卷丹百合脱毒与快繁技术研究.pdf

应 用 技 术 田 山 君 等 卷 丹 百 合 脱 毒 与 快 繁 技 术 研 究 20 滕 飞 刘 勇 王 琰 等 底 部 渗 灌 下 容 器 类 型 及 规 格 对 油 松 根 系 结 构 的 影 响 J 浙 江 农 林 大 学 学 报 2017 34 3 449 458 21 鲁 敏 姜 凤 岐 宋 轩 容 器 苗 质 量 评 定 指 标 的 研 究 J 应 用 生 态 学 报 2002 6 763 765 22 郑 琰 燚 任 少 秋 高 飞 等 不 同 醋 糟 基 质 配 比 对 南 方 红 豆 杉 幼 苗 生 长 的 影 响 J 中 南 林 业 科 技 大 学 学 报 2018 38 11 17 21 28 23 向 光 锋 颜 立 红 田 晓 明 等 不 同 基 质 对 厚 果 鸡 血 藤 种 子 萌 发 及 容 器 苗 生 长 的 影 响 J 西 北 林 学 院 学 报 2018 33 1 141 145 24 庞 圣 江 马 跃 张 培 等 基 质 配 比 和 缓 释 肥 用 量 对 望 天 树 容 器 苗 的 生 长 效 应 J 西 北 林 学 院 学 报 2018 33 6 66 71 收 稿 日 期 2019 11 24 基 金 项 目 贵 州 省 科 技 计 划 项 目 食 用 百 合 脱 毒 快 繁 及 产 业 化 关 键 技 术 研 究 黔 科 合 支 撑 2017 2527 作 者 简 介 田 山 君 1986 女 副 教 授 研 究 方 向 作 物 高 产 栽 培 技 术 与 措 施 通 讯 作 者 张 万 萍 1970 女 博 士 教 授 硕 士 生 导 师 主 要 从 事 蔬 菜 栽 培 及 育 种 方 面 的 教 学 与 科 研 工 作 E mail 1226190368 qq com 卷 丹 百 合 脱 毒 与 快 繁 技 术 研 究 田 山 君 1 裴 芸 1 牛 力 立 2 田 洪 梅 3 吴 家 丽 2 张 万 萍 1 1 贵 州 大 学 农 学 院 贵 阳 550025 2 安 顺 市 农 科 院 贵 州 安 顺 561000 3 平 塘 县 经 济 作 物 推 广 站 贵 州 平 塘 558300 StudyonVirus removalandRapidPropagationTechniqueof L i l i u m l a n c i f o l i u m Thunb T I A N S h a n j u n 1 P E I Y u n 1 N I U L i l i 2 T I A N H o n g m e i 3 W U J i a l i 2 Z H A N G W a n p i n g 1 摘 要 以 贵 州 铜 仁 地 区 卷 丹 百 合 为 材 料 研 究 不 同 激 素 组 配 对 卷 丹 百 合 不 同 外 植 体 扩 繁 以 及 不 同 脱 毒 方 法 对 卷 丹 百 合 脱 毒 效 果 的 影 响 以 建 立 最 佳 的 卷 丹 百 合 脱 毒 和 组 培 快 繁 技 术 结 果 表 明 外 植 体 用 75 的 乙 醇 浸 泡 30s 后 再 用 10 次 氯 酸 钠 消 毒 20min 达 到 40 的 最 低 污 染 率 内 层 鳞 片 和 茎 芽 是 卷 丹 百 合 组 培 快 繁 外 植 体 的 最 佳 选 择 26 和 45 交 替 热 处 理 1 个 月 后 剥 取 0 3 0 8mm 茎 尖 的 脱 毒 效 果 最 好 达 到 最 低 30 的 污 染 率 和 最 高 70 的 成 活 率 最 适 初 代 诱 导 培 养 基 是 MS 6 BA2 0mg L 1 NAA1 0 mg L 1 诱 导 率 最 高 达 86 67 最 适 增 殖 培 养 基 为 MS 6 BA0 1mg L 1 NAA0 5 mg L 1 增 值 率 增 殖 倍 数 均 最 高 达 80 4 88 最 适 生 根 结 鳞 茎 培 养 基 为 MS NAA1 0mg L 1 IBA0 5mg L 1 生 根 率 达 100 关 键 词 卷 丹 百 合 外 植 体 植 物 激 素 脱 毒 快 繁 DOI 编 码 10 16590 j cnki 1001 4705 2020 05 157 中 图 分 类 号 S644 1 文 献 标 志 码 A 文 章 编 号 1001 