辽宁省甜樱桃叶枯病病原鉴定.pdf

16 中 国 果 树 2022 9 16 19 本 文 于 2022 07 05 收 到 2022 07 07 收 到 修 改 稿 国 家 桃 产 业 技 术 体 系 樱 桃 熊 岳 综 合 试 验 站 项 目 CARS 30 ZY 25 戴 启 东 电 话 0417 7033463 E mail daiqd 张 琪 静 为 通 信 作 者 电 话 0417 7039692 E mail qijingzhang DOI 1 0 16626 ki issn1000 8047 2022 09 004 辽宁 省甜樱 桃叶枯 病病原 鉴定 戴启东 周朝辉 艾佳音 张琪静 辽宁省果树科学研究所 营口 115009 摘 要 为了明确辽宁省甜樱桃叶枯病致病菌的种类 为甜樱桃叶枯病的合理化防治提供理论依据 在辽南 地区采集甜樱桃叶枯病样本 采用室内致病菌组织分离法分离纯化菌株 室内回接寄主品种确定致病菌株 经柯 赫氏法 则验证 通过常规形 态学观察 并结合真 菌 ITS rDNA 技术对 致病菌进行 分子鉴定 明确致病 菌种类 从 甜 樱桃 叶 枯病样 本中 分 离得 到 7 株 分离 物 经 致 病性 验 证 菌 株 LNCY7 对 甜樱 桃 品种 砂 蜜豆 佳红 美早 均 具 有 致 病 性 且 与 田 间 发 病症 状基 本 一 致 通 过 扩 增 测 序 和 序列比 对 分 析 菌株 LNCY7 特 异 性 序列与 GenBank 数 据 库中 登录 号为 MH707085 1 的 层 出镰 刀菌 Fusarium proliferatum 的 同源 性 为 99 且 在系 统发 育树 上 聚 合 在一个分支 根据形态学鉴定及分子鉴定结果 将引起辽宁省甜樱桃叶枯病的致病菌鉴定为层出镰刀菌 关键词 甜樱桃 叶枯病 分子鉴定 层出镰刀菌 中图分类号 S 436 629 文献标志码 A 文章编号 1 000 8047 2022 09 0016 04 Pathogen identification of sweet cherry leaf blight in Liaoning Province DAI Qidong ZHOU Chaohui AI Jiayin ZHANG Qijing Liaoning Institute of Pomology Yingkou 115009 Abstract In order to clarify the types of pathogens of sweet cherry leaf blight in Liaoning and provide theoretical basis for the rational control of sweet cherry leaf blight The samples of sweet cherry leaf blight were collected in the southern of Liaoning Province The strains were isolated and cultured in PDA medium by indoor pathogen tissue isolation method at room temperature The isolated products were verified by Koch s rule The pathogenic strains were identified by routine morphological observation and ITS rDNA technology and the phylogenetic tree was constructed Seven strains were isolated from sweet cherry leaf blight samples After pathogenicity verification strain LNCY7 was pathogenic to sweet cherry varieties Summit Jiahong and Tieton which was basically consistent with the symptoms in the field Through amplification sequencing and sequence