云南番茄褪绿病毒和番茄黄化曲叶病毒复合侵染的分子鉴定.pdf

园艺学报， 2018， 45 (3)： 552 560. Acta Horticulturae Sinica   552                                                doi： 10.16420/j.issn.0513-353x.2017-0735； http： /www. ahs. ac. cn  收稿日期 ： 2017 12 12； 修回日期 ： 2018 02 28 基金项目 ： 国家公益性行业（农业）科研项目（ 201303028） ；湖南省科技计划项目（ 2016RS2019） ；国家自然科学基金项目（ 31571981，31571982， 31501643）  * 通信作者  Author for correspondence（ E-mail： haoasliu163.com， xuguozhouuky.edu）  云南番茄褪绿病毒和番茄黄化曲叶病毒复合侵染的分子鉴定  刘  微1，史晓斌2，唐  鑫2，张  宇2，张德咏2，周序国1,*，刘  勇2,*（1湖南大学研究生院隆平分院，长沙  410125；2湖南农业科学院植物保护研究所，长沙  410125）  摘  要： 在云南省元谋县发现大量下部叶片褪绿黄化，顶叶卷曲畸形的番茄植株。将叶片采集带回实验室，采用番茄褪绿病毒（ Tomato chlorosis virus， ToCV）和番茄黄化曲叶病毒（ Tomato yellow leaf curl virus， TYLCV）的特异性引物分别扩增得到 774 和 400 bp 的目标条带，测序比对发现其与 ToCV 的KR184676.1 和 TYLCV 的 FJ012359.1 序列相似度均为 99%，确认这两条带对应的两种病毒分别为 ToCV和 TYLCV，明确该番茄植株被 ToCV 和 TYLCV 复合侵染。同时发现云南地区有 B 型和 Q 型两种烟粉虱存在，且 Q 型的比例高于 B 型，二者均可携带 ToCV 和 TYLCV。 ToCV 首次在云南省发现，其由沿海向内陆蔓延的过程中与 TYLCV 的复合侵染已蔓延至西南地区，值得高度重视和警惕。  关键词： 番茄；番茄褪绿病毒；番茄黄化曲叶病毒；烟粉虱；复合侵染  中图分类号： S 641.2       文献标志码： A        文章编号： 0513-353X（ 2018） 03-0552-09 Molecular Identification of Tomato chlorosis virus and Tomato yellow leaf curl virus in Yunnan Province LIU Wei1， SHI Xiaobin2， TANG Xin2， ZHANG Yu2， ZHANG Deyong2， ZHOU Xuguo1,*， and LIU Yong2,*（1College of Longping， Graduate School of Hunan University， Changsha 410125， China；2Hunan Academy of Agricultural Sciences， Hunan Plant Protection Institute， Changsha 410125， China）  Abstract： The tomato leaves that displayed symptoms of the chlorosis and yellowing on the lower leaves and symptoms of the curl and deformity on the upper leaves were found and collected in Yunnan. The target DNA band of Tomato chlorosis virus（ ToCV） and Tomato yellow leaf curl virus（ TYLCV） ，774 bp and 400 bp， respectively， was amplified using the special primer for virus. The target PCR products were sequenced and compared with the NCBI nucleotide database via the BLAST tools. The result showed that the sample had 99% similarity with the KR184676.1 of ToCV and the FJ012359.1 of TYLCV. We can confirm that the tomato was simultaneously infected by the ToCV and TYLCV. Meanwhile， we found that in Yunnan Province Bemisia tabaci B and Q coexisted， and the proportion of Q was higher than B. Both of B and Q could carry ToCV and TYLCV. This is the first report of ToCV in Yunnan Province. In the spread process from coast to interior areas， the co-infection of ToCV and TYLCV has transmitted to the Southwest of China， and we should pay high attention to the trend of the virus. 