4705 2020 05 0157 06 百 合 是 百 合 科 百 合 属 多 年 生 球 根 草 本 植 物 的 总 称 食 用 百 合 肉 质 鳞 片 含 有 丰 富 的 淀 粉 蛋 白 质 果 胶 等 营 养 物 质 及 钙 磷 铁 等 营 养 元 素 因 为 具 有 极 高 的 营 养 价 值 成 为 国 内 外 消 费 者 喜 好 的 蔬 菜 食 品 具 有 非 常 广 阔 的 栽 培 和 市 场 前 景 1 3 贵 州 铜 仁 毕 节 等 地 长 期 采 用 鳞 茎 鳞 片 等 营 养 体 进 行 无 性 繁 殖 不 仅 繁 殖 系 数 低 病 毒 积 累 严 重 而 且 种 球 退 化 现 象 明 显 影 响 了 食 用 百 合 的 品 质 和 产 量 在 很 大 程 度 上 制 约 了 百 合 产 业 的 发 展 国 内 对 百 合 组 织 培 养 技 术 的 研 究 较 多 但 多 集 中 在 外 植 体 的 选 择 培 养 基 中 植 物 激 素 配 比 4 6 等 方 面 对 百 合 快 速 扩 繁 过 程 进 行 全 方 位 的 研 究 较 少 本 研 究 以 贵 州 铜 仁 地 区 主 栽 的 卷 丹 百 合 为 材 料 研 究 卷 丹 百 合 组 织 培 养 的 最 佳 消 毒 方 法 最 适 外 植 体 及 最 适 培 养 基 配 方 以 期 为 食 用 百 合 的 规 模 化 繁 殖 及 开 发 利 用 提 供 一 定 的 参 考 1 材 料 与 方 法 1 1 试 验 材 料 试 验 所 用 百 合 于 2017 年 4 5 月 采 自 贵 州 铜 仁 思 南 县 为 当 地 主 栽 品 种 MS 为 基 本 培 养 基 其 他 试 剂 NAA 6 BA IBA 等 为 分 析 纯 AR 均 购 自 北 京 鼎 国 生 物 技 术 有 限 公 司 1 2 试 验 方 法 1 2 1 外 植 体 选 取 选 取 生 长 健 壮 无 病 害 的 鳞 茎 经 热 处 理 和 催 芽 处 7 5 1 种 子 Seed 第39 卷 第5 期 2020 年5 月 Vol 39 No 5 May 2020 理 后 剥 离 出 茎 尖 茎 段 叶 片 鳞 片 清 洗 消 毒 后 晾 干 留 取 核 心 部 分 鳞 片 置 于 光 照 培 养 箱 内 以 26 和 45 交 替 处 理 1 个 月 以 下 简 称 热 处 理 即 白 天 45 夜 间 26 光 照 强 度 设 定 为 1500lx 1 2 2 外 植 体 消 毒 待 茎 尖 伸 长 2 3cm 时 将 催 芽 培 养 后 的 百 合 鳞 茎 球 剥 去 外 层 鳞 片 先 用 75 的 乙 醇 浸 泡 30s 再 用 5 10 15 3 个 浓 度 的 次 氯 酸 钠 溶 液 分 别 处 理 10 min 20min 用 无 菌 水 冲 洗 3 5 遍 吸 去 表 面 水 分 剥 去 百 合 鳞 茎 轴 的 鳞 片 直 至 不 带 叶 原 基 的 茎 尖 生 长 点 接 种 于 MS 培 养 基 上 进 行 培 养 每 个 处 理 接 10 瓶 每 瓶 接 1 个 10d 后 统 计 污 染 率 及 成 活 率 污 染 率 外 植 体 中 染 菌 的 数 量 接 种 的 外 植 体 总 数 100 成 活 率 1 死 亡 的 外 植 体 数 量 愈 伤 失 败 的 外 植 体 数 量 接 种 的 外 植 体 总 数 100 1 2 3 培 养 基 的 配 制 及 种 类 基 本 培 养 基 为 MS 附 加 琼 脂 粉 4 5g L 1 蔗 糖 30g L 1 pH 为 5 85 在 不 同 的 阶 段 诱 导 增 殖 生 根 壮 苗 加 入 不 同 配 比 的 植 物 激 素 激 素 浓 度 设 计 按 照 文 献 7 8 的 方 法 进 行 分 化 增 殖 阶 段 及 生 根 结 鳞 茎 阶 段 的 激 素 配 比 见 表 1 表 1 不 同 培 养 基 种 不 同 激 素 配 比 培 养 基 类 型 培 养 基 编 号 不 同 种 类 及 不 同 浓 度 的 激 素 配 比 mg L 1 6 BA NAA IBA 诱 导 分 化 及 增 殖 培 养 1 0 1 0 1 2 0 1 0 5 3 0 1 1 0 4 0 5 0 1 5 0 5 0 5 6 0 5 1 0 7 1 0 0 1 8 1 0 