巴西人参组培快繁体系的建立.pdf

doi 10 16473 j cnki xblykx1972 2021 01 020 巴西人参组培快繁体系的建立 蒋华 广西壮族自治区国有维都林场雅江分场 广西 来宾546100 摘要 以巴西人参带芽茎段为外植体 研究培养基 植物生长调节剂 移栽基质等对巴西人参组培快繁的影响 结果表明 最佳的初代诱导培养基为WPM 6 BA 0 4 mg L NAA 0 4 mg L 初代芽诱导率达90 65 每个外 植体平均萌芽数为2 90个 平均芽高2 70 cm 最佳的继代增殖培养基为WPM 6 BA 2 0 mg L NAA 0 2 mg L 采用平铺的方式接种 培养25 d增殖系数可达5 21 最佳的生根培养基为1 2WPM 6 BA 0 3 mg L NAA 0 5 mg L PP333 200 培养9 85 d即可生根 生根率高达98 85 株平均生根数为18 87条 选择椰糠 谷壳 4 1 v v 作为移栽基质 移栽成活率最高 可达98 67 本研究建立的组培快繁技术体系可适用于巴西人 参工厂化育苗生产 为巴西人参种苗快速繁殖提供技术保障 关键词 巴西人参 培养基 植物生长调节剂 组织培养 快速繁殖 中图分类号 S 723 1 文献标识码 A 文章编号 1672 8246 2021 01 0138 07 Rapid Propagation System of Pfaffia paniculate Tissue Culture JIANG Hua Guangxi Weidu State Forest Farm Yajiang Branch Laibin Guangxi 546100 P R China Abstract Using stem with buds as explants the effects of culture medium plant growth regulator and transplanting matrix on the tissue culture of Pfaffia paniculate was studied The results showed that the optimal medium for initial induction was WPM 6 BA 0 4 mg L NAA 0 4 mg L the induction rate of initial buds was 90 65 the average number of buds was 2 90 and the average height of buds was 2 70 cm The optimal subculture culture medium was WPM 6 BA 2 0 mg L NAA 0 2 mg L and the proliferation coefficient of 25 d was 5 21 The best rooting medium was 1 2WPM 6 BA 0 3 mg L NAA 0 5 mg L PP333 200 mg L the average time of root formation was 9 85 days the rooting rate of buds was 98 85 and the average number of rooting was 18 87 Coconut bran chaff 4 1 v v was selected as transplanting substrate the transplanting survival rate was the highest up to 98 67 The technology system of tissue culture and rapid propagation established can be applied to the industrial seedling production of P paniculate which provides technical guarantee for rapid propagation of P paniculate seedlings Key words Pfaffia paniculate culture