刘   微，史晓斌，唐   鑫，张   宇，张德咏，周序国，刘   勇 . 云南番茄褪绿病毒和番茄黄化曲叶病毒复合侵染的分子鉴定 . 园艺学报， 2018， 45 (3)： 552 560.                                                                                       553 Keywords： tomato； Tomato chlorosis virus； Tomato yellow leaf curl virus； Bemisia tabaci；co-infection 番茄褪绿病毒（ Tomato chlorosis virus， ToCV）属于长线形病毒科（ Closteroviridae） ，毛形病毒属 （ Crinivirus） ， 是由烟粉虱传播的双分体单链 RNA 病毒。 ToCV 基因组由两条 RNA 链组成， RNA1编码与病毒复制相关的蛋白， RNA2 则编码与运动、侵染植物、病毒包装以及介体传播相关的蛋白（ Wisler et al.， 1998； Wintermantel et al.， 2005； Lozano et al.， 2006） 。 ToCV 在番茄上发病的典型症状包括下部叶片褪绿发黄，但叶脉保持绿色。除番茄外， ToCV 可以侵染南瓜、甜椒、烟草和茄子等 7 科 25 种植物（ Wintermantel & Wisler， 2006； Sun et al.， 2016） 。 ToCV 最早在佛罗里达州被发现（ Wisler et al.， 1998） ，随后在欧洲（ Lozano et al.， 2007） 、以色列（ Segev et al.， 2004） 、日本（ Hirota et al.， 2010） 、韩国（ Kil et al.， 2015）和巴西（ Barbosa et al.， 2008）等地被报道，中国于2004 年首次在台湾（ Tsai et al.， 2004）发现，随后在北京、河北、河南、山东等地也检测到了 ToCV（宋晰  等， 2013； Zhao et al.， 2013， 2014；郑慧新  等， 2016） 。且 ToCV 发病率高，传播迅速（周涛  等， 2014） 。  番茄黄化曲叶病毒（ Tomato yellow leaf curl virus， TYLCV）属于双生病毒科（ Geminiviridae）菜豆金色花叶病毒属（ Begomovirus） 。 TYLCV 是由烟粉虱传播的单链 DNA 病毒。番茄被 TYLCV侵染后表现为叶片卷曲、整株矮化，产量降低。 TYLCV 最早在以色列被发现，目前已经分布在世界各大洲蔬菜种植区（ Pic et al.， 1996） 。 TYLCV 仍是番茄生产上最具毁灭性的病毒。中国于 2006年首次在上海检测到 TYLCV（ Wu et al.， 2006） ，随后其向北扩散到江苏省、浙江省、山东省、北京市和河北省等地， 2009 2010 年在江苏、河南、山东等地严重爆发（宋晰  等， 2013） ，给番茄种植造成巨大的损失。  ToCV 和 TYLCV 都不能靠摩擦接种，只能由韧皮部接种，所以具有刺吸式口器的烟粉虱在这两种病毒的传播过程中发挥着重要作用（ Gilbertson et al.， 2015） 。 ToCV 早期症状容易与缺素症混淆；病毒侵染初期症状不明显，难以及时发现（郑慧新  等， 2016） ；媒介昆虫难以防治；中间寄主杂草难以控制；无抗病番茄品种这 5 个主要原因使得 ToCV 不断在新蔬菜种植区被发现，并且难以治理，而 TYLCV 仍在许多地区爆发危害，这两种病害的复合侵染导致病害的发生日趋严重。在云南的番茄采样调查中，笔者发现，烟粉虱在番茄种植地大量聚集，同时发现番茄上两种病毒大面积复合侵染，二者之间存在着密切的联系。  1  材料与方法  1.1  材料  供试植物：表现出感病症状的罗拉番茄叶片取自云南省元谋县番茄种植基地。该品种对TYLCV 为抗病，而对 ToCV 的抗性没有报道。采集番茄样品 15 份用于病毒鉴定。  供试昆虫：烟粉虱取自种植基地发病的番茄叶片。  1.2  番茄 ToCV 的鉴定  每个番茄样品取 0.2 g 用于提取 RNA， 步骤参照华越洋植物多糖多酚植物 RNA 提取试剂盒操作说明书。 RNA 提取后置于 80 保存， 以备后续试验使用。 