 doi 10 3969 j issn 0517 6611 2020 06 014 开 放科学 资源 服务 标识 码 OSID ScreeningofTomatoGermplasmagainstVerticilliumWilt WANGMing yao 1 WANGXue ying 1 LUXiu yun 2 etal 1 VegetableResearchInstituteofLangfangAcademyofAgriculturalandFor estrySciences Langfang Hebei065000 2 PlantProtectionInstitute HebeiAcademyofAgricultureandForestrySciences Baoding Hebei 071000 Abstract 117tomatogermplasmmaterials varietiesorstrains wereinoculatedwith1 10 7 tomatoverticillium wiltbacteria1 10 7 eggplant verticillium wiltbacteriawater control andfieldtest respectively 15tomatogermplasmmaterialswithhighresistancetoverticilliumwilt and2tomatogermplasmmaterialswithhighresistancetoverticilliumwiltwereselected ThroughtheDNAmoleculardetectionof29samplesof 17materials theresultandtheresistanceperformanceinthefieldwere75 86 Thestudyprovidesanti sourcematerialsforscreeningroot stockbreedingsuitableforeggplantproduction andtheoreticalbasisforlaboratorytomatoresistantDNAmoleculardetection Keywords Tomatogermplasm Resistancetoverticilliumwiltscreening DNAresistancemoleculardetection 基 金 项 目 河 北 省 科 技 计 划 项 目 番 茄 属 茄 子 抗 病 砧 木 种 质 资 源 创 新 1018072 8 作 者 简 介 王 明 耀 1962 男 河 北 廊 坊 人 研 究 员 硕 士 从 事 茄 子 抗 病 砧 木 育 种 及 优 质 高 效 栽 培 研 究 收 稿 日 期 2019 09 19 茄子是 我国主 要 蔬菜 作物 栽 培 面 积 居 世 界 前 列 1 生 产中 因 茄子抗 黄萎病 种质 资 源 匮 乏 2 和 重 茬 连 作 茄 子 黄 萎病 发生普 遍 一 般 减 产20 30 危 害 严 重 的 达60 3 茄子 黄萎病 属土传 病 害 其 病 菌 在 土 壤 中 通 常 存 活4 5 年 一般 常规植 保方法 很 难根 治 选用抗 病 品 种 能 有 效 防 治 茄 子 黄萎 病 4 采用优 良 的 抗 病 砧 木 嫁 接 茄 子 对 黄 萎 病 的 防 治 效果 显著 5 番 茄与 茄子同 科 异属 其 抗黄萎 病 种 质 材 料 较 多 我 国 在20 世 纪90 年 代 以 来 陆 续 有 以 番 茄 品 种 作 砧 木 与 茄 子 嫁 接 进 行 栽 培 且 有 效 防 治 茄 子 黄 萎 病 增 加 茄 子 产 能 的 报 道 目 前 国 内 尚 无 茄 子 专 用 番 茄 抗 黄 萎 病 砧 木 育 成 