medium plant growth regulator tissue culture rapid propagation 巴西人参 Pfaffia paniculate 又称珐菲亚 为苋科 Amaranthaceae 无柱苋属 Pfaffia Mart 多年生草本植物 1 主要分布于南美洲巴 西等国的热带雨林地区 生长在阳光较为充足的地 方 目前已在广西 四川 浙江等地引种成功 2 其根可入药 富含多种矿物质 氨基酸 维生素和 皂苷成分 有降血糖 抗肿瘤 缓解疲劳 增强免 疫力和治疗风湿性关节炎等功效 3 4 因其疗效广 泛 国内外对于巴西人参的产业化开发备受关注 研制的多种药食两用的产品已投放市场 5 6 广受 第50卷 1期 2021年2月 西 部 林 业 科 学 Journal of West China Forestry Science Vol 50 No 1 Feb 2021 收稿日期 2020 08 10 基金项目 广西科技计划项目 桂科AD18294019 桂科AD18281083 作者简介 蒋华 1986 男 工程师 主要从事林业相关研究 E mail 498773562 qq com 欢迎 经济效益与市场前景极为广阔 然而 由于 国际市场的超强度开发 巴西人参野生资源日益减 少 已很难满足市场需求 此外 巴西人参结实较 少 种子发芽率极低 严重限制其开发进程 因 此 解决资源紧缺问题已成为巴西人参研究的主要 目标和首要任务 7 药用植物组织培养与快速繁殖 不仅能够克服 种子繁殖中存在的诸多问题 还能够改善常规繁殖 速度慢 繁殖率低的缺点 且不受季节 气候等因 素的影响 具有速度快 质量高 便于集约管理的 优点 可在较短时间内获得大量遗传性状一致的植 株 供大规模规范化种植 目前 国内外对巴西人 参的研究多集中在化学及药理作用方面 有关巴西 人参种子萌发 苗木生产和栽培等繁殖培育方面的 报道相对较少 严重制约了其规模化生产 8 国 内外在组织培养育苗方面的研究甚少 仅仅研究了 茎段类型和容器大小 9 N和P浓度 10 蔗 糖 11 CO 12 13 等不同碳源等对巴西人参离体繁育 的影响 多数直接选用MS作为培养基 未见对组 织培养中各因素系统筛选的报道 国内有关研究 中 凌征柱等 14 和刘园 15 研究所得配方育苗周期 相对较长 增殖系数较低 仅为3 22 3 92 许 鸿源等 16 加灵发素进行组培虽然可提高育苗效率 但灵发素为其实验室制备得来 并非市售药品 药 品难得 成本较高 并不适于大规模组培工厂化育 苗 因此 本研究以巴西人参茎段作为外植体材 料 通过对初代诱导培养 继代增殖培养 生根培 养和炼苗移栽等技术环节的影响因素进行系统研 究 以期克服现有技术的不足 建立一套育苗周期 短 成活率高 苗木质量好 成本较低的适于工厂 化生产的巴西人参组培快繁技术体系 为开发和利 用巴西人参以及丰富我国药用植物资源种类 缓解 国内外市场种苗稀缺的状况提供技术支撑 1 材料与方法 1 1 试验材料 以巴西人参带芽茎段为外植体材料 采自广西 壮族自治区国有维都林场雅江分场苗圃 1 2 外植体消毒与初代芽诱导 于3 5月连续3个晴天的上午 剪取健壮巴 西人参植株带腋芽茎段 去除叶片 于0 5 洗洁 精溶液中浸泡5 min 用自来水冲洗2 3 h 置于 超净工作台上切成1 5 2 5 cm的茎段 于75 酒精中浸泡30 s后转入0 1 氯化汞溶液中浸泡10 min 无菌水冲洗5 6遍 将灭菌处理过的外植体 分别接种在MS WPM B5 N6 Nitsch和White 6种培养基上 附加预试验筛选的较优的植物生长 调节剂组合 6 BA 0 4 mg L和NAA 0 4 mg L 进行初代芽诱导培养 每个处理20瓶 每瓶接种 1个茎段 重复3次 培养25 d后统计初代芽诱导 率 每一茎段平均萌芽个数及芽高 1 3 继代增殖培养 选择生长较好且长势一致的初代芽 以1 2实 验筛选的最佳培养基作为基本培养基 分别添加不 同浓度和配比的6 BA 0 1 2 mg L 2 IP 0 1 2 mg L IBA 0 0 2 0 4 mg L 和 NAA 0 0 2 0 4 mg L 进行增殖培养 上述 试验采用L9 34 设计正交试验 从中选取最优 组合 然后以最优组合为培养基配方 分别采用直 插 单芽直立插入 和平铺 单芽剪取节的位置 