7种杀菌剂对番茄早疫病的防效试验.pdf

中国农学通报 2019,35(25):147-153ChineseAgricultural Science Bulletin0 引言番茄为茄科番茄属植物，色泽口感俱佳且深受人们喜爱，富含多种营养成分，如钙、镁、磷、铁、果胶、维生素C等，对于高血脂症具有益处且有一定的抗癌功能1，另外转基因技术的运用大大增加了番茄的优良品种2-3。番茄早疫病是一种由茄链格孢菌引起的病害，茄链格孢菌还可以引起马铃薯、辣椒以及茄子等多种作物发病，严重时番茄早疫病引起的减产可达30%4。番茄早疫病可侵害花、叶、茎、果实，多发生在苗期和成株期。叶片受害初期呈现针头大小的小黑点，后扩展成轮纹斑，晕环浅绿色或黄色，中部呈现同心轮纹，轮纹表面着生黑色霉状物，即分生孢子梗及分生孢子。茎部染病时多在分枝处产生褐色的不规则圆形病斑，表面或有灰黑色霉状物5。茄链格孢菌主要以菌丝或分生孢子作为越冬方式寄生于病残体或种子上，可直接由气孔、皮孔或表皮侵入，形成初生孢子，经过23天潜育期后出现病斑，并能多次重复侵染6。番茄早疫病的发生和流行，与栽培湿度、温度、降雨量等均有关系。番茄生长期间，温度15左右，相对第一作者简介：王芳，女，1964年出生，山东莱阳人，副教授，硕士，主要从事植物真菌病害研究。通信地址：528225佛山市南海区狮山镇广云路33号广东佛山科学技术学院（南海大沥仙溪湖）食品科学与工程学院，E-mail：1940480985qq.com。收稿日期：2018-06-02，修回日期：2018-09-20。7种杀菌剂对番茄早疫病的防效试验王 芳，黄少贞，胡玲玲（佛山科学技术学院，广东佛山528000）摘 要：旨在通过测定7种杀菌剂对番茄早疫病的防效筛选对番茄早疫病的最优菌剂。对番茄早疫病叶上的病原菌进行分离和提纯，鉴定出病叶上的病原菌为茄链格孢Alternaria solani；采用含毒培养基菌丝生长速率法，测定7种杀菌剂对番茄茄链格孢菌的防效。结果表明：药后48 h，世高和施加乐的EC50值分别为0.27、0.81 mg/L，毒力指数最大，对茄链格孢菌有良好的防治作用效果；唑菌胺酯和克菌星的防效良好，EC50值为1.29、1.54 mg/L；扑海因和敌力脱也有较高的防效，EC50值为2.07、2.79 mg/L；大生防效较低，EC50值为5.17 mg/L。药后72 h，各药剂对番茄茄链格孢菌的防效与48 h相似。关键词：番茄早疫病；茄链格孢菌；防效；毒力指数中图分类号：S435.131 文献标志码：A 论文编号：casb18060005Control Effect of 7 Fungicides to Tomato Early BlightWang Fang, Huang Shaozhen, Hu Lingling(Foshan University, Foshan Guangdong 528000)Abstract: The paper aims to determine the control effect of 7 fungicides on tomato early blight and screeningthe best fungicide for it. The experiment was conducted to isolate and purify the pathogen on tomato diseasedleaves, and the pathogen was identified as Alternaria solanil. The growth rate method was used to determine thecontrol effect of 7 fungicides on Alternaria. The results showed that after 48 h, the EC50 of Difeno Conazde andPvrimethanil was 0.27 and 0.81 mg/L, respectively, the virulence index was extremely high, and had greatcontrol effect on Alternaria; the control effect