荷兰进境百合种球中线虫的分离及分子鉴定.pdf

农 业 环 境 科 学 学 报 J o u r n a l o f A g r o E n v i r o n m e n t S c i e n c e 2 0 2 2 4 1 1 2 2 8 0 5 2 8 0 9 2 0 2 2 年 1 2 月 张 寅 寅 黑 多 尔 刘 玥 婷 等 荷 兰 进 境 百 合 种 球 中 线 虫 的 分 离 及 分 子 鉴 定 J 农 业 环 境 科 学 学 报 2 0 2 2 4 1 1 2 2 8 0 5 2 8 0 9 Z H A N G Y Y H E I D E L I U Y T e t a l I s o l a t i o n a n d m o l e c u l a r i d e n t i f i c a t i o n o f n e m a t o d e s i n t e r c e p t e d f r o m i m p o r t e d N e t h e r l a n d s l i l y b u l b s J J o u r n a l o f A g r o E n v i r o n m e n t S c i e n c e 2 0 2 2 4 1 1 2 2 8 0 5 2 8 0 9 开 放 科 学 O S I D 荷 兰 进 境 百 合 种 球 中 线 虫 的 分 离 及 分 子 鉴 定 张 寅 寅 黑 多 尔 刘 玥 婷 李 鑫 大 连 海 关 技 术 中 心 辽 宁 大 连 1 1 6 0 0 1 I s o l a t i o n a n d m o l e c u l a r i d e n t i f i c a t i o n o f n e m a t o d e s i n t e r c e p t e d f r o m i m p o r t e d N e t h e r l a n d s l i l y b u l b s Z H A N G Y i n y i n H E I D u o e r L I U Y u e t i n g L I X i n T e c h n o l o g y C e n t e r o f D a l i a n C u s t o m s D a l i a n 1 1 6 0 0 1 C h i n a A b s t r a c t T h e i n c r e a s i n g i m p o r t o f t h e N e t h e r l a n d s l i l y b u l b s o v e r t h e y e a r s h a s m e a n t i n t r o d u c t i o n o f a v a r i e t y o f p e s t s i n t o t h e c o u n t r y a n d o n e s u c h n e m a t o d e p e s t h a s t u r n e d i n t o r i s k e n d a n g e r i n g t h e n a t i o n a l b i o s a f e t y Q u a r a n t i n e a n d i d e n t i f i c a t i o n o f n e m a t o d e s a r e t h u s i m p e r a t i v e T h i s p a p e r p r o v i d e s r e f e r e n c e f o r t h e q u a r a n t i n e o f i m p o r t e d s e e d l i n g s a n d f l o w e r s t o v a r i o u s p o r t s a n d t h e s u p e r v i s i o n o f p l a n t i n g s i t e s I n t h i s s t u d y m o r p h o l o g y B e e m a n f u n n e l m e t h o d c o m b i n e d w i t h m o l e c u l a r b i o l o g i c a l m e t h o d s D N A e x t r a c t i o n a n d P C R a m p l i f i c a t i o n w e r e u s e d t o q u a r a n t i n e a n d i d e n t i f y p l a n t p a r a s i t i c n e m a t o d e s i s o l a t e d f r o m l i l y b u l b s T h e r e s u l t s s h o w e d t h