alignment analysis the homology between LNCY7 specific sequence and Fusarium proliferatum login number MH707085 1 in GenBank database was 99 and it was aggregated in one branch on the phylogenetic tree According to the morphological and molecular identification results of strain LNCY7 the pathogen causing sweet cherry leaf blight in Liaoning was identified as Fusarium proliferatum Key words sweet cherry leaf blight disease molecular identification Fusarium proliferatum 甜 樱 桃 是 北 方 地 区 成 熟 较 早 的 落 叶 果 树 果 实 口 感 丰 富 商 品 价 值 较 高 具 有 很 好 的 市 场 前 景 随 着 集 约 化 种 植 近 年 来 甜 樱 桃 病 害 发 生 呈 上 升 趋 势 尤 其 是 叶 部 病 害 的 发 生 可 抑 制 光 合 作 用 造 成 落 叶 落 果 影 响 干 物 质 的 积 累 严 重 制 约 产 业 的 发 展 国 内 外 学 者 对 甜 樱 桃 病 害 进 行 了 一 些 相 关 的 研 究 主 要 有 由 黄 单 孢 杆 菌 Xanthomonas pruni 引 起 的 叶 片 穿 孔 和 枝 干 溃 疡 病 1 由 疣 双 胞 锈 菌 Tranzschelia sp 引 起 的 樱 桃 锈 病 由 土 壤 农 杆 菌 Agrobacterium sp 引 起 的 根 瘤 病 由 病 梨 孢 Apiosporina sp 引 起 的 枝 干 黑 结 病 由 串 珠 菌 Monilinia sp 导 致 的 花 芽 小 枝 及 果 实 腐 烂 2 由 外 囊 菌 属 Taphrina sp 引 起 的 枝 疯 病 由 蜜 环 菌 属 Armillaria sp 和 单 孢 霉 属 Phymatotrichum sp 引 起 的 根 腐 病 3 等 杨 丽 萍 等 4 赵 远 征 等 5 通 过 ITS rDNA 技 术 分 别 对 甘 肃 辽 宁 樱 桃 黑 斑 病 病 原 进 行 了 研 究 认 为 交 链 格 孢 Alternaria alternata 和 细 极 链 格 孢 Alternaria tenuissima 是 引 起 该 病 害 17 中 国 果 树 2022 9 16 19 本 文 于 2022 07 05 收 到 2022 07 07 收 到 修 改 稿 国 家 桃 产 业 技 术 体 系 樱 桃 熊 岳 综 合 试 验 站 项 目 CARS 30 ZY 25 戴 启 东 电 话 0417 7033463 E mail daiqd 张 琪 静 为 通 信 作 者 电 话 0417 7039692 E mail qijingzhang DOI 1 0 16626 ki issn1000 8047 2022 09 004 辽宁 省甜樱 桃叶枯 病病原 鉴定 戴启东 周朝辉 艾佳音 张琪静 辽宁省果树科学研究所 营口 115009 摘 要 为了明确辽宁省甜樱桃叶枯病致病菌的种类 为甜樱桃叶枯病的合理化防治提供理论依据 在辽南 地区采集甜樱桃叶枯病样本 采用室内致病菌组织分离法分离纯化菌株 室内回接寄主品种确定致病菌株 经柯 赫氏法 则验证 通过常规形 态学观察 并结合真 菌 ITS rDNA 技术对 致病菌进行 分子鉴定 明确致病 菌种类 从 甜 樱桃 叶 枯病样 本中 分 离得 到 7 株 分离 物 经 致 病性 验 证 菌 株 LNCY7 对 甜樱 桃 品种 砂 蜜豆 佳红 美早 均 具 有 致 病 性 且 与 田 间 发 病症 状基 本 一 致 通 过 扩 增 测 序 和 序列比 对 分 析 菌株 LNCY7 特 异 性 序列与 GenBank 数 据 库中 登录 号为 MH707085 1 的 层 出镰 刀菌 Fusarium