温州龙港市设施栽培番茄病毒病种类分析.pdf

2960 2024年第65卷第12期 收稿日期 2023 11 18 作者简介 余冬冬 1991 女 浙江温州人 农民技师 从事蔬菜病虫害防治工作 E mail 969889164 qq com 通信作者 王汉荣 1966 男 浙江杭州人 研究员 主要从事经济作物病害诊断及绿色防控技术研发 E mail ZJNKYJJBH hotmail com 文献著录格式 余冬冬 沈年桥 曾祥亮 等 温州龙港市设施栽培番茄病毒病种类分析 J 浙江农业科学 2024 65 12 2960 2963 DOI 10 16178 j issn 0528 9017 20231058 温州龙港市设施栽培番茄病毒病种类分析 余冬冬1 沈年桥2 曾祥亮1 王汉荣3 1 龙港市信实庄稼医院 浙江 温州 325805 2 苍南县农业技术推广站 浙江 温州 325800 3 浙江省农业科学院 植物保护与微生物研究所 浙江 杭州 310021 摘 要 近年来 随着温州市设施番茄产业迅速发展 番茄病毒病已成为限制番茄产业发展的重要病害之 一 本试验于2018 2023年从苍南县和龙港市采集疑似番茄病毒病的样品 并通过特异性引物进行分子生物学 检测 以分析番茄病毒病的种类 结果表明 2018 2023年 苍南县和龙港市番茄病毒病普遍发生 检出率平 均值均超过40 共检测出6种病毒 以黄瓜花叶病毒的检出率最高 试验结果可以为温州市番茄病毒病的防 治提供参考依据 关键词 番茄 病毒病 分子生物学 中图分类号 S641 2 文献标志码 A 文章编号 0528 9017 2024 12 2960 04 Analysis of virus disease species in facility cultivated tomatoes in Longgang City W enzhou YU Dongdong1 SHEN Nianqiao2 ZENG Xiangliang1 WANG Hanrong3 1 Longgang Xinshi Crop Hospital Wenzhou 325805 Zhejiang 2 Cangnan County Agricultural Technology Extension Station Wenzhou 325800 Zhejiang 3 Institute of Plant Protection and Microbiology Zhejiang Academy of Agricultural Sciences Hangzhou 310021 Zhejiang Abstract In recent years with the rapid development of the tomato industry in Wenzhou tomato virus diseases have become a significant constraint on the industry growth From 2018 to 2023 samples suspected of tomato virus diseases were collected from Cangnan County and Longgang City Molecular biological tests using specific primers were conducted to analyze the species of tomato virus diseases The results showed that from 2018 to 2023 tomato virus diseases were widespread in Cangnan County and Longgang City with average detection rates exceeding 40 A total of six viruses were identified with cucumber mosaic virus being the most frequently detected The findings provide a reference for the prevention and control of tomato virus diseases in Wenzhou Keywords tomato virus diseases molecular biological tests 番茄 Solanum lycopersicum 是全世界栽培最 为普遍的蔬菜之一 1 2021年我国番茄种植面积 约为111万hm2 产量为6 690万t 2 近年来 浙 江省的设施番茄产业飞速发展 进入21世纪后 浙江省的番茄生产区域发生了变化 由以前的浙 北 浙中等地 逐渐向东南沿海地区扩展 3 尤 其以温州地区的设施番茄产业表现最为突出 温州 市的设施番茄主要集中在龙港市 苍南县 平阳县 和瑞安市等区域 这些区域已经成为了我国最大的 秋冬季设施栽培番茄生产地 设施番茄的栽培面积 为2 400 3 467 hm2 据不完全统计 2021年 这 些区域的番茄种植面积达5 133 hm2 年产番茄 25 72万t 年产值达15亿元 在国内番茄的生产 供应中占有重要地位 4 随着设施栽培番茄的快 速发展 设施番茄上病虫害的发生也日益严重 番 茄黄化曲叶病毒病 tomato yellow leaf curl virus 余冬冬 等 温州龙港市设施栽培番茄病毒病种类分析2961 TYLCV 和台湾番茄曲叶病毒病 tomato