of Flusilazole and Kresoxim-mythyl were fine, their EC50 was1.29 and 1.54 mg/L, respectively, the control effect of Iprodione and Propiconazole were good; their EC50 was2.07 and 2.79 mg/L; the control effect of Mancozeb was poor and the virulence index was low, the EC50 was5.17 mg/L. The control effect of the seven fungicides was similar between 72 h and 48 h.Keywords: tomato early blight; Alternaria solanil; control effect; virulence index中国农学通报 http:/www.casb.org.cn湿度80%以上，病害开始流行。若遇到平均温度在2030并持续5天甚至以上时，发病率更高，病情发展速度快。另外每年雨季到来的时间，降水量的多少、次数及分布情况，均直接影响着田间栽培环境的湿度变化，从而影响早疫病的发生与流行7。茄链格孢可引起番茄的早疫病，链格孢属(Alterotinaria)属真菌门半知菌纲黑霉科，是引起植物病害的真菌类群之一，其中近90%的种能够兼性寄生于不同种植物，引起包括玉米、小麦、烟草、马铃薯、番茄等十几种作物发病，造成田间和产后损失8。链格孢属又分为40多种，如粗链格孢(A. crassa)、黑链格孢(A. atrans)、束梗链格孢(A. bokurai)等9。同时链格孢属真菌能够产生几十种有毒链格孢毒素，这些毒素是致使植物发生病害的主要致病因子。作用于植物后导致植物出现病状，甚至人与动物摄入含有链格孢毒素的食物还可引起急性或慢性中毒10。笔者通过采集番茄早疫病病叶，培养并鉴定病原菌，并通过测定7种杀菌剂对于病原菌的抑制效果，筛选出最优的杀菌剂。同时对如何防治番茄早疫病提出一些参考建议。1 材料与方法1.1 材料1.1.1 供试药剂 25%敌力脱EC（青岛奥迪斯生物科技有限公司）；10%世高EC（京博农化科技股份有限公司）；40%克菌星EC（青岛奥迪斯生物科技有限公司）；50%扑海因WP（山东农丰化工有限公司）；60%唑菌胺酯WP（海南博士威农用化学有限公司）；70%施加乐WP（山东东泰化工有限公司）；80%大生WP（美国陶氏益农公司）。1.1.2 供试材料 在佛山市南海区大沥镇兴贤采集番茄病叶，分离培养番茄病叶上的病菌作为本次的试验材料。1.2 试验方法选择有典型病斑的病叶，对病斑进行观察记录并拍照。用组织培养法沿病斑边缘分离病菌并培养11，纯化后挑取病菌菌丝制作玻片，观察分生孢子梗以及分生孢子形态。1.2.1 培养基的制作 按配方马铃薯200 g、葡萄糖20 g、水1000 mL，琼脂1520 g配制1000 mL PDA培养基，先将马铃薯去皮切成细丝，放入锅中煮至软烂；冷却后用纱布过滤，去除马铃薯残渣，再剪入琼脂条，煮至琼脂溶化，最后加入葡萄糖，充分溶解后定容至1000 mL12-14。配好后高压灭菌，放置备用。1.2.2 病原菌的分离与纯化 沿病斑边缘对病叶进行分离，将分离的病组织接种于PDA培养基中在室温下培养，并纯化病原菌。1.2.3 病原菌鉴定 用ScopeImage 9.0软件在尼康显微镜下对孢子梗、孢子进行拍照，根据形态结构与显微特征等参照相关文献15-16进行鉴别。1.2.4 防效试验 用含毒培养基生长速率法来进行防效试验。（1）母液配置。100倍浓度。（2）含毒培养基制作。取99 mL培养基，加入1 mL供试试剂，充分摇匀，平均倒入培养皿中。（3）接菌。先将孔径为0.5 mm的打孔器和接种环在酒精灯上灼烧消毒，在酒精灯5 cm范围内放凉，再挑取菌丝接种于培养基上，在25下恒温培养17，设6个重复。（4）结果记录。48 h后记录菌落直径并用DPS软件18进行数据统计与分析，计算出EC50值，根据EC50值计算出杀菌剂的毒力指数。