proliferatum 的 同源 性 为 99 且 在系 统发 育树 上 聚 合 在一个分支 根据形态学鉴定及分子鉴定结果 将引起辽宁省甜樱桃叶枯病的致病菌鉴定为层出镰刀菌 关键词 甜樱桃 叶枯病 分子鉴定 层出镰刀菌 中图分类号 S 436 629 文献标志码 A 文章编号 1 000 8047 2022 09 0016 04 Pathogen identification of sweet cherry leaf blight in Liaoning Province DAI Qidong ZHOU Chaohui AI Jiayin ZHANG Qijing Liaoning Institute of Pomology Yingkou 115009 Abstract In order to clarify the types of pathogens of sweet cherry leaf blight in Liaoning and provide theoretical basis for the rational control of sweet cherry leaf blight The samples of sweet cherry leaf blight were collected in the southern of Liaoning Province The strains were isolated and cultured in PDA medium by indoor pathogen tissue isolation method at room temperature The isolated products were verified by Koch s rule The pathogenic strains were identified by routine morphological observation and ITS rDNA technology and the phylogenetic tree was constructed Seven strains were isolated from sweet cherry leaf blight samples After pathogenicity verification strain LNCY7 was pathogenic to sweet cherry varieties Summit Jiahong and Tieton which was basically consistent with the symptoms in the field Through amplification sequencing and sequence alignment analysis the homology between LNCY7 specific sequence and Fusarium proliferatum login number MH707085 1 in GenBank database was 99 and it was aggregated in one branch on the phylogenetic tree According to the morphological and molecular identification results of strain LNCY7 the pathogen causing sweet cherry leaf blight in Liaoning was identified as Fusarium proliferatum Key words sweet cherry leaf blight disease molecular identification Fusarium proliferatum 甜 樱 桃 是 北 方 地 区 成 熟 较 早 的 落 叶 果 树 果 实 口 感 丰 富 商 品 价 值 较 高 具 有 很 好 的 市 场 前 景 随 着 集 约 化 种 植 近 年 来 甜 樱 桃 病 害 发 生 呈 上 升 趋 势 尤 其 是 叶 部 病 害 的 发 生 可 抑 制 光 合 作 用 造 成 落 叶 落 果 影 响 干 物 质 的 积 累 严 重 制 约 产 业 的 发 展 国 内 外 学 者 对 