0 5 9 1 0 1 0 10 1 5 0 1 11 1 5 0 5 12 1 5 1 0 13 2 0 0 1 14 2 0 0 5 15 2 0 1 0 生 根 结 鳞 茎 培 养 16 0 0 0 1 17 0 0 0 2 18 0 0 0 5 19 0 5 0 1 20 0 5 0 2 21 0 5 0 5 22 1 0 0 1 23 1 0 0 2 24 1 0 0 5 1 2 4 脱 毒 及 诱 导 培 养 1 不 同 外 植 体 筛 选 试 验 将 已 催 芽 的 鳞 茎 的 茎 芽 茎 段 叶 片 和 鳞 片 分 离 鳞 片 的 1 2 层 为 外 层 3 4 层 为 中 层 5 层 以 内 为 内 层 流 水 冲 洗 1h 后 先 用 75 乙 醇 消 毒 30s 再 用 10 次 氯 酸 钠 溶 液 消 毒 20min 然 后 用 无 菌 水 冲 洗 3 5 次 用 无 菌 滤 纸 将 表 面 水 分 吸 干 接 种 到 启 动 培 养 基 MS 6 BA2 0mg L 1 NAA1 0mg L 1 上 每 种 外 植 体 接 种 10 瓶 每 瓶 1 株 置 于 培 养 室 进 行 培 养 温 度 26 光 强 2000lx 光 照 时 间 12h d 1 培 养 2 周 后 观 察 污 染 情 况 培 养 1 月 后 观 察 外 植 体 的 成 活 及 分 化 情 况 2 不 同 脱 毒 方 法 比 较 试 验 设 热 处 理 后 分 别 剥 取 0 2 0 8mm 茎 尖 1 3 mm 茎 芽 鳞 片 4 个 不 同 的 脱 毒 方 法 并 以 不 经 热 处 理 直 接 剥 取 的 茎 尖 作 为 对 照 均 接 种 到 启 动 培 养 基 上 离 体 培 养 成 活 后 的 组 织 单 个 观 察 培 养 繁 殖 成 无 性 系 并 分 留 样 品 寄 到 云 南 省 农 科 院 生 物 技 术 与 种 质 资 源 研 究 所 检 测 脱 毒 情 况 3 不 同 激 素 配 比 对 茎 尖 诱 导 的 影 响 试 验 取 消 毒 好 的 茎 芽 剖 取 0 2 0 8mm 大 小 的 茎 尖 接 种 于 诱 导 培 养 基 1 15 号 上 进 行 诱 导 培 养 每 种 培 养 基 接 种 15 瓶 每 瓶 1 个 茎 尖 培 养 温 度 均 为 23 28 光 培 养 的 光 照 强 度 为 2000 3000lx 光 照 时 间 为 12h d 1 每 周 进 行 观 察 30d 以 后 统 计 鳞 片 分 化 数 与 不 定 芽 生 长 数 计 算 诱 导 率 诱 导 率 分 化 的 外 植 体 数 接 种 的 外 植 体 总 数 100 1 2 5 继 代 增 殖 培 养 将 诱 导 分 化 后 得 到 的 芽 愈 伤 组 织 等 分 成 单 株 或 小 块 分 别 转 接 到 增 殖 培 养 基 1 15 号 上 每 个 培 养 基 接 10 瓶 每 瓶 接 5 株 置 于 培 养 室 温 度 26 光 强 2000lx 光 照 时 间 12h d 1 经 增 殖 生 成 的 丛 生 芽 不 定 芽 再 将 其 分 割 继 续 反 复 培 养 增 殖 壮 苗 每 周 观 察 记 录 有 效 芽 数 芽 高 大 于 0 5cm 等 增 殖 生 长 情 况 增 殖 率 有 效 芽 数 10 瓶 5 株 100 1 2 6 生 根 结 鳞 茎 培 养 将 继 代 培 养 得 到 的 无 根 苗 和 丛 芽 分 割 成 单 株 转 接 到 生 根 结 鳞 茎 培 养 基 16 24 号 上 每 个 培 养 基 处 理 接 10 瓶 每 瓶 接 5 株 苗 置 于 培 养 室 温 度 26 光 强 2000lx 光 照 时 间 12h d 1 每 周 观 察 记 录 30d 后 随 机 抽 取 2 瓶 统 计 小 鳞 茎 增 殖 数 及 新 根 发 生 条 数 8 5 1 应 用 技 术 田 山 君 等 卷 丹 百 合 脱 毒 与 快 繁 技 术 研 究 生 根 率 生 根 愈 伤 组 织 块 数 接 种 愈 伤 组 织 总 数 100 1 3 数 据 分 析 采 用 Excel 软 件 结 合 DPS15 10 软 件 进 行 方 差 分 析 分 析 方 法 按 Duncan 新 复 极 差 法 进 行 2 结 果 与 分 析 2 1 不 同 处 理 