RNA 提取后反转录成 cDNA 置于 20 Liu Wei， Shi Xiaobin， Tang Xin， Zhang Yu， Zhang Deyong， Zhou Xuguo， Liu Yong. Molecular identification of Tomato chlorosis virus and Tomato yellow leaf curl virus in Yunnan Province. 554                                                                        Acta Horticulturae Sinica， 2018， 45 (3)： 552 560. 保存。 PCR 采用 ToCV 特异性引物 R（ 5-AAAGCTTTTAGCAACCAGTTATCGATGC-3）和 F（ 5-GGG ATCCATGGAGAACAGTGCTGTTGCA-3） 。 引物为自己设计， 对应 ToCV RNA 2 号链， 扩增 ToCV CP（ Coat protein）基因全长序列，扩增产物序列长度为 774 kb。  PCR 体系为 20 L： mix 10 L，上、下游引物各 1 L，模板 1 L， dd H2O 7 L。 PCR 程序为：94 预变性 5 min，随后 94 变性 15 s， 60 退火 30 s， 72 延伸 1 min， 35 次循环，最后 72 延伸 10 min。取 5 L 产物进行琼脂糖凝胶电泳检测，产物纯化回收送北京奥科鼎盛生物科技有限公司测序分析。  1.3  番茄 TYLCV 的鉴定  每个番茄样品取 0.2 g 用于植物 DNA 的提取，提取方法参照十六烷基三甲基溴化铵（ CTAB）法操作。 DNA 提取后置于 20 保存用于后续试验。 PCR 过程采用 TYLCV 特异性引物 R（ 5-AG TCACGGGCCCTTACA-3）和 F（ 5-ATACTTGGACACCTAATGGC-3） 。引物为自己设计，对应TYLCV 的 AV 2 基因（ Shi et al.， 2016） 。 PCR 体系为 20 L： mix 10 L，上、下游引物各 1 L，模板 1 L， ddH2O 7 L。 PCR 程序为： 95 预变性 3 min，随后 94 变性  15 s， 60  1 min， 72 延伸 1 min， 30 次循环，最后 72 延伸 15 min。取 5 L 产物进行琼脂糖凝胶电泳检测， PCR 产物纯化回收送北京奥科鼎盛生物科技有限公司测序分析。  1.4  烟粉虱 ToCV 的检测  单头烟粉虱 RNA 提取采用 TRIzol 法并略有改动。取单头烟粉虱置于 RNase free 离心管中，使用已去 RNase 的研磨棒充分研磨后加入 1 mL TRIzol 并振荡 15 s，室温下静置 5 min，然后加入 300 L 氯仿，振荡 1 min 之后置于冰上静置 2 min， 4  12 000 r min-1离心 15 min。取上清液 400 L移到新的去除 R Nase 的新离心管中，并加入等体积的异丙醇轻轻颠倒混匀 4 6 次， 20 静置 30 min 后 12 000 r min-1离心 10 min。倒掉上清液，用新配的 75%乙醇溶液清洗管壁后 8 000 r min-1离心 3 min，重复操作 1 次。最后将离心管倒置于室温下晾干 5 min。取 10 L 经 DEPC 处理过的水溶解 RNA，将 RNA 提取完成后采用康为反转录试剂盒合成 cDNA，并置于 20 保存备用。  PCR 过程采用 ToCV 特异性引物 R（ 5-AAAGCTTTTAGCAACCAGTTATCGATGC-3）和 F（ 5-GGGATCCATGGAGAACAGTGCTGTTGCA-3）进行扩增，取 5 L 扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳检测。 PCR 产物纯化回收送北京奥科鼎盛生物科技有限公司测序分析。  1.5  烟粉虱 TYLCV 的检测  烟粉虱单头 DNA 提取采用蛋白酶 K 法，取 3 L 蛋白酶 K 于封口膜上，每只烟粉虱置于膜上研磨成匀浆后移至 PCR管加入 10 mg mL-1的树脂溶液混匀， 然后置于 37 孵育 1 h， 96  10 min。  PCR 体系采用 TYLCV 特异性引物 R（ 5-AGTCACGGGCCCTTACA-3）和 F（ 5-ATACTTGG ACACCTAATGGC-3）。 PCR 体系为 20 L： mix 10 L，上、下游引物各 1 L，模板 1 L， dd H2O 7 L。 PCR 程序为： 95 预变性 3 min，随后 94 变性 15 s， 60  1 min， 72 延伸 1 min， 30 次循环，最后 72 延伸 15 min。取 5 L 扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳检测， PCR 产物纯化回收送北京奥科鼎盛生物科技有限公司测序分析。  1.6  烟粉虱生物型鉴定  利用烟粉虱线粒体细胞色素氧化酶基因（ mtCOI）设计的一对引物，经 PCR 扩增后酶切，根据刘   微，史晓斌，唐   鑫，张   宇，张德咏，周序国，刘   勇 . 