甜 樱 桃 病 害 进 行 了 一 些 相 关 的 研 究 主 要 有 由 黄 单 孢 杆 菌 Xanthomonas pruni 引 起 的 叶 片 穿 孔 和 枝 干 溃 疡 病 1 由 疣 双 胞 锈 菌 Tranzschelia sp 引 起 的 樱 桃 锈 病 由 土 壤 农 杆 菌 Agrobacterium sp 引 起 的 根 瘤 病 由 病 梨 孢 Apiosporina sp 引 起 的 枝 干 黑 结 病 由 串 珠 菌 Monilinia sp 导 致 的 花 芽 小 枝 及 果 实 腐 烂 2 由 外 囊 菌 属 Taphrina sp 引 起 的 枝 疯 病 由 蜜 环 菌 属 Armillaria sp 和 单 孢 霉 属 Phymatotrichum sp 引 起 的 根 腐 病 3 等 杨 丽 萍 等 4 赵 远 征 等 5 通 过 ITS rDNA 技 术 分 别 对 甘 肃 辽 宁 樱 桃 黑 斑 病 病 原 进 行 了 研 究 认 为 交 链 格 孢 Alternaria alternata 和 细 极 链 格 孢 Alternaria tenuissima 是 引 起 该 病 害 戴 启 东 周 朝 辉 艾 佳 音 等 辽 宁 省 甜 樱 桃 叶 枯 病 病 原 鉴 定 的 主 要 致 病 菌 刘 保 友 等 6 对 大 樱 桃 褐 斑 病 菌 进 行 了 研 究 认 为 引 起 褐 斑 病 的 病 原 菌 为 核 果 钉 孢 菌 Passalora circumscissa 于 晓 丽 等 7 对 烟 台 地 区 樱 桃 茎 腐 病 病 原 菌 以 及 致 病 性 进 行 了 研 究 认 为 烟 草 疫 霉 Phytophthora nicotianae 是 该 病 的 致 病 菌 关 于 甜 樱 桃 叶 枯 病 国 内 报 道 相 对 较 少 主 要 认 为 由 细 菌 引 起 也 可 由 生 理 胁 迫 所 导 致 8 且 病 斑 后 期 常 伴 随 有 穿 孔 脱 落 由 于 甜 樱 桃 叶 部 病 害 种 类 较 多 症 状 相 近 且 不 易 区 分 明 确 甜 樱 桃 叶 部 病 害 的 致 病 菌 组 成 对 合 理 地 制 定 防 治 策 略 极 为 重 要 笔 者 在 辽 宁 省 甜 樱 桃 产 区 采 集 到 1种 近 年 来 发 生 较 普 遍 的 叶 枯 类 病 害 样 本 通 过 室 内 病 菌 组 织 分 离 培 养 形 态 学 观 察 并 结 合 分 子 鉴 定 技 术 将 引 起 辽 宁 省 甜 樱 桃 叶 枯 病 的 致 病 菌 鉴 定 为 层 出 镰 刀 菌 Fusarium proliferatum 1 材料与方法 1 1 供 试 材 料 2021 年 在 辽 南 地 区 采 集 到 甜 樱 桃 叶 枯 病 的 病 害 样 品 主 要 集 中 在 大 连 市 金 州 普 兰 店 地 区 及 营 口 市 熊 岳 地 区 甜 樱 桃 发 病 较 严 重 的 品 种 主 要 有 美 早 砂 蜜 豆 和 佳 红 等 1 2 试 验 方 法 1 2 1 病 菌 的 分 离 培 养 及 形 态 学 鉴 定 首 先 将 不 同 地 区 采 集 的 甜 樱 桃 叶 枯 病 病 样 于 室 温 条 件 下 保 湿 24 h 然 后 在 叶 片 发 病 部 位 病 健 交 接 处 切 取 4 mm 4 mm 大 小 的 病 组 织 于 0 1 升 汞 溶 液 中 浸 泡 30 s 取 出 后 移 入 70 酒 精 溶 液 中 浸 泡 30 s 用 蒸 馏 水 冲 洗 干 净 后 移 入 PDA 培 养 基 平 板 25 恒 温 培 养 每 皿 培 养 3 块 发 病 组 织 7 d 后 待 长 出 新 鲜 菌 丝 挑 取 边 缘 菌 丝 再 次 分 离 纯 化 黑 光 灯 照 射 以 及 光 暗 交 替 各 12 h 刺 激 菌 落 产 孢 后 光 学 显 微 镜 下 于 无 菌 水 浮 载 液 观 察 菌 丝 孢 子 形 态 进 行 分 类 鉴 定 9 1 2 2 叶 片 致 病 性 测 定 将 获 得 的 纯 培 养 菌 株 进 行 叶 片 室 内 回 接 试 验 采 用 菌 块 涂 抹 法 接 种 10 并 以 无 菌 水 喷 施 作 为 对 照 回 接 的 寄 主 品 种 分 别 为 砂 蜜 豆 佳 红 美 早 每 