a t t h r e e s p e c i e s o f p l a n t p a r a s i t i c n e m a t o d e s w e r e f o u n d P r a t y l e n c h u s p e n e t r a n s A p h e l e n c h o i d e s b l a s t o p h t h o r u s a n d A p h e l e n c h u s a v e n a e T h e r e s u l t s a l s o i n d i c a t e d t h a t t h e q u a n t i t y o f n e m a t o d e s i s o l a t e d f r o m t h e i m p o r t e d l i l y b u l b s w a s l i m i t e d w i t h m o s t b e i n g l a r v a e a s i s i t d i f f i c u l t t o a c c u r a t e l y i d e n t i f y n e m a t o d e s b a s e d o n t h e i r m o r p h o l o g y t h i s p r o c e s s n e e d e d t o b e s u p p l e m e n t e d b y m o l e c u l a r b i o l o g i c a l m e t h o d s t o e n s u r e t h e a c c u r a c y o f t h e r e s u l t s K e y w o r d s N e t h e r l a n d s l i l y b u l b n e m a t o d e m o l e c u l a r i d e n t i f i c a t i o n 收 稿 日 期 2 0 2 2 1 1 1 0 录 用 日 期 2 0 2 2 1 2 0 6 作 者 简 介 张 寅 寅 1 9 8 7 女 辽 宁 大 连 人 硕 士 从 事 植 物 检 疫 工 作 E m a i l 2 0 3 5 4 2 5 6 1 0 q q c o m 黑 多 尔 与 张 寅 寅 同 等 贡 献 通 信 作 者 李 鑫 E m a i l 1 4 8 2 6 1 5 5 q q c o m 基 金 项 目 十 四 五 国 家 重 点 研 发 计 划 课 题 2 0 2 1 Y F D 1 4 0 0 1 0 0 P r o j e c t s u p p o r t e d T h e N a t i o n a l K e y R e s e a r c h a n d D e v e l o p m e n t P r o j e c t D u r i n g t h e 1 4 t h F i v e Y e a r P l a n o f C h i n a 2 0 2 1 Y F D 1 4 0 0 1 0 0 摘 要 随 着 荷 兰 百 合 种 球 的 进 口 量 逐 年 增 加 其 极 易 携 带 多 种 有 害 生 物 入 境 线 虫 传 入 风 险 随 之 增 大 危 害 国 门 生 物 安 全 因 此 对 其 准 确 的 检 疫 鉴 定 十 分 重 要 本 文 采 用 形 态 学 改 良 贝 曼 漏 斗 法 结 合 分 子 生 物 学 方 法 D N A 提 取 及 P C R 扩 增 对 百 合 种 球 中 分 离 到 的 植 物 寄 生 线 虫 进 行 分 离 鉴 定 最 终 鉴 定 出 3 个 种 类 分 别 为 穿 刺 短 体 线 虫 P r a t y l e n c h u s p e n e t r a n s 毁 芽 滑 刃 线 虫 A p h e l e n c h o i d e s b l a s t o p h t h o r u s 和 燕 麦 真 滑 刃 线 虫 A p h e l e n c h u s a v e n a e 研 究 表 明 在 进 境 百 合 种 球 中 分 离 到 的 线 虫 数 量 有 限 幼 虫 较 多 无 法 通 过 形 态 学 准 确 鉴 定 应 结 合 分 子 生 物 学 方 法 保 证 结 果 的 准 确 性 关 键 词 荷 兰 百 合 种 球 线 虫 分 子 鉴 定 中 图 分 类 号 S 4 3 6 8 文 献 标 志 码 A 文 章 编 号 1 6 7 2 2 0 4 3 2 0 2 2 1 2 2 8 0 5 0 5 d o i 1 0 1 1 6 5 4 j a e s 2 0 2 2 1 1 4 1 随 着 国 内 鲜 花 消 费 需 求 的 逐 步 提 升 优 质 百 合 花 的 需 求 量 逐 年 增 加 荷 兰 是 世 界 上 最 大 的 百 