的 报 道 菜 农用 于茄子 嫁接砧 木 用 的 番 茄 多 为 自 行 留 种 或 相 互 交 换 而 来 存 在 混 杂 严 重 种 源 和 抗 性 不 稳 的 难 题 制 约 茄 子 产 业 发 展 6 为此 廊 坊市农 林科 学 院立项 番 茄 属 茄 子 抗 病 砧 木 种 质 资 源 创 新 课 题 培 育 适 合 茄 子 嫁 接 用 抗 黄 萎 病 的 番 茄 品 种 2018 年对117 份 番 茄 种 质 材 料 进 行 黄 萎 病 抗 性 田 间 鉴 定 并 经 实验室DNA 分 子 检 测 从 中 筛 选 出15 份 符 合 育 种 要求 的种质 材料 旨在 为选 育 茄子嫁 接 用 番 茄 抗 黄 萎 病 砧 木 品种 提供了 抗源材 料 1 材 料 与 方法 1 1 材 料 番 茄 品 种8 个 中 研 红2 号 东 风 一 号 白 果 强 丰 银 剑312 迪 奥 银 魅 科 砧1 号 科 砧2 号 番 茄 品 系 109 个 病 原 菌 茄子黄 萎病病 原菌 由 北 京 市 农 林 科 学 院 惠 赠 番 茄 黄萎 病 病原 菌ENAUTVD 1 由东 北农 业 大学 赠予 1 2 番 茄秧 苗 培育 在 日 光 温 室 中 采 用50 孔 塑 料 穴 盘 填 装 由 草炭 和 蛭 石 混 配 的 无 土 育 苗 基 质 育 苗 2018 年3 月8 日 播 种 4 月9 日育 成有3 片真叶 的健壮 秧 苗 1 3 病 原菌 分 生孢 子 悬浮 液制备 在超 净工作 台上 将茄 子 黄 萎 病病 原 菌 和 番 茄 黄 萎 病 病 原 菌ENAUTVD 1 分 别 接 种 在 马 铃薯 葡 萄 糖 琼 脂 培 养 基 PDA 平 板 上 进 行 活 化 25 恒 温 培养7d 挑 取菌 落 边缘 的 新 鲜 菌 丝 块 直 径5mm 4 5 块 分 别 转 接 于 马 铃 薯 葡 萄 糖 培 养 液 PDB 中 25 180r min 条件 下恒温 振荡培 养5d 培 养 液 用2 层 灭 菌 纱 布 滤 去菌 丝 得到 分 生孢 子 悬浮 液 7 在 显 微 镜 下 用 血 球 计 数 板 检 查滤 液 中分 生 孢子 数 量 并用 灭 菌水 将其 浓 度 调 整 为1 0 10 7 孢 子 mL 备用 1 4 病原 菌 人工 接 种 采 用 断 根 法 8 接 种 茄 子 黄 萎 病 病 原 菌 和 番茄 黄 萎病 病 原菌 试 验 设 置3 个 处 理 同 一 个 番 茄 种 质 材 料秧 苗 分成 数 量相 等 的3 份 每 份50 棵 秧 苗 其 中 一 份 接 种 茄子 黄 萎病 病 原菌 分 生孢 子 悬 浮 液 一 份 接 种 番 茄 黄 萎 病 病 原菌 分 生 孢 子 悬 浮 液 另 一 份 接 种 等 量 清 水 接 种 时 先 将 长满 番 茄 秧 苗 根 系 的 苗 坨 逐 棵 从50 孔 穴 盘 中 整 体 取 出 随 即 用锋 利 的剪 刀 在距 离 苗 坨 底 部1 3 处 横 向 将 番 茄 根 系 和 苗坨 一 并剪 掉 将 上部2 3 苗 坨 连 同 秧 苗 一 起 栽 到 事 先 已 经 填充 且 压实1 5cm 厚 无 土 育 苗 基 质 的50 孔 穴 盘 中 之 后 用注 射 器每 穴 加注10mL 的1 0 10 7 mL 病 原 菌 分 生 孢 子 悬 浮 液或 清 水 1 5 番 茄苗 栽 植培 养 接 种后放 置24h 使 接 种番 茄 秧苗 的 根 系 和苗 坨 充分 吸 收加 注 的孢 子 悬 浮 液 之 后 取 出 秧 苗 和 苗 安 徽 农 业 科 学 J AnhuiAgric Sci 2020 48 6 48 49 92 坨整 体定植 在日 光 温 室 内 的 普 通 土 壤 中 在 日 光 温 室 中 栽 植 每 份 番茄种 质材料 设置 为 一 个 