对 卷 丹 百 合 外 植 体 灭 菌 效 果 的 影 响 不 同 处 理 对 卷 丹 百 合 外 植 体 的 表 面 灭 菌 效 果 影 响 如 表 2 所 示 次 氯 酸 钠 浓 度 越 高 处 理 时 间 越 长 外 植 体 的 污 染 率 越 低 但 随 着 次 氯 酸 钠 浓 度 的 升 高 处 理 时 间 的 延 长 外 植 体 的 成 活 率 则 出 现 下 降 以 10 浓 度 的 次 氯 酸 钠 处 理 20 min 后 的 外 植 体 成 活 率 最 高 60 污 染 率 最 低 40 表 2 不 同 处 理 对 卷 丹 百 合 外 植 体 灭 菌 效 果 的 影 响 处 理 编 号 次 氯 酸 钠 浓 度 处 理 时 间 min 污 染 率 成 活 率 1 5 10 80 20 2 5 20 60 40 3 10 10 50 50 4 10 20 40 60 5 15 10 50 20 6 15 20 40 20 2 2 不 同 部 位 外 植 体 对 扩 繁 效 果 的 影 响 不 同 部 位 外 植 体 的 成 活 及 分 化 情 况 见 表 3 百 合 不 同 部 位 的 外 植 体 分 化 效 果 差 异 显 著 在 污 染 率 方 面 外 层 鳞 片 中 层 鳞 片 叶 片 茎 段 茎 芽 内 层 鳞 片 且 差 异 均 达 到 极 显 著 水 平 在 成 活 率 方 面 内 层 鳞 片 茎 芽 茎 段 叶 片 中 层 鳞 片 外 层 鳞 片 且 差 异 均 达 到 极 显 著 水 平 在 不 定 芽 分 化 数 方 面 外 层 鳞 片 茎 芽 中 层 内 层 鳞 片 茎 段 叶 片 差 异 均 达 显 著 水 平 需 要 注 意 的 是 以 茎 芽 外 层 鳞 片 为 外 植 体 的 不 定 芽 分 化 数 最 高 在 5 0 5 5 之 间 其 次 是 中 层 内 层 鳞 片 不 定 芽 分 化 数 为 4 67 与 茎 芽 外 层 鳞 片 的 不 定 芽 分 化 数 差 异 显 著 但 未 达 极 显 著 水 平 卷 丹 百 合 的 茎 芽 图 版 a 叶 片 图 版 b 鳞 片 图 版 c 和 茎 段 图 版 d 作 为 外 植 体 均 可 以 成 活 但 中 外 层 鳞 片 污 染 率 高 成 活 率 也 低 茎 段 和 叶 片 不 定 芽 分 化 数 低 内 层 鳞 片 和 茎 芽 由 于 有 鳞 片 和 叶 片 包 裹 不 易 被 污 染 灭 菌 效 果 较 好 且 成 活 率 和 不 定 芽 分 化 数 较 高 可 作 为 卷 丹 百 合 组 培 快 繁 外 植 体 的 最 佳 选 择 但 作 为 外 植 体 茎 芽 数 量 相 对 鳞 片 较 少 如 果 种 球 不 多 需 大 量 扩 繁 时 内 层 鳞 片 则 是 卷 丹 百 合 组 培 快 繁 外 植 体 的 最 佳 选 择 成 活 率 可 达 70 不 定 芽 分 化 数 为 4 67 表 3 不 同 外 植 体 灭 菌 处 理 效 果 处 理 编 号 外 植 体 污 染 率 成 活 率 不 定 芽 分 化 数 1 茎 芽 50 2Dd 50 5Bb 5 00 0 23Aa 2 茎 段 60 4Cc 40 2Cc 3 33 0 37Bc 3 叶 片 60 2Cc 40 2Cc 1 67 0 34Cd 4 外 层 鳞 片 80 3Aa 20 4De 5 5 0 28Aa 5 中 层 鳞 片 70 1Bb 30 4Cc 4 67 0 33Ab 6 内 层 鳞 片 30 5Ee 70 5Aa 4 67 0 33Ab 注 表 中 大 写 字 母 表 示 差 异 达 极 显 著 水 平 小 写 字 母 表 示 差 异 达 显 著 水 平 下 同 2 3 不 同 脱 毒 方 法 比 较 试 验 随 机 抽 提 各 处 理 样 品 负 染 色 制 片 利 用 JEM100 CX 透 射 电 子 显 微 镜 检 测 脱 毒 效 果 见 表 4 结 果 表 明 A 方 法 热 处 理 结 合 茎 尖 脱 毒 的 效 果 最 好 即 经 26 和 45 交 替 热 处 理 1 个 月 后 剥 取 0 2 0 8mm 茎 尖 2 个 检 测 的 样 品 中 2 号 样 品 未 观 测 到 病 毒 颗 粒 1 号 样 品 在 5 万 倍 下 平 均 每 视 野 1 5 个 病 毒 粒 体 脱 毒 率 