合 种 球 等 花 卉 生 产 国 1 我 国 每 年 从 荷 兰 进 口 大 量 百 合 种 球 其 已 成 为 我 国 主 要 的 鲜 切 花 品 种 百 合 种 球 极 易 携 带 线 虫 随 贸 易 进 入 我 国 2 近 年 来 在 我 国 口 岸 检 疫 工 作 中 多 次 截 获 重 要 线 虫 3 4 线 虫 是 一 种 最 难 鉴 定 的 动 物 之 一 目 前 随 着 分 子 生 物 学 的 不 断 发 展 基 于 D N A 的 分 子 生 物 学 鉴 定 方 法 已 广 泛 应 用 于 线 虫 的 检农 业 环 境 科 学 学 报 第 4 1 卷 第 1 2 期 疫 鉴 定 中 国 内 外 的 研 究 人 员 主 要 采 用 线 虫 1 8 S 2 8 S 核 糖 体 基 因 I T S 区 和 线 粒 体 基 因 的 核 苷 酸 序 列 作 为 识 别 线 虫 的 条 形 码 以 建 立 线 虫 的 D N A 分 类 学 5 近 年 来 以 上 述 序 列 作 为 分 子 标 记 在 线 虫 鉴 定 中 得 到 广 泛 应 用 6 7 尤 其 在 口 岸 截 获 线 虫 为 幼 虫 近 似 种 难 以 区 分 时 常 采 用 形 态 学 方 法 与 分 子 生 物 学 技 术 相 结 合 的 综 合 鉴 定 方 法 8 9 以 保 证 鉴 定 结 果 的 准 确 性 本 文 针 对 进 境 的 荷 兰 百 合 种 球 进 行 线 虫 分 离 采 用 形 态 学 初 步 判 断 结 合 分 子 生 物 学 技 术 进 行 检 疫 鉴 定 最 终 获 得 植 物 寄 生 线 虫 3 种 本 研 究 为 进 境 种 苗 花 卉 中 线 虫 的 检 疫 鉴 定 及 后 续 监 管 防 治 提 供 了 参 考 依 据 1 材 料 与 方 法 1 1 线 虫 分 离 将 百 合 种 球 的 鳞 球 茎 根 重 点 选 取 有 根 腐 症 状 的 及 介 质 一 并 搜 集 采 用 改 良 贝 曼 漏 斗 法 B e e m a n f u n n e l m e t h o d 分 离 线 虫 室 温 保 持 在 2 0 2 8 2 4 h 后 用 凹 面 皿 接 取 水 样 约 5 m L 置 于 Z E I S S S t e m i 5 0 8 体 视 显 微 镜 下 观 察 1 2 形 态 学 鉴 定 经 体 视 显 微 镜 观 察 后 挑 取 待 检 线 虫 采 用 S E I N H O R S T 1 0 发 明 的 丙 三 醇 乙 醇 脱 水 法 制 作 永 久 玻 片 在 L e i c a D M 3 0 0 0 显 微 镜 下 进 行 形 态 观 察 根 据 形 态 特 征 进 行 初 步 判 断 并 搜 集 该 线 虫 以 备 分 子 生 物 学 鉴 定 1 3 分 子 生 物 学 鉴 定 由 于 线 虫 的 形 态 特 征 变 异 较 大 进 境 百 合 种 球 中 分 离 到 的 线 虫 数 量 有 限 幼 虫 较 多 很 难 仅 依 靠 形 态 特 征 对 线 虫 进 行 准 确 鉴 定 1 1 因 此 在 形 态 学 初 步 判 断 的 基 础 上 结 合 分 子 生 物 学 鉴 定 方 法 对 线 虫 种 属 进 一 步 确 认 1 3 1 线 虫 D N A 提 取 在 2 0 0 L P C R 管 中 加 入 8 L d d H 2 O 和 1 L 1 0 P C R B u f f e r M g 2 f r e e 挑 取 待 检 的 单 条 线 虫 放 入 d d H 2 O 清 洗 后 加 入 上 述 P C R 管 将 P C R 管 置 于 液 氮 中 1 m i n 取 出 后 置 于 8 5 水 浴 加 热 2 m i n 再 向 P C R 管 中 加 入 1 L 1 m g m L 1 蛋 白 酶 K 5 6 水 浴 加 热 1 5 m i n 9 5 水 浴 加 热 1 0 m i n 得 到 待 检 线 虫 的 D N A 提 取 液 可 直 接 用 于 P C R 扩 增 1 3 2 引 物 合 成 P C R 扩 增 及 产 物 测 序 选 择 核 糖 体 D N A 的 2 8 S D 2 D 3 区 引 物 对 进 行 扩 增 引 物 为 D 2 A 5 A C A A G T A C C G T G A G G G A A A G T T G 3 和 D 3 B 5 T C G G A A G G A A C C A G C T A C T A 3 1 2 以 提 取 的 待 测 线 虫 D N A 为 模 板 按 反 应 体 系 表 1 及 条 件 表 2 进 行 P C R 扩 增 将 P C R 产 物 送 至 生 物 公 司 测 序 将 测 序 结 果 B L A S T 比 对 分 析 引 物 合 成 试 剂 测 序 服 务 均 购 于 大 连 宝 生 物 公 司 2 结 果 与 分 析 2 1 穿 刺 短 体 