小 区 每 个 小 区 栽 植3 行 每个 处理栽 种1 行 每 行50 株 平 均 行 距0 7m 株 距0 1m 其中 1 行 栽 植 接种 番 茄黄萎 病 菌 的 秧 苗 1 行 栽 植 接 种 茄 子 黄萎 病菌的 秧苗 1 行 栽植清 水处理 的秧 苗 对照 1 6 番 茄 黄 萎 病调 查 方 法 与 抗 性 评 价 标 准 自 秧 苗 定 植 后 第7 天开始 采 用6 级分 级 法 每7d 调 查 一 次 番 茄 黄 萎 病 发 病 情 况 计 算 病 情 指 数 按 照 病 情 指 数 划 分 番 茄 对 黄 萎 病 的 抗病 性 番 茄对黄 萎 病的 抗病性 划 分标 准 见表1 番 茄 黄 萎 病 分 级 标 准 0 级 无 病 症 1 级 发 病 株 有 10 的叶 子发 病 病 叶现淡 黄 色病 斑 2 级 病株 有11 25 的病 叶 发病叶 显 现 淡 黄 色 病 斑 3 级 病 株 上 病 叶 达26 50 病 斑 淡 黄色和 黄褐色 4 级 病 株有50 以 上 的 病 叶 现 淡黄 色和黄 褐色病 斑 5 级 病 株 叶 片 全 部 染 病 植 株 萎 蔫 或 死亡 9 病情指 数 100 病 级 该 病 级 株 数 最 高 级 值 总 株数 表1 番茄黄萎病 抗病级别划 分标准 Table1 Classificationcriteriaoftomatoverticilliumwiltresistance level 级别 Level 抗 性型 Resistance type 英文缩写 English abbreviations 病情指 数范围 Diseaseindex 1 免疫 I DI 0 0 2 高抗 HR 0 0 DI 10 0 3 抗病 R 10 1 DI 20 0 4 耐病 T 20 1 DI 35 0 5 感病 S DI 35 1 1 7 番茄 植 株黄 萎 病抗 性 检测 2018 年8 月10 日 播 种当 年 筛 选 的部 分 优异 番 茄种 质 材 料41 份 育 成 健 壮 秧 苗 在 秧 苗 达3 片真 叶 时采 用 上 述 接 种 方 法 接 种 番 茄 黄 萎 病 病 原 菌 菌 ENAUTVD 1 分生 孢 子悬 浮 液 当植株 达3 穗果 膨大 期 从 其 中 的17 份番 茄 种质 材 料 中随 机 抽 取29 株 每 株 取 嫩 枝1 份 做 样 本 分 别 标 号 后 送 河 北 科 技 大 学 进 行 番 茄 黄 萎 病 抗 性 检 测 2 结 果与分 析 2 1 番 茄 品 种 品 系 对2 种 病 菌 引 发 的 黄 萎 病 的 抗 性 评 价 通过 对117 份 栽 植 在 日 光 温 室 中 分 别 接 种 了 茄 子 黄 萎 病 菌 番 茄 黄 萎 病 菌2 种 致 病 菌 的 番 茄 种 质 材 料 的 田 间 调 查 筛 选 出对2 种黄 萎 病 免 疫 的 种 质 材 料5 份 FY 9 5 7 4 1 FY 6 7 6 4 2 Z2 7 2 6 7 4 WM2 4 5 9 3 26 12 9 7 5 4 高 抗 材料10 份 17B 5 3 6 7 3 QX 4 10 9 5 2 LH 4 9 7 10 6 L8 6 3 11 6 5 L9 7 4 1 9 2 4 KR 9 2 17 6 5 4 XXA 6 12 8 6 4 GPM6 6 5 7 9 1 KN 9 11 8 6 7 3 KC 2 10 6 7 2 感 病 材 料2 份 53 6 11 6 4 1 11 7 12 9 5 7 表2 2 1 1 田 间番 茄 种 质 材 料 对 茄 子 黄 萎 病 的 抗 性 表 现 接 种 茄 子 黄萎 病 菌的117 份番 茄 种 质 材 料 在 日 光 温 室 中 栽 培 抗 性 表 现可 分5 种类 型 其 中 免疫 材 料7 份 高抗 材 料33 份 