云南番茄褪绿病毒和番茄黄化曲叶病毒复合侵染的分子鉴定 . 园艺学报， 2018， 45 (3)： 552 560.                                                                                       555 酶切结果，可分为 B 型与 Q 型，能被切开且电泳图有两个条带的即为 Q 型烟粉虱， 不能被切开在电泳图上只有 1 个条带的即为 B 型烟粉虱。  烟粉虱单头 DNA 的提取：取 3 L 蛋白酶 K 于封口膜上，每只烟粉虱置于膜上研磨成匀浆后移至 PCR 管加入 10 mg mL-1的树脂溶液混匀，然后置于 37 孵育 1 h， 96  10 min。 PCR 体系为20 L： mix 10 L，上、下游引物各 1 L，模板 1 L， ddH2O 7 L。 PCR 程序： 95 预变性 5 min；随后 95 变性 15 s， 53  45 s， 72 延伸 1 min， 35 次循环，最后 72 延伸 10 min。 PCR 产物取5 L 进行琼脂糖凝胶电泳检测。  酶切体系：酶（ Ase） 0.5 L，缓冲液（ NEBuffer 3.1） 2 L， ddH2O 7.5 L， PCR 产物 10 L，混匀后置于 37  3 4 h。取 5 L 酶切产物进行琼脂糖凝胶电泳检测。  烟粉虱每次取 50 头进行检测，重复 3 次。  1.7  ToCV 与 TYLCV 基因进化分析  经凝胶电泳检测后，将 ToCV 和 TYLCV 的 PCR 产物纯化回收后送至北京奥科鼎盛生物科技有限公司测序分析，测序后在 NCBI 上进行 BLAST 比对后选取云南以外其他区域病毒分离物采用MEGA 5 软件构建进化关系树。  2  结果与分析  2.1  番茄植株田间发病症状  在元谋县番茄种植基地发病田间观察到，已开花的番茄植株，果实坐果数量明显减少；已坐果的果实，成熟时间延长，许多果实出现畸形；果实成熟期观察到植株顶部叶片尖端向内卷曲，并且皱缩畸形，植株下部叶片叶脉间出现褪绿黄化现象。同时观察到番茄植株的叶片背面烟粉虱聚集很多，并且可以看到烟粉虱的若虫。番茄株间、行间、田块周边的杂草很多，一部分杂草表现出叶片黄化，并且能观察到烟粉虱的活动。  综合以上情况，可以初步判断番茄植株已经感染 ToCV 和 TYLCV 中的一种或两种。  2.2  番茄 ToCV 的鉴定  采自田间的带病征的 15 株番茄叶片样品，经 RT-PCR 检测，均检测出 774 bp 的 ToCV 目标条带（图 1），说明 ToCV 感染率 100%。  图 1  云南 15 株番茄样品（ 1 15） RT-PCR 鉴定 ToCV 结果  M： DNA marker； N：阴性对照； P：阳性对照。  Fig. 1  RT-PCR amplification of ToCV in tomato samples（ 1 15） from Yunnan M： DNA marker； N： Negative control； P： Positive control.  2.3  番茄 TYLCV 的鉴定  采自田间的带病征的 15 株番茄叶片样品经 PCR， 均检测出 400 bp 的 TYLCV 目标条带 （图 2） ，Liu Wei， Shi Xiaobin， Tang Xin， Zhang Yu， Zhang Deyong， Zhou Xuguo， Liu Yong. Molecular identification of Tomato chlorosis virus and Tomato yellow leaf curl virus in Yunnan Province. 556                                                                        Acta Horticulturae Sinica， 2018， 45 (3)： 552 560. 说明 TYLCV 感染率 100%。  图 2  云南 15 株番茄样品（ 1 15） TYLCV 的 PCR 鉴定结果  M： DNA marker； N：阴性对照； P：阳性对照。  Fig. 2  PCR amplification of TYLCV in tomato samples（ 1 15） from Yunnan  M： DNA marker； N： Negative control； P： Positive control. 2.4  烟粉虱 ToCV 的鉴定  从田间取回的烟粉虱中随机取 8 头，经 RT-PCR 鉴定（图 3） ， 8 头烟粉虱中有 3 头具有明显的目标（ ToCV）条带（ 774 bp） 。  图 3  云南田间烟粉虱（ 1 8） ToCV 的 RT-PCR 鉴定结果  M： DNA marker； N：阴性对照； P：阳性对照。  Fig. 3  RT-PCR amplification of ToCV in whitefly（ 1 8） from Yunnan M： DNA marker； N： Negative control； P： Positive control. 