个 品 种 接 种 5 片 叶 片 每 片 叶 片 接 种 3 个 菌 块 分 别 统 计 接 种 发 病 情 况 1 2 3 纯 培 养 菌 株 的 分 子 鉴 定 将 具 有 致 病 性 的 菌 株 平 板 送 生 工 生 物 工 程 上 海 股 份 有 限 公 司 进 行 扩 增 测 序 扩 增 选 用 真 菌 ITS rDNA 通 用 引 物 ITS1 5 TCCGTAGGTGAA CCTGCGG 3 ITS4 5 TCCTCCGCTATTGATATG C 3 PCR 产 物 纯 化 与 测 序 工 作 由 生 工 生 物 工 程 上 海 股 份 有 限 公 司 测 序 部 完 成 测 序 结 果 经 Chromas 3 0 软 件 拼 接 后 在 NCBI GenBank 进 行 同 源 性 比 对 以 确 定 菌 株 的 同 源 性 不 同 菌 株 亲 缘 关 系 发 育 树 采 用 软 件 MEGA 7 0 以 邻 接 法 构 建 2 结果与分析 2 1 甜 樱 桃 叶 枯 病 菌 的 分 离 及 致 病 性 测 定 从 甜 樱 桃 叶 枯 病 病 样 中 共 分 离 得 到 7 株 病 菌 其 中 真 菌 菌 株 有 3 株 编 号 分 别 为 LNCY5 LNCY6 LNCY7 细 菌 菌 株 有 4 株 编 号 分 别 为 BNCY1 BNCY2 BNCY3 和 BNCY4 通 过 对 3 个 甜 樱 桃 品 种 的 致 病 性 回 接 试 验 发 现 只 有 LNCY7 具 有 致 病 性 并 且 与 甜 樱 桃 叶 枯 病 田 间 发 生 症 状 相 似 其 他 6 株 菌 株 均 无 致 病 性 致 病 菌 株 LNCY7 接 种 美 早 砂 蜜 豆 和 佳 红 的 发 病 率 分 别 为 73 3 46 6 86 6 室 内 接 菌 5 d 后 在 砂 蜜 豆 叶 片 上 产 生 坏 死 褐 斑 但 扩 展 较 慢 在 佳 红 上 产 生 水 浸 状 黑 褐 色 病 斑 在 美 早 上 病 斑 扩 展 较 快 有 白 色 菌 丝 绒 毛 产 生 图 版 1 A B C 通 过 不 同 甜 樱 桃 品 种 的 致 病 性 测 定 认 为 菌 株 LNCY7 为 甜 樱 桃 叶 枯 病 致 病 菌 2 2 甜 樱 桃 叶 枯 病 发 病 症 状 及 病 菌 种 类 的 形 态 学 鉴 定 病 害 发 生 初 期 叶 片 正 面 出 现 褐 色 小 圆 点 大 小 为 1 2 mm 后 期 病 斑 圆 形 至 不 规 则 形 直 径 2 5 mm 且 病 斑 中 心 有 黄 褐 色 晕 圈 逐 渐 扩 展 至 整 个 叶 片 发 病 后 期 病 斑 褪 绿 中 心 有 穿 孔 状 导 致 叶 片 干 枯 死 亡 图 版 1 D 该 病 菌 在 PDA 培 养 基 上 生 长 较 快 气 生 菌 丝 初 期 白 色 棉 絮 状 菌 落 浓 密 不 产 生 分 生 孢 子 座 菌 落 表 面 初 期 白 色 后 期 淡 驼 绒 色 分 生 孢 子 梗 不 分 枝 产 孢 方 式 为 单 瓶 梗 型 分 生 孢 子 排 列 成 链 状 或 假 头 状 分 生 孢 子 镰 刀 形 顶 胞 渐 尖 基 孢 明 显 两 端 略 弯 曲 分 生 孢 子 大 多 3 5 隔 大 小 为 22 5 55 5 m 2 5 4 5 m 通 过 对 其 菌 落 孢 子 及 产 孢 表 型 等 形 态 鉴 定 图 1 认 为 该 菌 为 镰 刀 菌 属 Fusarium sp 真 菌 9 2 3 菌 株 ITS rDNA分 子 鉴 定 及 系 统 发 育 树 的 构 建 对 致 病 菌 株 LNCY7 进 行 DNA 提 取 以 提 取 的 总 DNA 为 模 板 利 用 ITS rDNA 通 用 引 物 进 行 PCR 扩 增 PCR 产 物 片 段 测 序 后 利 用 Chromas 3 0 软 18 戴 启 东 周 朝 辉 艾 佳 音 等 辽 宁 省 甜 樱 桃 叶 枯 病 病 原 鉴 定 图 1 LNCY7 菌株菌落形态 A 及其分生孢子形态 B 件 拼 接 得 到 大 小 为 566 bp 的 特 异 性 片 段 通 过 GenBank BLAST 分 析 比 对 该 菌 株 与 登 录 号 为 MH707085 1 的 层 出 镰 刀 菌 Fusarium proliferatum 