线 虫 P r a t y l e n c h u s p e n e t r a n s 分 类 地 位 根 据 v a n d e n B e r g E s t h e r 最 新 分 类 系 统 该 线 虫 属 于 动 物 界 A n i m a l i a 线 虫 门 N e m a t o d a 有 腺 纲 A d e n o p h o r e a 双 胃 亚 纲 D i p l o g a s t e r i a 垫 刃 线 虫 目 T y l e n c h i d a 垫 刃 总 科 T y l e n c h o i d e a 短 体 科 P r a t y l e n c h i d a e 短 体 亚 科 P r a t y l e n c h u i n a e 短 体 线 虫 属 P r a t y l e n c h u s 2 1 1 形 态 特 征 描 述 雌 虫 虫 体 粗 短 唇 区 较 低 平 且 无 缢 缩 图 1 口 针 强 壮 基 部 球 发 达 中 食 道 球 卵 圆 形 约 占 该 处 体 宽 的 1 2 2 3 阴 门 位 于 虫 体 约 4 5 处 尾 部 圆 柱 形 末 端 宽圆 雄 虫 形 态 与 雌 虫 相 近 交 合 刺 细 交 合 伞 边 缘 呈 不 规 则 锯 齿 状 包 裹 至 尾 端 2 1 2 分 子 生 物 学 结 果 分 析 将 搜 集 到 的 雌 虫 雄 虫 分 别 提 取 其 D N A 采 用 D 2 A D 3 B 引 物 对 分 别 进 行 P C R 扩 增 获 得 长 度 均 为 7 5 0 b p 左 右 的 片 段 测 序 后 B L A S T 比 对 结 果 表 明 雌 表 1 P C R 反 应 体 系 T a b l e 1 P C R r e a c t i o n s y s t e m 试 剂 R e a g e n t T a K a R a L A T a q 5 U L 1 1 0 L A T a q B u f f e r M g 2 p l u s d N T P M i x t u r e 2 5 m m o l L 1 e a c h 引 物 D 2 A 引 物 D 3 B T e m p l a t e D N A d H 2 O 使 用 量 U s a g e 0 5 L 5 L 8 L 1 L 1 L 1 g 5 0 L 最 终 浓 度 F i n a l c o n c e n t r a t i o n 0 4 m o l L 1 0 4 m o l L 1 表 2 P C R 反 应 条 件 T a b l e 2 P C R r e a c t i o n c o n d i t i o n s 温 度 T e m p e r a t u r e 9 4 9 8 6 8 7 2 时 间 T i m e 1 m i n 1 0 s 1 5 m i n 1 0 m i n 循 环 数 C y c l e 3 0 2 8 0 6张 寅 寅 等 荷 兰 进 境 百 合 种 球 中 线 虫 的 分 离 及 分 子 鉴 定 2 0 2 2 年 1 2 月 w w w a e s o r g c n 虫 的 序 列 与 G e n B a n k 中 已 登 录 的 穿 刺 短 体 线 虫 K P 1 6 1 6 1 2 1 序 列 相 似 性 为 9 7 雄 虫 序 列 与 J X 0 4 6 9 9 0 1 序 列 相 似 性 为 9 8 因 此 鉴 定 该 线 虫 为 穿 刺 短 体 线 虫 P p e n e t r a n s 2 2 毁 芽 滑 刃 线 虫 A p h e l e n c h o i d e s b l a s t o p h t h o r u s 分 类 地 位 动 物 界 A n i m a l i a 线 虫 门 N e m a t o d a 色 矛 纲 C h r o m a d o r e a 色 矛 亚 纲 C h r o m a d o r i a 小 杆 目 R h a b d i t i d a 真 滑 刃 总 科 A p h e l e n c h o i d e a 滑 刃 科 A p h e l e n c h o i d i d a e 滑 刃 亚 科 A p h e l e n c h o i d i n a e 滑 刃 属 A p h e l e n c h o i d e s 2 2 1 形 态 特 征 描 述 雌 虫 整 个 虫 体 细 长 热 杀 死 后 虫 体 略 向 腹 面 弯 头 部 半 球 形 口 针 细 唇 区 缢 缩 不 明 显 中 食 道 球 卵 圆 形 食道球发达 尾部近圆柱形 尾端有尾尖突 图 2 雄 虫 未 见 2 2 2 分 子 生 物 学 结 果 分 析 提 取 搜 集 到 的 雌 虫 的 D N A 采 用 D 2 A D 3 B 引 物 对 扩 增 获 得 长 度 为 7 5 0 b p 左 右 