为 50 其 次 是 D 方 法 茎 尖 脱 毒 虽 然 没 完 全 脱 掉 病 毒 存 在 的 病 毒 粒 体 较 少 7 号 样 品 在 5 万 倍 下 平 均 每 视 野 少 于 1 个 病 毒 粒 体 8 号 样 品 在 5 万 倍 下 平 均 每 视 野 1 5 个 病 毒 粒 体 而 只 经 热 处 理 剥 取 的 较 大 茎 芽 和 鳞 片 诱 导 的 试 管 苗 病 毒 粒 相 对 较 多 检 测 报 告 显 示 2 号 样 品 已 经 脱 毒 可 以 用 于 生 产 扩 繁 如 急 需 扩 繁 7 号 样 品 也 可 用 表 4 不 同 脱 毒 处 理 方 法 病 毒 检 测 结 果 脱 毒 方 法 样 品 编 号 电 子 显 微 镜 观 察 结 果 A 1 号 SV d 60nm A 2 号 B 3 号 SV d 30nm B 4 号 SV d 40nm LV C 5 号 SV d 30nm C 6 号 SV d 30nm SV d 60nm D 7 号 SV d 30nm D 8 号 SV d 30nm 注 表 示5 万 倍 下 平 均 每 视 野 未 观 察 到 病 毒 粒 体 表 示5 万 倍 下 平 均 每 视 野 少 于1 个 病 毒 粒 体 表 示5 万 倍 下 平 均 每 视 野1 5 个 病 毒 粒 体 表 示5 万 倍 下 平 均 每 视 野6 10 个 病 毒 粒 体 表 示5 万 倍 下 平 均 每 视 野11 15 个 病 毒 粒 体 SV 表 示 球 形 病 毒 LV 表 示 线 形 病 毒 d 表 示 直 径 2 4 不 同 激 素 配 比 对 茎 尖 诱 导 分 化 及 增 殖 的 影 响 通 过 观 察 发 现 2 周 左 右 部 分 茎 尖 开 始 膨 大 成 愈 伤 组 织 4 周 后 部 分 组 织 开 始 分 化 成 不 定 芽 8 周 后 百 合 茎 尖 长 成 苗 不 同 激 素 配 比 对 卷 丹 百 合 茎 尖 诱 导 分 化 的 影 响 如 表 5 所 示 不 同 浓 度 的 6 BA NAA 配 比 对 9 5 1 种 子 Seed 第39 卷 第5 期 2020 年5 月 Vol 39 No 5 May 2020 表 5 不 同 处 理 间 诱 导 率 增 殖 率 及 增 殖 倍 数 的 差 异 培 养 基 编 号 诱 导 率 平 均 分 化 叶 片 数 片 萌 动 时 间 d 增 殖 率 增 殖 倍 数 1 73 33 4 86BCbc 2 90 10 50 5 75CDd 4 25 0 10Aa 2 60 00 3 78DEde 2 89 11 80 4 67Aa 4 88 0 46Aa 3 60 00 4 91DEde 2 44 11 60 3 82BCc 1 00 0 13Ee 4 66 67 2 73CDcd 2 70 12 60 3 85BCc 2 33 0 16Dc 5 66 67 3 63CDcd 2 80 13 70 4 71ABb 3 17 0 27Bb 6 66 67 2 13CDcd 2 00 13 50 5 01CDd 2 20 0 15Dc 7 73 33 5 13BCbc 2 55 11 40 4 24De 1 50 0 27Ed 8 66 67 4 10CDcd 1 60 14 60 5 12BCc 2 67 0 43CDc 9 53 33 5 00Ee 1 88 11 40 4 55De 1 00 0 13Ee 10 86 67 4 12Aa 2 14 12 20 3 89Ef 3 50 0 18Bb 11 80 00 4 55ABab 2 38 15 50 2 40CDd 2 40 0 26Dc 12 66 67 1 98CDcd 2 40 15 0Fg 1 00 0 05Ee 13 80 00 1 89ABab 2 83 11 60 5 86BCc 3 00 0 14BCb 14 86 67 3 98Aa 3 92 10 50 4 35CDd 1 60 0 26Ede 15 86 67 5 24Aa 6 31 10 50 4 28CDd 1 00 0 10Ee 表 6 不 同 激 素 组 合 对 外 植 体 茎 尖 诱 导 率 增 殖 率 及 增 殖 倍 数 的 影 响 项 目 水 平 茎 尖 诱 导 率 增 殖 率 增 殖 倍 数 处 理 6 BA 浓 度 A 0 1 mg