水平接种 两种方式接种 分别培养不同日期后 观察统计继代芽增殖系数 每个处理10瓶 每瓶 接种3个芽 重复3次 1 4 生根培养 剪取高度 2 cm的芽苗 以1 2WPM 2 3WPM WPM为基本培养基 附加不同浓度的生长激素6 BA 0 0 3 0 6 mg L NAA 0 1 0 5 1 0 mg L 和多效唑PP333 0 200 400 mg L 进行生根培养 上述试验采用L9 34 正交设计进行试验 每个处理 10瓶 每瓶接种3个芽 重复3次 统计生根时间 培养30 d后生根率 生根条数和根系状况 1 5 炼苗移栽 将根长约1 cm的组培苗 转移到室外自然光下 炼苗5 d 然后用清水洗净根部培养基 移栽至经过 0 1 高锰酸钾 KMnO4 消毒过的基质中 移栽基 质为 1 河沙 2 红心土 3 椰糠 谷壳 4 1 v v 4 营养土 蛭石 2 1 v v 每种基质移栽50株 重复3次 30 d后统计成活率 1 6 培养基配制消毒及培养条件 培养基配制消毒 以上各培养基均添加蔗糖 30 g L 琼脂4 g L pH 5 8 6 2 配制分装后在 121 下高压蒸汽灭菌20 min 培养条件 温度 25 3 光照时间12 14 h d 光照强度1 500 2 500 lx 1 7 数据处理 诱导率 萌芽外植体数 接种外植体 数 100 931 第1期 蒋华 巴西人参组培快繁体系的建立 增殖系数 芽生长到可供切割芽数 接种时单 芽总数 生根率 生根芽数 接种总芽数 100 成活率 成活苗数 移栽苗数 100 采用EXCEL 2016对试验数据进行常规统计和 作图 SPSS 19 0进行方差分析和多重比较 邓肯 氏新复极差法 显著性水平均设定为 0 05 2 结果与分析 2 1 初代诱导培养 巴西人参带芽茎段外植体 图1A 灭菌处理 后进行初代诱导培养 6种不同基本培养基对初代 芽诱导的影响见表1 可以看出 不同培养基对巴 西人参初代诱导效果差异显著 在诱导率方面 效 果较好的是WPM和MS培养基 初代芽诱导率分 别为90 65 和82 61 两者间差异不显著 最 差的是N6培养基 初代芽诱导率仅为13 56 在萌芽数方面 WPM培养基显著多于其他5种培 养基 其他5种培养基间差异不明显 在芽高方 面 效果最好的是WPM培养基 较差的是N6 Nitsh和White培养基 因此 以WPM作为巴西人 参基本培养基进行初代诱导培养效果最佳 图 1B 诱导率达90 65 平均萌芽数为2 90个 平均芽高2 70 cm 图1 巴西人参组织培养与快速繁殖 注 A为灭菌外植体 B为初代诱导培养 C为继代增殖培养 D为生根培养 E为生根培养 F为移栽成活组培苗 Fig 1 The tissue culture and rapid propagation of P paniculate 表1 基本培养基对初代芽诱导的影响 Tab 1 Effect of basic medium on initial bud induction 处理编号基本培养基诱导率 平均萌芽数 个平均芽高 cm A1 MS 82 61 7 52a 1 70 0 23b 1 23 0 09b A2 WPM 90 65 4 71a 2 90 0 32a 2 70 0 15a A3 B5 47 25 4 58b 1 43 0 24b 1 37 0 12b A4 N6 13 56 2 42c 1 17 0 03b 0 47 0 15c A5 Nitsh 41 64 3 53b 1 13 0 09b 0 40 0 06c A6 White 23 69 5 31c 1 63 0 09b 0 67 0 15c 注 同一列不同字母显示差异显著 P 0 05 下同 2 2 继代增殖培养 2 2 1 植物生长调节剂对继代芽增殖的影响 选择高约1 5 cm的初代芽 直立插入到9种 不同的继代增殖培养基上 基本培养基为WPM 培养25 d观察增殖效果 表2 由表2可知 不 同培养基增殖系数和芽高差异显著 其中B7增殖 系数最高 为4 58 B3芽高最高 为2 97 cm 对 正交试验结果进行极差分析 表3 结果显示 在增殖系数方面 各因素的极差分别为 R6 BA 1 53 R2 IP 0 24 RIBA 0 40 RNAA 0 42 显示 各因素影响作用的主次顺序为 6 BA NAA IBA 2 IP 