的 产 物 片 段 测 序 并 B L A S T 比 对 结 果 表 明 该 雌 虫 序 列 与 G e n B a n k 中 已 登 录 的 毁 芽 滑 刃 线 虫 M K 9 8 1 8 9 4 1 序 列 相 似 性 为 9 9 因 此 鉴 定 其 为 毁 芽 滑 刃 线 虫 A b l a s t o p h t h o r u s 2 3 燕 麦 真 滑 刃 线 虫 A p h e l e n c h u s a v e n a e 分 类 地 位 动 物 界 A n i m a l i a 线 虫 门 N e m a t o d a 尾 感 器 纲 S e c e r n e n t e a 垫 刃 目 T y l e n c h i d a 真 滑 刃 总 科 A p h e l e n c h o i d e a 真 滑 刃 科 A p h e l e n c h i d a e 真 滑 刃 亚 科 A p h e l e n c h i n a e 真 滑 刃 属 A p h e l e n c h u s 2 3 1 形 态 特 征 描 述 雌 虫 头 部 低 平 口 针 较 细 无 基 部 球 中 食 道 球 大 直 径 近 体 宽 阴 门 横 裂 位 置 较 后 阴 门 唇 略 突 起 肛 门 前 唇 略 突 起 尾 短 稍 向 腹 面 弯 曲 末 端 钝 圆 图 3 雄 虫 未 见 2 3 2 分 子 生 物 学 结 果 分 析 提 取 搜 集 到 的 雌 虫 D N A 采 用 D 2 A D 3 B 引 物 对 a 雌 虫 整 体 b 雄 虫 整 体 c 头 部 d 雌 虫 尾 部 e 雄 虫 尾 部 a e n t i r e f e m a l e b o d y b e n t i r e m a l e b o d y c a n t e r i o r r e g i o n d f e m a l e p o s t e r i o r r e g i o n e m a l e p o s t e r i o r r e g i o n 图 1 穿 刺 短 体 线 虫 形 态 特 征 F i g u r e 1 M o r p h o l o g y o f P r a t y l e n c h u s p e n e t r a n s 图 2 毁 芽 滑 刃 线 虫 形 态 特 征 F i g u r e 2 M o r p h o l o g y o f A p h e l e n c h o i d e s b l a s t o p h t h o r u s a 雌 虫 整 体 b 头 部 c 雌 虫 尾 部 a e n t i r e f e m a l e b o d y b a n t e r i o r r e g i o n c f e m a l e p o s t e r i o r r e g i o n a b c d e a b c 2 8 0 7农 业 环 境 科 学 学 报 第 4 1 卷 第 1 2 期 扩 增 获 得 长 度 为 7 5 0 b p 左 右 的 产 物 片 段 测 序 并 B L A S T 比 对 结 果 表 明 该 雌 虫 序 列 与 G e n B a n k 中 已 登 录 的 燕 麦 真 滑 刃 线 虫 K P 3 1 3 8 3 8 1 序 列 相 似 性 为 9 9 4 3 因 此 鉴 定 其 为 燕 麦 真 滑 刃 线 虫 A a v e n a e 3 讨 论 近 年 来 我 国 每 年 大 量 从 荷 兰 等 国 家 引 进 优 良 的 百 合 种 球 在 国 内 种 植 真 菌 病 毒 线 虫 等 植 物 病 害 极 易 由 百 合 种 球 携 带 入 境 危 害 国 门 生 物 安 全 各 入 境 口 岸 在 加 大 查 验 力 度 的 同 时 口 岸 实 验 室 也 逐 步 提 高 了 线 虫 的 检 疫 鉴 定 水 平 在 重 点 关 注 检 疫 性 线 虫 的 同 时 一 些 非 检 疫 性 限 定 性 的 线 虫 也 逐 步 成 为 检 疫 工 作 的 重 点 关 注 对 象 1 本 文 在 进 境 百 合 种 球 中 检 出 3 种 寄 生 线 虫 其 中 穿 刺 短 体 线 虫 是 短 体 线 虫 属 线 虫 在 荷 兰 花 卉 种 球 进 境 植 物 检 疫 要 求 中 规 定 其 感 染 率 不 得 超 过 2 穿 刺 短 体 线 虫 的 寄 主 众 多 主 要 危 害 大 麦 小 麦 玉 米 马 铃 薯 烟 草 百 合 郁 金 香 等 多 种 经 济 作 物 和 花 卉 6 可 在 寄 主 的 组 织 根 部 或 土 壤 中 生 存 不 仅 危 害 寄 主 的 根 系 造 成 根 腐 症 状 甚 至 植 株 死 亡 还 可 传 播 一 些 致 病 的 植 物 寄 生 细 菌 真 菌 该 线 虫 耐 低 温 及 干 旱 的 环 境 可 随 进 境 种 球 远 距 离 