L 1 64 44 7 70Bc 63 33 25 27Aa 3 38 2 08Aa 0 5 mg L 1 66 67 6 25ABbc 60 00 10 00Aa 2 57 0 53Aa 1 0 mg L 1 64 44 10 18Bc 53 33 11 55ABa 1 72 0 86Aa 1 5 mg L 1 77 78 5 18ABab 46 67 15 17Bb 2 30 1 25Aa 2 0 mg L 1 84 45 3 85Aa 23 33 5 77ABa 1 86 1 03Aa NAA 浓 度 B 0 1 mg L 1 76 00 7 60Aa 46 00 16 73Aab 2 92 1 06Aa 0 5 mg L 1 72 00 10 95Aa 62 00 13 04Aa 2 94 1 22Aa 1 0 mg L 1 66 67 12 47Aa 40 00 23 45Ab 1 24 0 54Ab 变 异 来 源 A 247 47 756 67 1 30 B 109 60 646 67 4 76 注 方 差 分 析 中 影 响 水 平 以 均 方 表 示 表 示 在0 05 水 平 上 显 著 下 同 茎 尖 诱 导 率 增 殖 率 和 增 殖 倍 数 的 影 响 达 到 显 著 水 平 诱 导 率 最 高 的 培 养 基 是 10 号 11 号 13 号 14 号 和 15 号 诱 导 率 在 80 00 86 67 之 间 平 均 分 化 叶 片 数 在 2 14 6 31 之 间 萌 动 时 间 10 15 d 增 殖 率 最 高 的 培 养 基 是 2 号 增 殖 率 达 80 增 殖 倍 数 最 高 的 培 养 基 是 1 号 2 号 增 殖 倍 数 分 别 为 4 25 倍 4 88 倍 方 差 分 析 结 果 表 6 表 明 激 素 浓 度 对 茎 尖 诱 导 率 增 殖 率 和 增 殖 倍 数 分 别 有 着 显 著 影 响 p 0 05 其 中 6 BA 浓 度 显 著 影 响 茎 尖 诱 导 率 NAA 浓 度 显 著 影 响 增 殖 倍 数 2 种 激 素 浓 度 均 显 著 影 响 增 殖 率 又 以 6 BA 浓 度 影 响 均 方 值 为 756 67 最 大 NAA 浓 度 影 响 均 方 值 为 646 67 次 之 由 表 6 还 可 知 培 养 基 中 6 BA 浓 度 较 高 时 有 利 于 提 高 茎 尖 诱 导 率 在 6 BA 浓 度 为 2 0mg L 1 时 茎 尖 诱 导 率 最 高 84 45 较 低 浓 度 的 6 BA 有 利 于 提 高 增 殖 率 在 6 BA 浓 度 为 0 1mg L 1 时 的 增 殖 率 最 高 63 33 而 6 BA 浓 度 对 增 殖 倍 数 无 影 响 培 养 基 中 NAA 浓 度 较 低 时 有 利 于 提 高 增 殖 率 和 增 殖 倍 数 在 NAA 浓 度 为 0 5mg L 1 时 增 殖 率 和 增 殖 倍 数 最 高 分 别 为 62 和 2 94 倍 而 NAA 浓 度 对 茎 尖 诱 导 率 无 影 响 综 合 表 5 和 表 6 的 结 果 认 为 卷 丹 百 合 的 最 适 诱 导 培 养 基 为 15 号 培 养 基 MS 6 BA2 0mg L 1 NAA1 0mg L 1 此 条 件 下 的 诱 导 率 达 86 67 接 种 10d 后 能 够 萌 动 8 周 后 的 平 均 分 化 叶 片 数 为 6 31 片 最 适 增 殖 培 养 基 为 2 号 培 养 基 MS 6 BA0 1 mg L 1 NAA0 5mg L 1 此 条 件 下 的 增 殖 率 增 殖 倍 数 分 别 达 80 4 88 倍 2 5 不 同 激 素 配 比 对 卷 丹 百 合 试 管 苗 生 根 结 鳞 茎 的 影 响 不 同 激 素 配 比 对 卷 丹 百 合 试 管 苗 生 根 结 鳞 茎 的 影 响 如 表 7 所 示 不 同 浓 度 的 NAA IBA 配 比 对 生 根 数 小 鳞 茎 增 殖 倍 数 的 影 响 达 到 显 著 水 平 卷 丹 百 合 在 9 种 激 素 配 比 条 件 下 都 能 生 根 生 根 率 都 在 70 以 上 其 中 23 号 培 养 基 中 的 试 管 苗 生 根 数 最 多 为 12 条 22 号 23 号 培 养 基 中 的 