的 同 源 性 达 到 99 为 了 进 一 步 明 确 该 菌 株 的 分 类 地 位 选 取 了 与 该 菌 株 亲 缘 关 系 较 相 近 的 镰 刀 菌 菌 株 进 行 了 系 统 发 育 树 的 构 建 结 果 表 明 菌 株 LNCY7 与 层 出 镰 刀 菌 聚 在 同 一 个 分 支 而 与 禾 谷 镰 刀 菌 Fusarium graminearum 尖 孢 镰 刀 菌 Fusarium oxysporum 拟 轮 生 镰 刀 菌 Fusarium verticillioides 等 镰 刀 菌 属 的 近 缘 种 分 别 聚 在 不 同 的 分 支 图 2 结 合 形 态 学 鉴 定 和 分 子 鉴 定 结 果 认 为 该 致 病 菌 株 LNCY7 为 层 出 镰 刀 菌 属 于 子 囊 菌 亚 门 肉 座 菌 目 丛 赤 壳 科 镰 刀 菌 属 真 菌 9 图 2 基 于 ITS rDNA序 列 LNCY7相 关 菌 株 的 系 统 发 育 树 3 讨论与结论 本 研 究 分 离 得 到 的 甜 樱 桃 叶 枯 病 的 致 病 菌 为 层 出 镰 刀 菌 Fusarium proliferatum 是 一 类 重 要 的 植 物 病 原 菌 该 病 菌 寄 主 范 围 广 泛 在 小 麦 大 豆 香 蕉 和 柑 橘 上 均 有 报 道 不 仅 可 以 侵 染 植 物 同 时 也 可 侵 染 动 物 和 人 11 15 镰 刀 菌 常 引 起 作 物 苗 期 根 腐 病 叶 片 枯 萎 病 等 但 近 年 来 发 现 该 病 菌 也 可 侵 染 果 实 对 采 后 贮 藏 产 生 影 响 16 镰 刀 菌 属 真 菌 Fusarium sp 种 类 繁 多 很 多 近 缘 种 均 有 致 病 性 拟 轮 生 镰 刀 菌 F verticillioides 可 引 起 朱 蕉 叶 斑 病 层 出 镰 刀 菌 F proliferatum 侵 染 香 蕉 果 实 可 引 起 果 斑 病 11 16 通 过 形 态 学 特 征 很 难 快 速 准 确 鉴 定 这 些 近 缘 种 国 内 外 学 者 不 断 探 索 一 些 具 有 保 守 序 列 的 特 异 基 因 来 区 分 这 些 近 缘 种 类 针 对 钙 调 蛋 白 基 因 设 计 的 特 异 性 引 物 检 测 芦 笋 茎 枯 病 F proliferatum 钙 调 蛋 白 基 因 特 异 性 引 物 可 区 分 处 于 潜 伏 侵 染 阶 段 的 层 出 镰 刀 菌 F proliferatum 和 尖 孢 镰 刀 菌 F oxysporum 17 18 通 过 保 守 的 ITS rDNA 区 间 设 计 引 物 鉴 定 引 起 圆 葱 黑 腐 病 的 2 种 病 原 菌 F proliferatum 和 F verticillioides 19 20 在 该 病 菌 病 理 生 理 学 方 面 也 取 得 一 定 进 展 研 究 人 员 发 现 弱 酸 性 条 件 下 香 蕉 果 实 更 易 感 染 果 斑 病 F proliferatum 原 因 是 病 菌 周 围 背 景 环 境 pH 值 发 生 改 变 从 而 调 节 了 细 胞 壁 降 解 酶 和 抗 氧 化 酶 的 数 量 来 影 响 病 菌 的 侵 染 活 性 16 同 时 层 出 镰 刀 菌 F proliferatum 代 谢 毒 性 物 质 伏 马 菌 素 等 的 致 病 机 理 也 不 断 被 揭 示 21 22 本 研 究 认 为 引 起 甜 樱 桃 叶 枯 病 的 病 原 菌 为 层 出 镰 刀 菌 F proliferatum 与 已 报 道 的 樱 桃 叶 片 黑 斑 病 病 原 链 格 孢 属 Alternaria sp 真 菌 不 同 4 5 这 2 种 病 害 从 发 病 症 状 上 也 有 明 显 的 区 别 通 过 对 不 同 品 种 的 致 病 性 测 定 发 现 不 同 品 种 病 斑 扩 展 情 况 有 所 不 同 该 病 菌 是 否 存 在 不 同 品 种 抗 性 差 异 有 待 进 一 步 明 确 参考文献 1 Marchi G Cinelli T Surico G Bacterial leaf spot caused by the quarantine pathogen Xanthomonas