传 播 口 岸 检 疫 时 应 重 点 关 注 其 感 染 率 目 前 短 体 属 线 虫 在 我 国 口 岸 检 疫 时 一 般 重 点 关 注 除 了 穿 刺 短 体 线 虫 伤 残 短 体 线 虫 P v u l n u s 咖 啡 短 体 线 虫 P c o f f e a e 艾 短 体 线 虫 P a r t e m i s i a e 和 玉 米 短 体 线 虫 P z e a e 以 外 的 非 中 国 种 类 由 于 短 体 线 虫 种 类 众 多 其 属 内 形 态 近 似 度 较 高 传 统 形 态 学 方 法 要 通 过 雌 虫 雄 虫 2 龄 幼 虫 的 特 征 及 测 量 值 鉴 定 但 口 岸 检 疫 时 获 得 的 线 虫 数 量 有 限 无 法 保 证 获 得 大 量 的 成 虫 1 3 因 此 仅 依 靠 形 态 学 鉴 定 无 法 保 证 结 果 的 准 确 性 需 要 结 合 分 子 生 物 学 方 法 的 测 序 结 果 进 一 步 确 认 1 4 2 毁 芽 滑 刃 线 虫 是 滑 刃 线 虫 属 线 虫 最 早 于 1 9 5 2 年 在 英 国 的 高 加 索 蓝 盆 花 中 发 现 该 线 虫 1 5 在 2 0 2 1 年 4 月 更 新 的 中 华 人 民 共 和 国 进 境 植 物 检 疫 性 有 害 生 物 名 录 中 滑 刃 属 的 检 疫 性 线 虫 有 菊 花 滑 刃 线 虫 A r i t z e m a b o s i 和 草 莓 滑 刃 线 虫 A f r a g a r i a e 2 种 滑 刃 属 线 虫 种 类 目 前 已 知 的 有 1 8 0 多 种 广 泛 分 布 于 土 壤 种 球 苗 木 中 本 研 究 中 分 离 到 的 毁 芽 滑 刃 线 虫 在 已 知 的 报 道 中 十 分 有 限 仅 我 国 2 0 2 0 年 4 月 首 次 从 荷 兰 进 境 的 毛 蕊 银 莲 花 中 检 出 毁 芽 滑 刃 线 虫 1 6 经 查 阅 文 献 该 线 虫 能 危 害 蔷 薇 科 如 草 莓 等 经 济 作 物 造 成 减 产 1 7 目 前 在 荷 兰 等 欧 洲 国 家 有 发 生 我 国 每 年 从 荷 兰 大 量 进 口 百 合 等 花 卉 种 球 该 线 虫 随 种 球 贸 易 传 入 风 险 极 大 由 于 我 国 尚 未 有 该 线 虫 的 危 害 及 分 布 情 况 报 道 各 口 岸 应 重 点 关 注 并 加 强 检 疫 进 行 风 险 评 估 3 燕 麦 真 滑 刃 线 虫 是 真 滑 刃 属 线 虫 是 一 种 取 食 真 菌 的 线 虫 1 8 在 世 界 各 地 广 泛 分 布 寄 主 广 泛 有 柑 桔 属 咖 啡 属 枇 杷 属 草 莓 烟 草 马 铃 薯 豌 豆 和 小 麦 等 经 济 作 物 1 9 目 前 尚 未 有 该 线 虫 对 植 物 造 成 严 重 危 害 的 报 道 有 待 进 一 步 研 究 4 结 论 本 研 究 在 进 境 的 荷 兰 百 合 种 球 中 分 离 并 鉴 定 出 3 种 寄 生 线 虫 分 别 是 穿 刺 短 体 线 虫 毁 芽 滑 刃 线 虫 燕 麦 真 滑 刃 线 虫 其 中 穿 刺 短 体 线 虫 分 离 到 少 量 的 雌 虫 和雄虫 且部分鉴定特征不明显 而毁芽滑刃线虫和燕 麦 真 滑 刃 线 虫 仅 分 离 到 雌 虫 成 虫 均 需 依 靠 形 态 学 初 步判断结合分子生物学方法 才能准确鉴定到种 参 考 文 献 1 赵 良 平 黄 正 秋 荷 兰 花 卉 业 发 展 的 成 功 经 验 及 其 借 鉴 J 林 业 经 济 2 0 0 1 7 3 9 4 4 Z H A O L P H U A N G Z Q T h e s u c c e s s f u l e x p e r i e n c e o f N e t h e r l a n d f l o w e r i n d u s t r y a n d i t s r e f e r e n c e J F o r e s t r y E c o n o m i c s 2 0 0 1 7 3 9 4 4 2 边 勇 刘 奇 志 赵 纪 文 等 进 口 百 合 种 球 携 入 植 物 线 虫 数 量 风 险 初 探 J 植 物 保 护 2 0 0 7 3 3 3 9 3 9 6 B I A N Y L I U Q Z Z H A O J 图 3 燕 麦 真 滑 刃 线 虫 形 态 特 征 F i g u r e 3 M o r p h o l o g y o f A p h e l e n c h u s a v e n a e a 雌 虫 整 体 b 头 部 c 雌 虫 尾 部 a e n t i r e f e m a l e b o d y b a n t e r i o r r e g i o n c f e m a l e p o s t e r i o r r e g i