增殖系数最优的组合应为 6 BA 2 0 mg L 2 IP 0 mg L IBA 0 mg L NAA 0 2 mg L 在芽高方面 各因素的极差分别为R6 BA 0 06 R2 IP 0 65 RIBA 0 50 RNAA 0 50 即因素影响 作用的主次顺序为 2 IP IBA或NAA 6 BA 芽高最优的组合应为6 BA 2 0 mg L 2 IP 0 mg L IBA 0 4 mg L NAA 0 mg L 综合分析 继代增 殖培养基应该以增殖系数为主要参考指标 芽高为 次要指标 最终优选的巴西人参增殖培养的最佳生 长调节剂处理为6 BA 2 0 mg L NAA 0 2 mg L 采用此组合进行巴西人参继代增殖培养 增殖系数 高 苗木生长健壮 图1C 041西 部 林 业 科 学 2021年 表2 植物生长调节剂对继代芽增殖的影响 Tab 2 Effects of plant growth regulators on subculture bud multiplication 处理编号植物生长调节剂 mg L 1 6 BA 2 IP IBA NAA增殖系数平均芽高 cm B1 0 2 0 0 4 2 75 0 38cd 1 63 0 30b B2 0 1 0 2 0 2 2 49 0 15d 1 43 0 09b B3 0 0 0 4 0 2 65 0 09cd 2 97 0 58a B4 1 2 0 2 0 3 40 0 21bc 1 77 0 09b B5 1 1 0 4 0 4 3 58 0 46b 2 10 0 21b B6 1 0 0 0 2 4 25 0 14ab 2 00 0 15b B7 2 2 0 4 0 2 4 58 0 36a 1 83 0 07b B8 2 1 0 0 4 00 0 00ab 2 03 0 39b B9 2 0 0 2 0 4 3 90 0 16ab 2 20 0 15ab 表3 植物生长调节剂对继代芽增殖影响的极差分析 Tab 3 Range analysis of the effect of plant growth regulators on the proliferation of subculture buds 增殖效果指标6 BA 2 IP IBA NAA 增殖 系数 K1 2 63 3 58 3 67 3 41 K2 3 74 3 36 3 26 3 78 K3 4 16 3 60 3 60 3 35 R 1 53 0 24 0 40 0 42 平均 芽高 cm K1 2 01 1 74 1 89 1 98 K2 1 96 1 85 1 80 1 75 K3 2 02 2 39 2 30 2 26 R 0 06 0 65 0 50 0 50 2 2 2 接种方式对继代芽增殖的影响 分别采用单芽直插和单芽平铺2种接种方式 培养15 30和45 d后观察继代芽生长情况 结果 见图2 图2 不同接种方式对继代芽增殖的影响 Fig 2 Effects of different inoculation mode on the proliferation of subculture buds 由图2可知 在相同培养时间时 采用平铺接 种的方式其增殖系数明显高于直插接种 采用直插 方式接种 随着生长时间的延长增殖系数逐渐升 高 培养35 d增殖系数最高为5 16 显著高于采 用直插方式接种的其他培养时间 采用平铺方式接 种 随着培养时间的增加 增殖系数逐渐增加 25 d增殖系数达5 21 之后增殖系数升高不显著 因 此 综合考虑增殖系数和成本 巴西人参适宜继代 增殖的培养方式为以单芽平铺的方式接种 选择 25 d作为继代周期最佳 2 3 生根培养 采用正交试验研究不同基本培养基及植物生长 调节剂配比对巴西人参生根的影响 结果见表4 不同的培养基和植物生长调节剂配比对巴西人参生 根率 生根数和生根时间的影响差异显著 通过对 正交试验结果进行极差分析 表5 可知 在生根 率方面 各因素的极差分别为R基本培养基 9 12 R6 BA 38 6 RNAA 21 52 RPP333 2 36 即因素 影响作用的主次顺序为6 BA NAA 基本培养 基 PP333 巴西人参生根率最高的培养基组合是 1 2WPM 6 BA 0 3 mg L NAA 0 5 mg L PP333 200 mg L 