leaf curl Tanwan virus ToLCTWV 等对龙港市和苍南县的 设施番茄生产造成了极其严重的影响 5 6 为了有 效地监测 预警和防控设施番茄病虫害的发生 促 进番茄产业的持续发展 2018 2023年 作者从 温州龙港市 苍南县等地的设施番茄采集了疑似病 毒病的病样 并进行了分子生物学鉴定 具体结果 总结如下 1 材料与方法 1 1 病样采集 疑似发病的番茄叶片和果实的采样时间在 2018 2023年 在温州龙港 苍南 平阳 瑞安 等地进行采集 病样症状主要表现为花叶 皱缩 畸形 黄化等 1 2 总RNA提取 RT PCR 材料 本试验所用的植物RNA提取试剂盒和 FastKing一步法反转录荧光定量试剂盒 SYBR Green 均购自天根生化科技有限公司 方法 采用Trizol法 参照试剂盒说明书 提 取番茄果实表皮总RNA 以总RNA为模版 参照 FastKing cDNA第一链合成试剂盒说明书 进行反 转录 第一步gDNA反应去除体系 10 L RNA 模板1 5 L 5 gDNA Buffer 2 L RNase Free H2O 6 5 L 42 变性 3 min 立即置于冰浴中 第二步反转录体系 10 King RT Buffer 2 L FastKing RT Enzyme Mix 1 L FQ RT Primer Mix 2 L RNase Free H2O 5 L 42 孵育15 min 95 变性 3 min 立即置于冰浴中 备用 采用8对特异性检测引物 7 9 进行PCR扩增 表1 分别检测黄瓜花叶病毒 番茄黄化曲叶病 毒 番茄花叶病毒 番茄褪绿病毒 番茄斑萎病 毒 番茄褐色皱纹果病毒和番茄不孕病毒 PCR 反应体系 取上述合成的cDNA模板2 L 加入 10 Taq Buffer 5 L dNTP Mixture 4 L DNA Polymerase 1 L ddH2O 38 L 扩增条件 预变 性94 3 min 94 30 s X 30 s 温度见 表1 72 1 min 共35次循环 最后 72 10 min 取PCR扩增产物在1 琼脂糖凝胶上进行 电泳 检测并拍照 表1 设施番茄病毒检测引物 Table 1 Facility cultivated tomato virus detection primers 检测病毒引物名称序列片段长度 bp退火温度 黄瓜花叶病毒 CMV CMVCPuF TCTCATGGATGCTTCTCCGCG 760 55 CMVCPuR CCGTAAGCTGGATGGACAACC 番茄黄化曲叶病毒 TYLCV PA TAATATTACCKGWKGVCCSC 550 52 PB TGGACYTTRCAWGGBCCTTCACA 番茄花叶病毒 ToMV ToMV F AAAGGTGGTTTTGGTGGATGGC 1 500 50 ToMV R TGCCTTGTAAGCTCACTGAAAAGAGGAC 番茄斑萎病毒 TSWV ToCVdR TGTCGAAAGTACCGCCACC 861 52 TSWVdF TCACTGTAATGTTCCATAGCAA 番茄褐色皱果病毒 TOBRFV TSWVdR AGAGCAATYGTGTCAATTTTATTC 680 57 ToBRFV F 5506 GTCCCGATGTCTGTAAGGCTTGC 番茄不孕病毒 TAV ToBRFV R 6186 GCAGGTGCAGAGGACCATTGTAA 657 57 TAVdF ATGGCCCAAAACGGTACGG 烟草花叶病毒 TMV TAVdR TCACACCGGGAGCGTTGAAG 600 46 TMVdF GATTCGTTTTAAATATGTCTTAC 蚕豆萎蔫病毒2号 BBWV2 TMVdR CTTCGATTTAAGTGGAGGGA 490 57 BBWV2dF AGRTATATGCTTGGGCAAGCGCATG 2 结果与分析 2 1 番茄病毒病发病症状 如图1所示 番茄感染病毒病后会出现叶片卷 缩 变黄 变脆 花叶 蕨叶和植株矮化等症状 发病果实表现为红白或黄白相间 严重者果实 僵缩 2 2 苍南县和龙港市的番茄病毒病检出率 2018 2023年 本研究调查了苍南县和龙港 市番茄病毒病种类鉴定和发生的情况 共收集番茄 疑似病毒病样品652份 其中 2018 2019年番 茄叶片疑似病毒病样品161份 番茄果实疑似病毒 病样品135份 2020 2023年番茄叶片疑似病毒 病样品186份 番茄果实疑似病毒病样品170份 2962 2024年第65卷第12期 图1 番茄病毒病症状 Fig 1 Symptoms of tomato virus disease 采用特异性引物对样品进行带病毒率检测 检测结 果表明 2018 2023年的平均值 苍南县和龙港 市的番茄病毒病的检出率均超过40 番茄病毒 病普遍发生且发病率较高 表2 3 2020 2023 年苍南县桥墩镇 沿浦镇和金乡镇的番茄叶片和果 实病毒病检出率均超过60 表2 2018 2019年苍南县和龙港市番茄 病毒病检出率 Table 2 Detection rate of tomato virus disease in Cangnan Country and Longgang City in 2018 2019 乡镇叶果检出数总数检出率 检出数总数检出率 苍南灵溪5 11 45 4 3 5 60 0 苍南宜山4 13 30 7 4 10 40 0 苍南桥墩9 17 52 9 3 11 27 2 苍南沿浦6 19 31 5 4 14 28 5 苍南藻溪5 15 33 3 6 13 46 1 