中 抗 材料42 份 耐 病22 份 感 病 材料13 份 2 1 2 田 间番 茄 种 质 材 料 对 番 茄 黄 萎 病 的 抗 性 表 现 接 种 番 茄 黄萎 病 菌的117 份番 茄 种 质 材 料 在 日 光 温 室 中 栽 培 抗 性 表 现也 有5 类 其中 免疫 材料5 份 高 抗 材料10 份 中 抗 材 料26 份 耐病40 份 感 病材 料36 份 表2 番茄种质 对2 种黄萎 病菌的 抗性 Table2 Resistanceoftomatogermplasmtotwostrainsofverticilliumwilt 品种或 品系 Varietiesorstrain 接种茄子 黄萎病 Inoculatingeggplant verticilliumwilt 初 发期 Incipient period 抗性 评价 Resistant evaluation 接 种番茄黄萎病 Inoculatingtomato verticilliumwilt 初发期 Incipient period 抗性评价 Resistant evaluation 接 种清水 Inoculating clearwater 初发 期 Incipient period 抗性评价 Resistant evaluation FY 9 5 7 4 1 0 I 0 I 0 53 6 11 6 4 1 05 09 50 6 S 05 02 87 2 S 0 KC 2 10 6 7 2 0 I 05 30 6 3 HR 0 11 7 12 9 5 7 05 11 38 6 S 05 04 86 0 S 0 Z2 7 2 6 7 4 0 I 0 I 0 FY 6 7 6 4 2 0 I 0 I 0 WM2 4 5 9 3 0 I 0 I 0 17B 5 3 6 7 3 05 23 3 3 HR 05 16 9 6 HR 0 QX 4 10 9 5 2 05 23 5 3 HR 05 16 5 0 HR 0 LH 4 9 7 10 6 05 23 7 9 HR 05 23 9 8 HR 0 L9 7 4 1 9 2 4 05 23 3 3 HR 05 23 5 5 HR 0 KR 9 2 17 6 5 4 05 23 9 9 HR 05 23 10 5 HR 0 26 12 9 7 5 4 0 I 0 I 0 L8 6 3 11 6 5 05 23 5 4 HR 05 23 5 5 HR 0 XXA 6 12 8 6 4 0 I 05 30 5 1 HR 0 GPM6 6 5 7 9 1 05 11 8 2 HR 05 23 9 8 HR 0 KN 9 11 8 6 7 3 0 I 05 30 5 2 HR 0 2 2 番 茄 种 质 抗 黄 萎 病 的DNA 分 子 检 测 2018 年11 月 在3 穗果膨 大期从15 份 抗 病番 茄 材 料 和2 份 感 病 番 茄 材 料 中 随 机 选 取29 株 每 株 取 嫩 枝1 份 送 河 北 科 技 大 学 进 行 抗 下 转 第92 页 9 4 48 卷6 期 王 明 耀 等 抗 黄 萎 病 番 茄 种 质 材 料 的 筛 选 能 将 项 目 类 型 重 新 定 位 为 综 合 公 园 并 命 名 为 湛 江 南 亚 奇 园 设 计 主题是 植物的 奇 该方 案深刻 分析了 南亚 热 带 植 物的 分类 功能 并 分 析 了 场 地 现 状 重 新 界 定 了 其 功 能 区 通 过 结 合 自 然 软 质 景 观 和 人 工 硬 质 景 观 配 置 绿 色 植 物 调 整 植 物 色 相 等 设 计 手 法 构 建 形 态 各 异 的 空 间 彰 显 各 个 区 的功 能 9 湛江南 亚 奇园 为一个 综 合 性 公 园 其 以 特 色 的 植 物分 区轴线 和每个 区 域 独 有 的 植 物 元 素 给 游 人 