在根条数方面 各因素的极差分别为 R基本培养基 1 49 R6 BA 8 63 RNAA 1 96 RPP333 1 81 即因素影响作用的主次顺序为6 BA NAA 基本培养基 PP333 巴西人参生根条数最 多的培养基组合是1 2WPM 6 BA 0 3 mg L NAA 0 1 mg L PP333 200 mg L 在生根时间方面 各 因素的极差分别为R基本培养基 3 66 R6 BA 3 28 RNAA 2 34 RPP333 0 83 即因素影响作用的主次 顺序为基本培养基 6 BA NAA PP333 巴西人 参生根时间最短的培养及组合是1 2WPM 6 BA 0 3 mg L NAA 0 5 mg L PP333 200 mg L 其中 用生根率和生根条数这两个指标优选的培养基组合 一致 而这两个因素也是评价生根效果最重要的因 素 因此 确定巴西人参生根诱导最佳的培养基组 合为1 2WPM 6 BA 0 3 mg L NAA 0 5 mg L PP333 200 mg L 采用此种培养基生根率高 根条 数多 根系状况佳 生根效果见图1D和图1E 141 第1期 蒋华 巴西人参组培快繁体系的建立 表4 培养基配比对生根的影响 Tab 4 Effects of medium combinations on rooting 编号基本培养基6 BA mg L 1 NAA mg L 1 PP333 mg L 1生根率 生根数 条生根时间 d C1 1 2WPM 0 0 1 0 78 19 1 17c 16 69 0 46b 13 96 0 79b C2 1 2WPM 0 3 0 5 200 98 85 1 15a 18 87 1 33a 9 85 0 34d C3 1 2WPM 0 6 1 0 400 38 65 1 57g 7 67 0 45be 13 97 0 19b C4 2 3WPM 0 0 5 400 83 06 1 57b 15 63 0 18c 12 89 0 35bc C5 2 3WPM 0 3 1 0 0 69 26 0 63d 15 22 0 16c 11 55 0 70bd C6 2 3WPM 0 6 0 1 200 46 24 1 24f 10 36 0 05d 16 54 0 28a C7 WPM 0 1 0 200 58 21 0 27e 15 05 0 35c 14 67 0 22b C8 WPM 0 3 0 1 400 81 35 1 43bc 16 76 0 56b 16 68 0 28a C9 WPM 0 6 0 5 0 48 76 2 23f 6 94 0 29e 17 42 1 22a 表5 培养基配比对巴西人参生根影响的极差分析 Tab 5 Range analysis of effects of different medium combinations on rooting of P paniculate 生根 效果指标 基本培 养基6 BA NAA PP333 生根率 K1 71 90 73 15 68 59 65 4 K2 66 19 83 15 76 89 67 77 K3 62 77 44 55 55 37 67 69 R 9 12 38 6 21 52 2 36 根条数 条 K1 14 41 15 79 14 60 12 95 K2 13 74 16 95 13 81 14 76 K3 12 92 8 32 12 65 13 35 R 1 49 8 63 1 96 1 81 生根 时间 d K1 12 59 13 84 15 73 14 31 K2 13 66 12 69 13 39 13 69 K3 16 26 15 98 13 40 14 51 R 3 66 3 28 2 34 0 83 2 4 炼苗移栽 将根系状况良好的巴西人参组培苗经过炼苗 移栽至4种不同基质中 移栽30 d后统计成活率 见图3 图3 不同基质对移栽成活率的影响 Fig 3 Effect of different substrates on the survival rate of transplanting 由图3可知 不同基质对移栽成活率影响差异 显著 其中椰糠 谷壳 4 1移栽成活率最高 为98 67 生长状况良好 图1F 其次是营养 土 蛭石 2 1 成活率为91 33 但二者差别 不大 