2.5  烟粉虱 TYLCV 的鉴定  从田间取回的烟粉虱中随机取 8 头经 PCR 鉴定（图 4） ， 8 头烟粉虱中能观察到 6 头烟粉虱具有明显的目标（ TYLCV）条带（ 400 bp） 。  图 4  云南田间烟粉虱（ 1 8） TYLCV 的 PCR 鉴定结果  M： DNA marker； N：阴性对照； P：阳性对照。  Fig. 4  PCR amplification of TYLCV in whitefly（ 1 8） from Yunnan M： DNA marker； N： Negative control； P： Positive control. 2.6  烟粉虱生物型鉴定  烟粉虱经 PCR 扩增后的酶切鉴定结果显示，该基地的烟粉虱为混合发生。对此次调查中的烟粉虱随机取样调查生物型，每组 50 头， 3 次重复， B 型烟粉虱的数量分别是： 20、 15、 18 头； Q 型烟粉虱的数量分别是 30、 35、 32 头。统计表明该基地烟粉虱中 B 型烟粉虱占比约为 35%， Q 型烟粉虱占比约为 65%（表 1） ，可以初步推测该基地 Q 型烟粉虱为优势种群。  根据 B 型和 Q 型烟粉虱的 mtCOI 基因扩增后能被 Ase酶切的差异来快速鉴定 B 型和 Q 型烟粉虱。 B 型烟粉虱 mtCOI 扩增后酶切鉴定图如图 5 所示，其酶切后条带仍为单一条带； Q 型烟粉虱mtCOI 扩增后酶切鉴定图如图 6 所示，其酶切后具有两条大小不同条带。图 5 和图 6 的酶切鉴定图都是选取了具有目的条带的，各 20 头烟粉虱。  刘   微，史晓斌，唐   鑫，张   宇，张德咏，周序国，刘   勇 . 云南番茄褪绿病毒和番茄黄化曲叶病毒复合侵染的分子鉴定 . 园艺学报， 2018， 45 (3)： 552 560.                                                                                       557 表 1  云南烟粉虱样品生物型鉴定  Table 1  The statistics table of the whitefly biotype from Yunnan 分组  Trait 总数  Total B 型烟粉虱的数量The number of B Q 型烟粉虱的数量  The number of Q B 型比例 /% The ratio of B Q 型比例 /% The ratio of Q 1 50 20 30 40 60 2 50 15 35 30 70 3 50 18 32 36 64 平均值 Average value 50 18 32 35 65 图 5  云南 B 型烟粉虱（ 1 20）生物型鉴定结果  M： DNA marker； N：阴性对照； P：阳性对照。  Fig.5  The detection result of the B biotype whitefly（ 1 20） from Yunnan   M： DNA marker； N： Negative control； P： Positive control. 图 6  云南 Q 型烟粉虱生物型鉴定结果  M： DNA marker； N：阴性对照； P：阳性对照。  Fig. 6  The detection result of the Q biotype from Yunnan   M： DNA marker； N： Negative control； P： Positive control. 2.7  云南番茄 ToCV 基因进化分析  由图 7 可以看出，云南番茄 ToCV 分离物与中国山东（ KC812623.1） 、北京（ KT751008.1）等省市、日本（ AB513443.1） 、葡萄牙（ DQ335134.1） 、希腊（ HG380090.1）等国家分离物的亲缘关系较近，共同形成一个大的分支。番茄侵染性褪绿病毒（ TICV）与 ToCV 为同属病毒，二者的症状表现十分相似，很难区分，需要通过鉴别寄主进行区别（ Hanssen et al.， 2010） ，目前在国内未发现TICV 的报道（吴淑华  等， 2016） 。  图 7  采用 MEGA 5 软件构建的云南 ToCV 的基因进化树  Fig. 7  Phylogenetic tree of CP genes of ToCV isolates from Yunnan， using MEGA 5 software Liu Wei， Shi Xiaobin， Tang Xin， Zhang Yu， Zhang Deyong， Zhou Xuguo， Liu Yong. Molecular identification of Tomato chlorosis virus and Tomato yellow leaf curl virus in Yunnan Province. 558                                                                        Acta Horticulturae Sinica， 2018， 45 (3)： 552 560. 