苍南望里6 14 42 8 5 12 41 6 苍南钱库10 16 62 5 7 11 63 6 苍南金乡11 11 100 0 4 8 50 0 苍南马站5 10 50 0 9 14 64 2 苍南霞关6 12 50 0 8 13 61 5 龙港11 23 47 8 10 24 41 6 2 3 苍南县和龙港市番茄病毒病的种类和分布 共检测652份样品 6种病毒 Tobamovirus属的 TMV ToMV Begomovirus属的TYLCV Tospovirus属 的TSWV 以及CMV和BBWV2 存在多种病毒 复合侵染的现象 在这些为害番茄的病毒中 CMV的检出率最高 然后是BBWV2 TYLCV TMV TAV和ToBRFV未检出 图2 3 结论与讨论 近年来 随着蔬菜种植面积的扩大 种植模式 及气候的变化 番茄病毒病的发生越来越严重 对 表3 2020 2023年苍南县和龙港市番茄 病毒病检出率 Table 3 Detection rate of tomato virus disease in Cangnan Country and Longgang City in 2020 2023 乡镇叶果检出数总数检出率 检出数总数检出率 苍南灵溪11 20 55 0 2 12 16 6 苍南宜山13 23 56 5 6 11 54 5 苍南桥墩9 14 64 2 8 13 61 5 苍南沿浦10 11 90 9 10 15 66 6 苍南藻溪13 16 81 2 6 19 31 5 苍南望里10 18 55 5 5 22 22 7 苍南钱库11 16 68 7 6 24 25 0 苍南金乡12 15 80 0 7 11 63 6 苍南马站6 11 54 5 6 10 60 0 苍南霞关3 19 15 8 5 9 55 5 龙港11 23 47 8 10 24 41 6 图2 苍南县和龙港市的设施番茄上的 病毒种类及其检出率 Fig 2 Virus species and detection rate of facility cultivated tomato in Cangnan County and Longgang City 我国的蔬菜产业造成了严重的经济损失 8 Xu 等 10 对采自我国的170个番茄样本进行了小RNA 余冬冬 等 温州龙港市设施栽培番茄病毒病种类分析2963 测序 鉴定出22种主要病毒 其中 危害新疆番 茄的病毒主要有黄瓜花叶病毒 CMV 番茄花叶 病毒 ToMV 而且以二者复合侵染为主 11 刘 勇等 8 对全国的番茄病毒病样品进行了检测 共 检测出25种病毒 且存在多种病毒复合侵染的现 象 2019年 新型病毒 番茄褐色皱纹果病毒 tomato brown rugose fruit virus ToBRFV 严重危 害番茄果实 12 在蔬菜产业上 CMV已经超越 TMV成为第一大优势病毒 在全国范围内均可被 检测出 8 本研究发现 苍南县和龙港市的设施 番茄病毒病发生普遍 共检测出6种病毒 其中 CMV为优势病毒 当前我国蔬菜病毒病的发生区 域由局部地区逐渐向全国扩张 其中 通过昆虫或 种子传播的病毒 防控难度较大 8 作物品种单 一化 规模化种植以及介体昆虫的高效传播等有助 于病毒的复合侵染 在生产实践中 可进行多样化 品种种植 并在苗期做好防虫工作 8 参考文献 1 辛竹琳 崔彦娟 杨小薇 等 全球蔬菜产业现状及中国蔬 菜育种发展路径研究进展 J 分子植物育种 2022 20 9 3122 3132 2 张飞雪 周利利 周肖瑜 等 我国番茄秸秆废弃物资源化 利用研究进展 J 蔬菜 2023 2 28 32 3 杨新琴 杜叶红 林辉 等 浙江省番茄产业可持续发展对 策的探讨 J 浙江农业科学 2018 59 10 1739 1742 4 黄歆贤 赵佩欧 吴颖 等 温州市番茄产业可持续发展对 策探讨 J 浙江农业科学 2021 62 8 1539 1541 1544 5 张纯胄 温州发生一种新的严重危害蔬菜的病害 台湾番 茄曲叶病毒病 J 浙江农业科学 2007 48 3 351 6 李宝聚 周艳芳 许方程 等 李宝聚博士诊病手记 二十 四 浙江温州蔬菜病害调查 J 中国蔬菜 2010 9 26 28 7 王少立 谭玮萍 杨园园 等 山东省辣椒主要病毒种类的 分子检测与鉴定 J 中国农业科学 2017 50 14 2728 2738 8 刘勇 李凡 李月月 等 侵染我国主要蔬菜作物的病毒种 类 分布与发生趋势 J 中国农业科学 2019 52 2 239 261 9 李献锋 刘明航 魏霜 等 番茄褐色皱果病毒RT PCR检 测方法的建立与评价 J 病毒学报 2022 38 4 905 914 10 XU C X SUN X P TAYLOR A et al Diversity distribution and evolution of tomato viruses in China uncovered by small RNA sequencing J Journal of Virology 2017 91 11 e00173 17 11 杨海燕 崔百明 张强 等 新疆番茄病毒病检测及南方番 茄病毒全基因组序列测定与传播特性分析 J 植物保护 学报 2017 44 2 253 259 12 YAN Z Y MA H Y HAN S L et al First report of tomato brown rugose fruit virus infecting tomato in China J Plant Disease 2019 103 11 2973 责任编辑 杜琳