最差的是河沙 成活率为68 00 因此 综合成本和成活率 移栽巴西人参最好选择椰糠 谷壳 4 1作为移栽基质 3 讨论与结论 基本培养基直接关系植物的生长和发育 17 不同植物在组织培养的不同阶段所需的营养物质不 同 培养基作为营养来源 可为植物的生长提供充 足的营养 但不同种类的培养基 营养成分差异较 大 MS培养基是应用范围最广的 各种元素齐全 的高盐离子浓度培养基 尤其是NH4 和NO3 的浓 度比较高 但MS也会因其高盐离子浓度对某些植 物的生长产生一定的抑制作用 18 WPM因其含有 较低浓度的无机盐离子 广泛用于植物组培快繁 白宇清等 19 研究毛锦杜鹃 Rhododendron moumainense 茎段组织培养时发现WPM是最佳的 基本培养基 效果明显好于MS培养基 叶雯 等 20 研究火焰南天竹 Nandina domestica Fire power 茎段组织培养优化时发现以WPM作为基 本培养基进行诱导和增殖效果最佳 1 2WPM作为 基本培养基进行生根诱导生根率达95 倪钟 等 21 对北京地区优良梅花 Armeniaca mume 进 行茎段启动培养研究时也发现WPM培养基明显优 于MS培养基 因此 为给植物生长提供适宜的营 养供给 对培养基种类的筛选非常必要 筛选合适 的培养基是植物组培快繁成功的第一步 本研究也 发现NH4 和NO3 浓度较低的WPM培养基更适合 241西 部 林 业 科 学 2021年 巴西人参初代芽诱导和继代增殖 更低的NH4 和 NO3 浓度的1 2WPM培养基更有助于巴西人参根 的诱导和生长 基本培养基配合适宜的植物生长调节剂 才能 更好地诱导细胞分裂 芽和根的分化等 植物生长 调节剂是影响细胞分裂和组织分化的重要因素 能 够在极低浓度下调节植物的生长发育 植物种类不 同 细胞分裂和组织分化所需的植物生长调节剂的 种类和浓度不同 22 针对培养材料的种类 来源 和生长期的不同 筛选植物生长调节剂的种类和浓 度 既是组培工作的重点也是难点 细胞分裂素和 生长素是常用的植物生长调节剂 23 二者之间的 比例对器官再生途径起着关键的调控作用 24 凌 征柱等 14 研究巴西人参组培时继代培养基选用MS 6 BA 1 2 mg L NAA 0 2 mg L时40 d为一个增 殖周期 增殖系数最高 为3 92 生根培养基选 用1 2 MS NAA 1 0 mg L时15 d获得生根植株 刘园 15 研究巴西人参组织培养技术时提出继代培 养基选用MS 6 BA 1 2 1 5 mg L NAA 0 2 mg L 时增殖系数最高 为3 22 3 92 生根培养基选 用1 2MS NAA 1 0 mg L或1 2MS PP333 0 2 mg L时 生根率在90 以上 Flores等 25 研究BA 和TDZ对巴西人参生长的影响时认为以茎节数量 作为衡量指标不添加细胞分裂素的MS更适合巴西 人参的生长 Nicoloso等 26 采用不添加植物生长调 节剂的MS培养基 40 d可发育成完整植株 移栽 成活率为95 本研究通过正交试验更加简便高 效地筛选了继代培养基 WPM 6 BA 2 0 mg L NAA 0 2 mg L 和生根培养基 1 2WPM 6 BA 0 3 mg L NAA 0 5 mg L PP333 200 mg L 25 d 作为继代周期 增殖系数可达5 21以上 平均组 培9 85 d即可生根 生根率高达98 85 相对来 说更加适合巴西人参组培快繁 接种方式也是影响苗木再生的关键之一 付传 明等 27 研究发现采用水平接种的方式可诱导出更 多的根系 刘海龙等 28 研究发现接种方式是影响 澳洲茶树 Melaleuca alternifolia 增殖系数的最主 要因素 将1 cm以上单芽剪碎平铺在培养基上增 殖效果最佳 本研究采用平铺方式接种 在相同的 培养基和培养时间内 增殖系数显著提高 这可能 是因为水平的接种方式在一定程度上增加了材料与 培养基的接触面积 更有利于接种材料对营养物质 的吸收 16 移栽是植物组织培养的最后一个环节 尽管移 栽过程和方法比较简单 但移栽基质的选择至关重 要 不经筛选盲目地移栽会导致组培苗大量死亡 以致前功尽弃 29 在适宜的环境条件下 移栽基 质的透气性和含水量对诱发新根和移栽成活率影响 较大 30 在移栽时选择不同配比的基质 使得基 质更加透气 