带 来 穿 梭 于 绿 色 世 界 中 的 感 受 而 且 运 用 不 同 层 次 的 植 物 配 置 不 同 功 能的 分区对 公园以 及 周边 的环境 进 行 改 善 给 游 客 带 来 愉 悦 和 舒 适 并 体会 设计带 来的 巨 大 魅 力 奇 园 还 融 合 了 湛 江 源 远 流 长 的 文 化 发 展 前 景 广 阔 为 湛 江 甚 至 广 东 的 旅 游 产 业 作 出 了贡献 10 并成为 一 个 植 物 多 样 性 的 承 载 和 标 志 从 而 为 游 客 在 湛 江 奇 园 提 供 植 物 文 化 展 示 滨 海 植 物 观 赏 生 态 环保 耕 作体验 休 闲 度 假 观 光 摄 影 科 普 教 育 基 地 等 为 一 体的 复合型 综合公 园 的现 代游园 场 所 参 考 文 献 1 刘 福 瑞 雷 州 半 岛 民 歌 在 保 护与发展 中存在的问 题及对策 J 艺 术教 育 2014 7 142 143 2 VUJCICM TOMICEVIC DUBLJEVICJ Urbanforestbenefitstotheyoun gerpopulation ThecasestudyofthecityofBelgrade Serbia J Forest policyandeconomics 2018 96 54 62 3 陈 惠 陆 黄 艺 文 湛 江 生 态 环 境 高 颜 值 经 济 发 展 高 素 质 J 环 境 2019 4 35 37 4 GREYGW DENEKEFJ Urbanforestry M NewYorks JohnWileyand Sons 1978 2 3 5 西 安 沣 渭 河 谷 湿 地 公 园 项 目 概 念 性 规 划 方 案 EB OL 2019 04 05 6 谭 玛 丽 周 方 诚 适合 儿童 的 公 园 与 花 园 儿 童 友 好 型 公 园 的 设 计 与 研 究 J 中 国 园 林 2008 9 43 48 7 潘 明 慧 刘 付 东 标 夏 春 华 湛 江 儿 童 公 园 景 观 设 计 J 安 徽 农 业 科 学 2015 43 23 184 187 228 8 吴 体 焕 福 建 省 连 江 体 育 公 园 景 观 设 计 之 初 探 J 福 建 建 设 科 技 2015 4 56 57 9 杨 扬 校 园 景 观 空 间 格 局 的 优 化 设 计 研 究 J 吉林农业 2019 11 90 91 10 苏 红 湛 江 市 港 湾 游 现 状 及 对 策 研 究 J 现 代 经 济 信 息 2019 6 482 蕚蕚蕚蕚蕚蕚蕚蕚蕚蕚蕚蕚蕚蕚蕚蕚蕚蕚蕚蕚蕚蕚蕚蕚蕚蕚蕚蕚蕚蕚蕚蕚蕚蕚蕚蕚蕚蕚蕚蕚蕚蕚蕚蕚蕚蕚蕚蕚 484 上 接 第49 页 黄萎 病DNA 分 子 检 测 其 结 果 与 在 日 光 温 室 中 的 田 间 调 查 结果 吻合度 达75 86 表3 表3 番 茄 种质黄萎病抗 性DNA 分子检测与 田间检测对 照 Table3 ComparisonbetweenresistanceDNAmoleculardetectionand fielddetection 品种或 品系 Varieties orstrain 样本 编号 Sample number DNA 分子 检测结果 DNA molecular testresults 田间检 测结果 Field test results 2 种 检测结 果是否吻 合 Whether thetwotest resultsare consistent 吻 合度 Align ment FY 9 5 7 4 1 01 抗 抗 75 86 05 抗 抗 07 抗 抗 10 抗 抗 FY 6 7 6 4 2 02 抗 抗 09 抗 抗 06 抗 抗 KL 2 8 3 9 2 11 感 抗 15 抗 抗 19 感 感 KC 2 10 6 7 