2.8  云南番茄 TYLCV 基因进化分析  由图 8 可见，云南番茄 TYLCV 分离物独立形成 1 个分支，与中国上海（ HM222427.1） 、墨西哥（ FJ012359.1）的 TYLCV 亲缘关系较近，并且位于同一个大的分支。豆矮花叶病毒（ BDMV）与 TYLCV 同属不同种，属于 DNA 病毒，在感染的不同阶段对植物造成不同的影响，会造成严重的发育迟缓以及植株矮化，叶片歪曲、花叶的现象，造成大面积减产。  图 8  采用 MEGA 5 软件构建的云南 TYLCV 的基因进化树  Fig. 8  Phylogenetic tree of AV2 gene of TYLCV isolates from Yunnan using MEGA 5 software 3  讨论  此次试验检测到云南省番茄存在 ToCV 和 TYLCV 复合侵染的情况，且复合侵染比例为 100%。TYLCV 发病迅速，前期症状明显（ Pic et al.， 1996） ，若能及时除去发病幼苗，可降低损失，但是ToCV 前期症状不明显（周涛  等， 2014） ，与植物缺素症状类似，在早期并不能表现出明显的症状，在番茄进入开花结实期才能观察到明显的染病情况， 此时 ToCV 病毒粒子已经在植株体内积聚很多，同时在媒介昆虫存在的情况下已经完成对周边植株的侵染，给病害早期防治带来很大困难（ Orfanidou et al.， 2016） 。  媒介昆虫是植物病毒的传播载体，昆虫病毒植物之间具有复杂的连系（ Dietzgen et al.，2016） 。感病植物能吸引昆虫取食（ Fang et al.， 2013； Moreno-Delafuente et al.， 2013） ，同时 TYLCV与烟粉虱互作能降低植株防御能力， 有利于烟粉虱的取食和病毒的传播 （ Shi， 2013， 2014a， 2014b） 。在海南的监测发现感染 ToCV 叶片上的主要为 Q 型烟粉虱，且带毒率较高（ Tang et al.， 2017） 。本试验中除了发现病毒复合侵染之外，还发现在云南 B 型和 Q 型烟粉虱同时存在，二者均可携带并传播病毒，且 Q 型烟粉虱的比例高于 B 型烟粉虱。已有研究表明，农药的使用是造成 Q 型烟粉虱在中国大爆发的原因之一（ Pan et al.， 2015） ，因此在防治番茄病毒病的过程中，对烟粉虱的防治应注意农药的合理使用，烟粉虱抗药性的产生将会加大对病毒病的防治难度。  郑慧新等（ 2016）报道，在中国 ToCV 已经由山东、北京、河北为中心向周围辐射的趋势传播到各地。亲缘关系树分析显示，云南 ToCV 和 TYLCV 分别与山东的和上海的有较近的亲缘关系，推测云南的 ToCV 和 TYLCV 可能与山东和上海的种苗调运有关。 TYLCV 和 ToCV 的复合侵染 2014年在山东首次发现（赵黎明  等， 2014） ， 2016 年在江苏再次发现（吴淑华  等， 2016） 。在不到两年的时间， TYLCV 和 ToCV 的复合侵染已经迅速从华东地区扩散到西南地区，除了烟粉虱的传播之刘   微，史晓斌，唐   鑫，张   宇，张德咏，周序国，刘   勇 . 云南番茄褪绿病毒和番茄黄化曲叶病毒复合侵染的分子鉴定 . 园艺学报， 2018， 45 (3)： 552 560.                                                                                       559 外，这种复合侵染快速传播的现象可能与农业经济交流活动相关。  当前，中国已经展开 TYLCV 的抗性育种工作，得到了高抗病性品种，对减轻 TYLCV 造成的损失有明显的效果；  ToCV 的抗病性育种工作正在开展，但目前还没有抗 ToCV 的品种。所以加强对 ToCV 的预防和检测，控制烟粉虱的数量仍然是控制 ToCV 爆发的关键。病毒的复合侵染通常表现出协生作用（ Gil-Salasa et al.， 2012） ，例如 TSWV 和 ToCV 同时侵染番茄时存在协生现象（ Garca-Cano et al.， 2006） ，但是对于 TYLCV 和 ToCV 的复合侵染后是否存在协生的情况， ToCV的侵染会不会造成寄主植株对 TYLCV 的抗性减弱，存在协生的情况下所造成的损失严重与否，这些并未见报道，其潜在的威胁值得研究。  本研究中发现 ToCV 和 TYLCV 的复合侵染已经扩散到云南省。云南省是重要的育种和种植基地，生态、生物多样性丰富， ToCV 和 TYLCV 寄主广泛，能在杂草寄生并进行循环侵染。降低媒介昆虫数量、控制田间杂草数量仍是目前治理植物病毒病的重要方式，对做好病毒病的防控工作十分重要。  References  Barbosa J C， Teixeira A P M， Moreira A G， Camargo L E A， Bergamin Filho A， Kitajima E W， Rezende J A M. 2008. 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