保肥 保水 可以得到较高的移栽成 活率 31 本研究发现 河沙作为移栽基质相对通 气透水 但保肥力差 红心土透气性相对较差 两 者移栽成活率低 而采用通气 透水性和保肥力好 的移栽基质 尤其椰糠 谷壳 4 1 巴西人参 的移栽成活率较高 可达98 67 综上所述 巴西人参的最佳初代诱导培养基 为 WPM 6 BA 0 4 mg L NAA 0 4 mg L 诱导 率达90 65 平均萌芽数为2 90个 平均芽高 2 70 cm 最佳的继代增殖培养基为WPM 6 BA 2 0 mg L NAA 0 2 mg L 采用平铺的方式接种 培养25 d增殖系数可达5 21 最佳的生根培养基 为1 2WPM 6 BA 0 3 mg L NAA 0 5 mg L PP333 200 mg L 平均9 85 d即可生根 生根率 高达98 85 平均生根数为18 87条 移栽基质 选择椰糠 谷壳 4 1 v v 移栽成活率最高 可达98 67 建立的组培快繁技术体系可适用 于巴西人参工厂化育苗生产 为巴西人参快速繁 殖 缓解种苗短缺的市场需求提供了技术保障 参考文献 1 陈路 刘远俊 马小军 等 巴西人参化学成分和药 理活性研究进展 J 生物资源 2017 39 1 10 16 2 高辉 巴西人参的化学成份研究 D 济南 山东大 学 2007 3 Almeida I V D sman E Mattge G I et al In vivo anti mutagenic activity of the medicinal plants Pfaffia glomerata Brazilian ginseng and Ginkgo biloba J Genetics and Molecu lar Research 2017 16 3 1 11 4 卞庆亚 罗崇念 马小军 国外对法菲西研究进展 J 中草药 2002 33 5 附1 附2 5 Mendes F R Carlini E A Brazilian plants as possible adaptogens An ethnopharmacological surve of books edited in Brazil J Journal of Ethnopharmacology 2007 109 3 493 500 6 Neto A G Costa JML C Belati C C et al Analgesic and anti inflammatory activity of a crude root extract of Pfaffia glomerata Spreng Pedersen J Journal of Thnopharmacolo gy 2005 96 1 2 87 91 341 第1期 蒋华 巴西人参组培快繁体系的建立 7 赵维合 多效唑对珐菲亚生长发育及活性成分的影 响 D 南宁 广西大学 2007 8 Oliveira D V D Izulmc Rita Imaculada Santos Martins I S et al Cryopreservation of shoot tips of Brazilian Ginseng Pfaffia glomerata Spreng Pedersen by vitrification J Jour nal of Agricultural Science 2019 11 11 146 155 9 Nicoloso F T Erig A C Effect of type of nodal segment and size of vessel on growth of Pfaffian glomerata in vitro plants J Ci enc agrotec Lavras Edi o Especial 2002 10 1499 1506 10 Russowski D Nicoloso F T Nitrogen and phosphorus on growth of brazilian ginseng Pfaffia glomerata Spreng Ped ersen in vitro cultured plants J Ci encia Rural 2003 33 1 57 63 11 Maldaner J Teixeira