2 12 抗 抗 14 抗 抗 17 杂 感 53 6 11 6 4 1 22 感 感 25 感 感 27 感 抗 FG77 6 7 9 3 2 16 抗 感 18 抗 感 26 7 6 3 9 1 03 抗 抗 Z2 7 2 6 7 4 04 抗 抗 WM2 4 5 9 3 08 抗 抗 GPM6 6 5 7 9 1 13 抗 抗 LH 4 9 7 10 6 20 抗 抗 L8 6 3 11 6 5 21 抗 抗 L9 7 4 1 9 2 4 23 杂 抗 QX 4 10 9 5 2 24 抗 抗 17B 5 3 6 7 3 26 抗 抗 XXA 6 12 8 6 4 28 感 抗 KR 9 2 17 6 5 4 29 抗 抗 注 表示 结果相同 表 示结果不同 Note meansthesameresult Xmeansdifferentresults 3 结 论与讨 论 1 抗 番茄 黄 萎 病 的 番 茄 种 质 材 料 全 部 抗 茄 子 黄 萎 病 抗 茄 子黄 萎 病的 番 茄 种 质 材 料 中 只 有 部 分 材 料 表 现 抗 番 茄 黄 萎病 感 病番 茄 黄萎 病 的番 茄 种 质 材 料 全 部 感 病 茄 子 黄 萎 病 感 病 茄 子 黄 萎 病 的 番 茄 种 质 材 料 多 数 感 病 番 茄 黄 萎 病 该试 验 结果 表 明 番 茄 种 质 中 仅 有 部 分 材 料 表 现 抗 黄 萎 病 抗 性 表现 因 染病 病 原菌 的 不同 而 有所 不 同 2 抗 性DNA 检测 对 田 间 筛 选 抗 性 番 茄 材 料 有 较 强 的 引 导 作 用 可 缩 减 田 间 筛 选 范 围 和 数 量 提 高 筛 选 精 度 加 速 选 育 速度 10 因DNA 检 测 结 果 与 田 间 调 查 结 果 吻 合 度 尚 未 达到100 故 经DNA 检 测 出的 番 茄 抗 性 材 料 仍 需 经 田 间 接 种 检验 证 明具 有 相 应 的 抗 性 后 才 能 作 为 抗 性 育 种 种 质 材 料 使 用 参 考 文 献 1 于 淼 河 北 省 茄 子 黄 萎 病 菌 的 分 离 鉴 定 及 抗 性 资 源 筛 选 D 保 定 河 北 农 业 大 学 2013 2 胡 建 坤 黄 蓉 方 荣 等 茄 子 种 质 资 源 对 黄 萎 病 的 抗 性 鉴 定 J 江 西 农 业 大 学 学 报 2019 41 1 68 73 3 苏 春 森 茄 子 黄 萎 病 发 生 规 律 及 综 防 技 术 J 长 江 蔬菜 2000 5 23 24 4 刘 晶 晶 茄 子 黄 萎 病 病 原 菌 分 化 检 测 及 生 物 防 治 的 研 究 D 杭 州 浙 江 大 学 2019 5 赵 青 春 赵 娜 张 力 等 嫁 接 对 茄 子 生 长 发 育 和 黄 萎 病 抗 性 的 影 响 J 中 国 蔬 菜 1997 6 7 9 6 董 灵 迪 石 琳 琪 焦 永 刚 等 嫁 接 防 治 茄 子 黄 萎 病 砧 木 筛 选 及 效 果 研 究 J 河 北 农 业 科 学 2010 14 10 46 47 7 宋 敏 丽 茄 子 砧 木 黄 萎 病 抗 性的苗期 室内接种鉴 定 J 太原师范 学院 学 报 自 然 科 学 版 2007 6 1 128 130 8 李 颖 仪 司 雨 王 怡 玫 等 抗 青 枯 病 番 茄 嫁 接 砧 木 的 筛 选 J 长 江 蔬 菜 2016 12 48 51 9 黄 婷 婷 吉 玉玲 王 媛 等 茄 子 抗 黄 萎 病 砧 木97 16 的 嫁 接 抗 病 研 究 J 中 国 农 学 通 报 1999 4 69 70 72 10 荆 子 桓 王 先 裕 龙 安四 等 广西 番茄砧木多 抗材料筛选 J 中 国 蔬 菜 2016 10 28 32 2 9 安 徽 农 业 科 学 2020 年