试 管 苗 小 鳞 茎 增 殖 倍 数 为 最 高 增 殖 倍 数 在 6 0 6 2 之 间 表 7 不 同 处 理 间 生 根 数 及 小 鳞 茎 增 殖 倍 数 的 差 异 培 养 基 号 生 根 率 生 根 数 条 小 鳞 茎 增 殖 倍 数 16 100 2 2 0 2De 1 5 0 1Dd 17 70 2 0 0 1De 1 4 0 1Dd 18 70 2 4 0 1Dde 1 8 0 1CDcd 19 80 3 0 0 3Dd 1 5 0 1Dd 20 100 3 1 0 3Dd 2 1 0 2Cc 21 100 6 3 0 3Cc 4 2 0 1Bb 22 80 5 8 0 3Cc 6 2 0 4Aa 23 100 12 0 0 6Aa 6 0 0 3Aa 24 100 10 3 1 0Bb 4 2 0 2Bb 0 6 1 应 用 技 术 田 山 君 等 卷 丹 百 合 脱 毒 与 快 繁 技 术 研 究 图 版 方 差 分 析 结 果 表 8 表 明 NAA 浓 度 对 卷 丹 百 合 试 管 苗 的 生 根 数 小 鳞 茎 增 殖 倍 数 的 影 响 达 到 显 著 水 平 p 0 05 而 IBA 浓 度 对 生 根 结 鳞 茎 影 响 不 显 著 培 养 基 中 NAA 浓 度 越 高 越 有 利 于 卷 丹 百 合 生 根 结 鳞 茎 当 培 养 基 中 NAA 浓 度 为 1 0mg L 1 时 试 管 苗 生 根 数 达 到 9 4 条 小 鳞 茎 增 殖 倍 数 为 5 5 倍 表 8 不 同 激 素 组 合 对 试 管 苗 生 根 数 小 鳞 茎 增 殖 倍 数 的 影 响 项 目 水 平 生 根 数 条 小 鳞 茎 增 殖 倍 数 处 理 NAA 浓 度 B 0 1 mg L 1 2 2 0 2Ab 1 6 0 2Ab 0 5 mg L 1 4 1 1 9Ab 2 6 1 4Ab 1 0 mg L 1 9 4 3 2Aa 5 5 1 1Aa IBA 浓 度 C 0 1 mg L 1 3 7 1 9Aa 3 1 2 7Aa 0 5 mg L 1 5 7 5 5Aa 3 2 2 5Aa 1 0 mg L 1 6 3 3 9Aa 3 4 1 4Aa 变 异 来 源 B 41 1 12 2 C 5 9 0 1 综 合 表 7 和 表 8 的 结 果 来 看 卷 丹 百 合 最 佳 的 生 根 结 鳞 茎 培 养 基 是 23 号 MS NAA1 0mg L 1 IBA0 5 mg L 1 小 鳞 茎 的 增 殖 倍 数 为 6 倍 见 图 版 e 图 版 f 生 根 率 达 100 见 图 版 g 平 均 根 条 数 可 达 12 条 3 讨 论 与 结 论 3 1 讨 论 3 1 1 卷 丹 百 合 的 脱 毒 食 用 百 合 卷 丹 由 于 需 求 量 增 加 长 期 使 用 无 性 繁 殖 导 致 病 毒 感 染 严 重 交 替 热 处 理 可 使 百 合 病 毒 受 到 抑 制 或 钝 化 生 长 点 快 速 伸 长 拉 大 病 毒 到 达 茎 尖 的 距 离 且 外 植 体 不 易 受 到 伤 害 既 方 便 了 显 微 操 作 又 提 高 了 成 活 率 因 此 常 温 和 高 温 交 替 热 处 理 结 合 茎 尖 脱 毒 是 有 效 的 脱 毒 方 法 9 10 茎 尖 大 小 决 定 了 无 病 毒 率 茎 尖 越 小 无 病 毒 率 越 高 但 却 存 在 成 活 率 较 低 生 长 缓 慢 等 弊 端 降 低 了 扩 繁 的 效 率 今 后 的 研 究 中 要 探 讨 既 能 有 效 脱 除 病 毒 又 有 较 高 的 成 活 率 和 繁 殖 效 率 的 方 法 可 以 采 用 不 同 的 外 植 体 诱 导 成 再 生 小 鳞 茎 后 再 进 行 茎 尖 脱 毒 这 样 可 以 加 大 脱 毒 苗 的 成 活 率 及 繁 殖 系 数 3 1 2 卷 丹 百 合 外 植 体 的 选 择 百 合 组 织 培 养 过 程 可 以 选 择 鳞 片 叶 片 茎 尖 茎 段 或 花 器 官 材 料 的 部 位 选 择 外 植 体 关 键 要 看 其 取 材 1 6 1 种 子 Seed 第39 卷 第5 期 2020 年5 月 Vol 39 No 5 May 2020 的 方 便 性 材 料 数 量 材 料 部 位 生 理 状 态 发 育 阶 