N F Dos S E S et al Sucrose and nitrogen on in vitro multiplication of Pffafia glomerata Spreng Pedersen J Ci encia Rural 2006 36 4 1201 1206 12 Saldanha C W Otoni C G Notini M M et al A CO2 enriched atmosphere improves in vitro growthof Brazilian ginseng Pfaffia glomerata Spreng Pedersen J In Vitro Cell Dev Biol Plant 2013 49 4 433 444 13 Vasconcelos J M Saldanha C W Dias L L C et al In vitro propagation of Brazilian ginseng Pfaffia glomerata Spreng Pedersen as affected by carbon sources J In Vitro Cell Dev Biol Plant 2014 50 6 746 751 14 凌征柱 刘园 马小军 等 珐菲亚的组织培养快速 繁殖研究 J 种子 2006 25 10 23 29 15 刘园 珐菲亚的组织培养技术研究 D 南宁 广 西大学 2007 16 许鸿源 解云英 梁琼月 等 灵发素 LFS 直接诱 导建成巴西人参再生植株的研究 J 种子 2013 32 2 69 71 17 何芳兰 高山杜鹃组织培养关键技术研究 D 兰 州 甘肃农业大学 2006 18 李玲莉 柔枝松和红锥的组织培养研究 D 北京 北京林业大学 2010 19 白宇清 王定跃 谢丽娟 毛棉杜鹃茎段组织培养 技术的研究 J 北方园艺 2020 8 66 73 20 叶雯 袁超群 秦伟 等 火焰南天竹茎段离体培养 再生体系的优化 J 浙江农林大学学报 2020 37 2 391 396 21 倪钟 陈瑞丹 北京地区优良梅花栽培品种茎段启 动培养研究 J 中国园林 2020 37 S 64 66 22 孙姿 夏蜡梅组织培养技术研究 D 南京 南京 林业大学 2015 23 杨宏艳 金英庭 禹洁 等 大叶石蝴蝶组培苗根系 形态对不同生长素的响应 J 西部林业科学 2019 48 6 105 110 24 韦如萍 胡德活 晏姝 等 植物生长调节剂和基质 种类对杉木无性系瓶外生根组培苗质量的影响 J 西南林 业大学学报 自然科学版 2019 39 6 49 56 25 Flores R Nicoloso F T Maldaner J et al Benzylamin opurine BAP and thidiazuron TDZ on in vitro propagation of Pfaffia glomerata Spreng Pedersen J Rev Bras Pl Med Botucatu 2009 11 3 292 299 26 Nicoloso F T Erig A C Martins C F et al Micro propagation of Brazilian ginseng Pfaffia glomerata Spreng Pedersen J Rev Bras Pl Med Botucatu 2001 3 2 11 18 27 付传明 冼康华 苏江 等 植物激素和接种方式对 广西金线莲壮苗生根的影响 J 广西植物 2019 39 12 1628 1635 28 刘海龙 陈博雯 肖玉菲 等 澳洲茶树组培继代增 殖技术优化 J 西部林业科学 2017 46 5 23 28 29 黄晓红 药用植物广豆根组培快繁体系的建立 D 南宁 广西大学 2012 30 罗敦 黄汉林 吴坤林 等 移栽基质对香樟组培苗 生长的影响 J 安徽农业科学 2020 48 2 130 132 31 李水根 李秀芬 殷丽青 等 喜马拉雅樱花嫩茎离 体快繁体系优化 J OL 分子植物育种 http kns cnki net kcms detail 46 1068 S 20191227 1723 012 html 2019 12 30 编辑 刘永刚 441西 部 林 业 科 学 2021年