arboricola pv pruni on cherry laurel in central Italy Plant Disease 2011 95 1 74 2 Tamm L Minder C E Fluckiger W Phenological analysis of brown rot blossom blight of sweet cherry caused by Monilinia laxa Phytopathology 1995 85 4 401 408 3 Villamor D E V Pillai S S Eastwell K C Systemic infection and symptom developmentofagro inoculated cDNAcloneofcherryrustymottle associated virusinsweetcherry Prunusavium VirusResearch 2021 296 198330 4 杨 丽 萍 金 梦 军 崔 凌 霄 等 甘 肃 省 樱 桃 黑 斑 病 病 原 菌 的 分 离 及 A B 0 4 Fusarium proliferatum Fusarium proliferatum Fusarium oxysporum Fusarium proliferatum Fusarium proliferatum Fusarium fujikuroi Fusarium concentricum Fusarium verticillioides Fusarium proliferatum Fusarium annulatum Fusarium graminearum Fusarium proliferatum LNCY70 4902 0 2859 1 5201 0 3491 0 5591 0 0 8746 1 8068 0 296 0 8365 1 2594 MT372093 1 MT003116 1 MH707085 1 MZ950914 1 KJ634671 1 MT994990 1 MW533966 1 KT192406 1 MN088598 1 KJ767071 1 KU939073 1 JN400690 1 19 戴 启 东 周 朝 辉 艾 佳 音 等 辽 宁 省 甜 樱 桃 叶 枯 病 病 原 鉴 定 图 1 LNCY7 菌株菌落形态 A 及其分生孢子形态 B 件 拼 接 得 到 大 小 为 566 bp 的 特 异 性 片 段 通 过 GenBank BLAST 分 析 比 对 该 菌 株 与 登 录 号 为 MH707085 1 的 层 出 镰 刀 菌 Fusarium proliferatum 的 同 源 性 达 到 99 为 了 进 一 步 明 确 该 菌 株 的 分 类 地 位 选 取 了 与 该 菌 株 亲 缘 关 系 较 相 近 的 镰 刀 菌 菌 株 进 行 了 系 统 发 育 树 的 构 建 结 果 表 明 菌 株 LNCY7 与 层 出 镰 刀 菌 聚 在 同 一 个 分 支 而 与 禾 谷 镰 刀 菌 Fusarium graminearum 尖 孢 镰 刀 菌 Fusarium oxysporum 拟 轮 生 镰 刀 菌 Fusarium verticillioides 等 镰 刀 菌 属 的 近 缘 种 分 别 聚 在 不 同 的 分 支 图 2 结 合 形 态 学 鉴 定 和 分 子 鉴 定 结 果 认 为 该 致 病 菌 株 LNCY7 为 层 出 镰 刀 菌 属 于 子 囊 菌 亚 门 肉 座 菌 目 丛 赤 壳 科 镰 刀 菌 属 真 菌 9 图 2 基 于 ITS rDNA序 列 LNCY7相 关 菌 株 的 系 统 发 育 树 3 讨论与结论 本 研 究 分 离 得 到 的 甜 樱 桃 叶 枯 病 的 致 病 菌 为 层 出 镰 刀 菌 Fusarium proliferatum 是 一 类 重 要 的 植 物 病 原 菌 该 病 菌 寄 主 范 围 广 泛 在 小 麦 大 豆 香 蕉 和 柑 橘 上 均 有 报 道 不 仅 可 以 侵 染 植 物 同 时 也 可 侵 染 动 物 和 人 11 15 镰 刀 菌 常 引 起 作 物 苗 期 根 腐 病 叶 片 枯 萎 病 等 但 近 年 来 发 现 该 病 菌 也 可 侵 染 果 实 对 采 后 贮 藏 产 生 