o n a b c 2 8 0 8张 寅 寅 等 荷 兰 进 境 百 合 种 球 中 线 虫 的 分 离 及 分 子 鉴 定 2 0 2 2 年 1 2 月 w w w a e s o r g c n W e t a l P i l o t s t u d y o n q u a n t i t y r i s k o f p h y t o p a r a s i t i c n e m a t o d e s b r o u g h t i n b y i m p o r t e d l i l y c o r m J P l a n t P r o t e c t i o n 2 0 0 7 3 3 3 9 3 9 6 3 刘 奇 志 边 勇 赵 纪 文 等 进 口 球 根 花 卉 携 入 线 虫 营 养 类 群 及 数 量 检 测 J 中 国 农 业 大 学 学 报 2 0 0 7 1 2 3 2 7 3 1 L I U Q Z B I A N Y Z H A O J W e t a l I n s p e c t i o n o n t r o p h i c g r o u p s a n d q u a n t i t y o f n e m a t o d e s c a r r i e d i n b y i m p o r t e d c o r m f l o w e r s J J o u r n a l o f C h i n a A g r i c u l t u r a l U n i v e r s i t y 2 0 0 7 1 2 3 2 7 3 1 4 邓 艳 凤 高 渊 陈 云 芳 江 苏 口 岸 进 境 种 苗 截 获 植 物 线 虫 疫 情 分 析 J 植 物 检 疫 2 0 2 0 3 4 6 5 6 6 0 D E N G Y F G A O Y C H E N Y F A n a l y s i s o n t h e n e m a t o d e i n t e r c e p t i o n f r o m i m p o r t e d s e e d l i n g s a t J i a n g s u p o r t s J P l a n t Q u a r a n t i n e 2 0 2 0 3 4 6 5 6 6 0 5 P O W E R S T N e m a t o d e m o l e c u l a r d i a g n o s t i c s F r o m b a n d s t o b a r c o d e s J A n n u a l R e v i e w o f P h y t o p a t h o l o g y 2 0 0 4 4 2 3 6 7 3 8 3 6 S U B B O T I N S A R A G S D A L E E J M U L L E N S T e t a l A p h y l o g e n e t i c f r a m e w o r k o f r o o t l e s i o n n e m a t o d e s o f t h e g e n u s P r a t y l e n c h u s N e m a t o d a E v i d e n c e f r o m t h e 1 8 S a n d D 2 D 3 e x p a n s i o n s e g m e n t s o f 2 8 S r i b o s o m a l R N A g e n e s a n d m o r p h o l o g i c a l c h a r a c t e r s J M o l e c u l a r P h y l o g e n e t i c s a n d E v o l u t i o n 2 0 0 8 4 8 4 9 1 5 0 5 7 D E L F R E Y E S A T R O C C O L I A e t a l M o l e c u l a r v a r i a b i l i t y a n d p h y l o g e n e t i c r e l a t i o n s h i p s a m o n g d i f f e r e n t s p e c i e s a n d p o p u l a t i o n s o f P r a t y l e n c h u s N e m a t o d a P r a t y l e n c h i d a e a s i n f e r r e d f r o m t h e a n a l y s i s o f t h e I T S r D N A J E u r o p e a n J o u r n a l o f P l a n t P a t h o l o g y 2 0 1 1 1 3 0 4 1 5 4 2 6 8 王 金