段 及 取 材 时 间 是 否 有 利 于 在 初 代 培 养 中 愈 伤 组 织 或 不 定 芽 的 诱 导 外 植 体 的 选 择 是 初 代 培 养 的 关 键 因 素 11 13 通 常 说 来 鳞 片 就 其 方 便 性 及 数 量 是 优 于 其 它 外 植 体 的 14 16 本 试 验 中 卷 丹 百 合 的 茎 芽 茎 段 叶 片 和 鳞 片 作 为 外 植 体 均 可 以 成 活 但 外 层 鳞 片 污 染 率 高 而 内 层 鳞 片 和 茎 芽 由 于 有 鳞 片 和 叶 片 包 裹 不 易 被 污 染 灭 菌 效 果 较 好 且 成 活 率 和 不 定 芽 分 化 数 较 高 可 作 为 卷 丹 百 合 组 培 快 繁 外 植 体 选 择 但 作 为 外 植 体 鳞 片 相 对 茎 芽 数 量 较 多 且 容 易 诱 导 成 功 分 化 不 定 芽 系 数 较 高 因 此 在 种 球 不 多 需 大 量 扩 繁 时 内 层 鳞 片 则 是 卷 丹 百 合 组 培 快 繁 外 植 体 的 最 佳 选 择 非 常 符 合 工 厂 化 生 产 的 需 要 3 1 3 植 物 激 素 对 卷 丹 百 合 诱 导 增 殖 及 生 根 结 鳞 茎 的 影 响 6 BA 与 NAA 的 浓 度 水 平 是 百 合 不 定 芽 能 否 产 生 和 增 殖 的 主 要 因 素 不 同 品 种 的 百 合 在 增 殖 时 对 激 素 浓 度 的 要 求 有 较 大 差 异 17 19 因 此 在 组 织 培 养 的 过 程 中 要 根 据 不 同 的 品 种 进 行 激 素 浓 度 的 配 比 本 研 究 中 不 加 6 BA 只 加 NAA 和 IBA 配 比 的 生 根 培 养 基 MS NAA1 0mg L 1 IBA0 5mg L 1 也 适 合 卷 丹 百 合 试 管 苗 的 增 殖 和 继 代 培 养 在 生 根 的 同 时 能 结 出 小 鳞 茎 且 小 鳞 茎 增 殖 系 数 较 高 生 根 率 可 达 100 小 鳞 茎 的 增 殖 倍 数 为 6 倍 可 以 同 时 作 为 增 殖 和 生 根 培 养 的 最 优 培 养 基 3 2 结 论 在 卷 丹 百 合 的 组 培 快 繁 过 程 中 宜 选 择 内 层 鳞 片 为 外 植 体 外 植 体 用 75 的 乙 醇 浸 泡 30 s 后 再 用 10 次 氯 酸 钠 消 毒 20min 以 26 和 45 交 替 热 处 理 1 个 月 后 剥 取 0 3 0 8mm 茎 尖 的 脱 毒 效 果 较 好 最 适 诱 导 培 养 基 为 MS 6 BA2 0mg L 1 NAA1 0 mg L 1 最 适 增 殖 培 养 基 为 MS 6 BA0 1mg L 1 NAA0 5mg L 1 最 适 生 根 结 鳞 茎 培 养 基 为 MS NAA1 0mg L 1 IBA0 5mg L 1 参 考 文 献 1 赵 银 彦 李 正 录 蔡 林 海 中 国 食 用 百 合 生 产 现 状 与 发 展 思 路 J 甘 肃 科 技 2018 34 08 1 2 52 2 齐 心 程 英 魁 张 悦 多 倍 体 食 用 百 合 研 究 进 展 J 吉 林 蔬 菜 2015 10 32 33 3 夏 金 英 叶 发 宝 食 用 百 合 产 业 发 展 的 思 考 与 建 议 J 内 蒙 古 农 业 科 技 2013 02 23 4 张 伟 贾 桂 霞 LA 百 合 品 种 Eyeliner 组 培 繁 殖 技 术 研 究 J 江 苏 农 业 科 学 2010 06 32 34 5 杜 帅 李 丹 杜 喜 春 等 绿 花 百 合 组 培 快 繁 技 术 研 究 J 现 代 园 艺 2014 08 12 13 6 裴 怀 弟 林 玉 红 李 淑 洁 等 兰 州 百 合 组 培 小 鳞 茎 诱 导 技 术 研 究 J 甘 肃 农 业 科 技 2019 07 29 32 7 张 彦 妮 李 文 英 激 素 和 光 照 条 件 对 百 合 普 瑞 头 鳞 片 和 叶 片 的 诱 导 培 养 J 江 苏 农 业 科 学 2012 40 05 32 33 8 崔 瑞 峰 张 丽 霞 韩 晓 红 不 同 激 素 配 比 对 百 合 鳞 片 愈 伤 组 织 诱 导 的 影 响 J 黑 龙 江 农 业 科 学 2014 09 8 9 9 赵 霞