影 响 16 镰 刀 菌 属 真 菌 Fusarium sp 种 类 繁 多 很 多 近 缘 种 均 有 致 病 性 拟 轮 生 镰 刀 菌 F verticillioides 可 引 起 朱 蕉 叶 斑 病 层 出 镰 刀 菌 F proliferatum 侵 染 香 蕉 果 实 可 引 起 果 斑 病 11 16 通 过 形 态 学 特 征 很 难 快 速 准 确 鉴 定 这 些 近 缘 种 国 内 外 学 者 不 断 探 索 一 些 具 有 保 守 序 列 的 特 异 基 因 来 区 分 这 些 近 缘 种 类 针 对 钙 调 蛋 白 基 因 设 计 的 特 异 性 引 物 检 测 芦 笋 茎 枯 病 F proliferatum 钙 调 蛋 白 基 因 特 异 性 引 物 可 区 分 处 于 潜 伏 侵 染 阶 段 的 层 出 镰 刀 菌 F proliferatum 和 尖 孢 镰 刀 菌 F oxysporum 17 18 通 过 保 守 的 ITS rDNA 区 间 设 计 引 物 鉴 定 引 起 圆 葱 黑 腐 病 的 2 种 病 原 菌 F proliferatum 和 F verticillioides 19 20 在 该 病 菌 病 理 生 理 学 方 面 也 取 得 一 定 进 展 研 究 人 员 发 现 弱 酸 性 条 件 下 香 蕉 果 实 更 易 感 染 果 斑 病 F proliferatum 原 因 是 病 菌 周 围 背 景 环 境 pH 值 发 生 改 变 从 而 调 节 了 细 胞 壁 降 解 酶 和 抗 氧 化 酶 的 数 量 来 影 响 病 菌 的 侵 染 活 性 16 同 时 层 出 镰 刀 菌 F proliferatum 代 谢 毒 性 物 质 伏 马 菌 素 等 的 致 病 机 理 也 不 断 被 揭 示 21 22 本 研 究 认 为 引 起 甜 樱 桃 叶 枯 病 的 病 原 菌 为 层 出 镰 刀 菌 F proliferatum 与 已 报 道 的 樱 桃 叶 片 黑 斑 病 病 原 链 格 孢 属 Alternaria sp 真 菌 不 同 4 5 这 2 种 病 害 从 发 病 症 状 上 也 有 明 显 的 区 别 通 过 对 不 同 品 种 的 致 病 性 测 定 发 现 不 同 品 种 病 斑 扩 展 情 况 有 所 不 同 该 病 菌 是 否 存 在 不 同 品 种 抗 性 差 异 有 待 进 一 步 明 确 参考文献 1 Marchi G Cinelli T Surico G Bacterial leaf spot caused by the quarantine pathogen Xanthomonas arboricola pv pruni on cherry laurel in central Italy Plant Disease 2011 95 1 74 2 Tamm L Minder C E Fluckiger W Phenological analysis of brown rot blossom blight of sweet cherry caused by Monilinia laxa Phytopathology 1995 85 4 401 408 3 Villamor D E V Pillai S S Eastwell K C Systemic infection and symptom developmentofagro inoculated cDNAcloneofcherryrustymottle associated virusinsweetcherry Prunusavium VirusResearch 2021 296 198330 4 杨 丽 萍 金 梦 军 崔 凌 霄 等 甘 肃 省 樱 桃 黑 斑 病 病 原 菌 的 分 离 及 A B 戴 启 东 周 朝 辉 艾 佳 音 等 辽 宁 省 甜 樱 桃 叶 枯 病 病 原 鉴 定 鉴 定 果 树 学 报 2020 37 6 891 899 5 赵 远 征 刘 志 恒 李 俞 涛 等 大 樱 桃 黑 斑 病 病 原 鉴 定 及 其 致 病 性 研 究 园 艺 学 报 2013 40 8 1560 1566 6 刘 保 友 张 伟 栾 炳 辉 等 大 樱 桃 褐 斑 病 病 原 菌 鉴 定 与 田 间 流 行 动 态 研 究 果 树