防治效果=对照组菌落直径-处理组菌落直径对照组菌落直径-0.5100% (1)毒力指数=标准药剂EC50供试药剂EC50 (2)2 结果与分析2.1 鉴定结果2.1.1 番茄早疫病的症状鉴定 采集的番茄病叶如图12。番茄早疫病发病时期为苗期或成株期，发病初期叶片呈褐色或黑色的圆形至椭圆形斑点，逐步扩大，后期边缘深褐色、中央灰褐色并伴有黄色晕环且有同心轮纹。根据所采病叶的病状初步诊断，为番茄早疫病。2.1.2 番茄早疫病的病原菌鉴定 病原菌在PDA培养基上的菌落形态如图34，病原菌在25下培养72 h后，菌丝呈放射状簇生，白色发达。随着培养时间逐渐加长，菌丝体的颜色由白色变为灰白色乃至黑褐色。病原菌生长状况与童蕴慧等19对于番茄早疫病菌生物学特性的研究相符。在显微镜下观察番茄早疫病菌的菌丝及孢子（1040倍镜）下。分生孢子形态如图5，分生孢子有单生也有串生，圆形与椭圆形，褐色、黄褐色兼有并且具备纵横隔膜，大小(2085) m(69) m。分生孢子梗如图6所示，孢子梗单生或簇生，暗褐色，圆筒形且有几个隔膜。根据此病叶的为害症状，及此病原菌在实验室培养的菌落形态及分生孢子、分生孢子梗的特征，初步鉴定该病原菌为茄链格孢Alternaria solani。1482.2 病原菌毒力测定2.2.1 7种杀菌剂对茄链格孢的防效（1）大生对茄链格孢菌的防效如表1。处理后48 h，10、40 mg/L处理防治效果分别达到63.22%、68.12%，可知同一时间，处理浓度加大，防治效果增大。同一处理，随着处理时间的延长，防治效果变化不大。处理后48 h，40、400 mg/L处理防治效果分别为68.12%和93.10%，在0.05水平上差异显著；200 mg/L处理的防治效果与400 mg/L在0.05水平差异不显著，处理后72 h，2个处理差异达到显著水平，可知400 mg/L为最佳的药剂处理浓度，对茄链格孢菌有较好的防效。（2）世高对茄链格孢菌的防效如表2。同一处理，随着时间延长，菌落直径增大，防治效果也增大，但防治效果变化不大；同一时间，处理浓度增大，菌落直径减小，防治效果增大。如处理后48 h，1、5 mg/L处理的防治效果分别为55.75%、65.52%。世高整体的试验浓度对茄链格孢菌的防效较差，试验浓度最高为50mg/L，与其他试验浓度均在0.05水平上达到差异显著，但其防治效果才达到76.93%。（3）敌力脱对茄链格孢的防效如表3。处理后48h，图1 番茄早疫病早期症状 图2 番茄早疫病后期症状图4 病原菌菌落背面形态图图3 病原菌菌落正面形态图图5 分生孢子形态(1040) 图6 分生孢子梗形态(1040)王 芳等：7种杀菌剂对番茄早疫病的防效试验 149中国农学通报 http:/www.casb.org.cn1、5mg/L处理其防治效果分别为57.11%、65.54%，可见，浓度增大，其防治效果增大。同一处理，如1 mg/L，在处理后48 h其防治效果为57.11%，处理后72 h其防治效果为67.25%，可知时间延长，药剂的防效增大。处理后 48 h，50、100 mg/L 处理的防治效果分别为74.87%、96.32%，在0.05水平上达到差异显著；而100、500 mg/L的防治效果分别为96.32%、100%，差异不显著。处理后72 h，50、100、500 mg/L处理的防治效果分别达到82.18%、89.64%、100%，在0.05水平上差异不显著。因此，试验浓度为100 mg/L对茄链格孢有较好的防效。（4）克菌星对茄链格孢菌的防效如表4。由试验结果可知，相同时间内处理浓度加大，菌落直径增大，防治效果增大。如处理后48 h，10、50 mg/L处理的菌落直径为0.83、0.68 cm，防治效果分别为69.36%、92.65%。而同一处理不同时间内，时间延长，防治效果也增大。处理后48 h，50、100 mg/L处理的防治效果为92.65%、100%，在0.05水平上差异不显著，但与其表1 大生对茄链格孢菌的防效试验浓度/(mg/L)CK1040100200400接种直径/cm0.50.50.50.50.50.5处理后48 h直径/cm2.901.100.930.860.710.53防治效果/%63.22a68.12b70.11bc75.57bc93.10c处理后72 h直径/cm4.501.521.181.080.930.53防治效果/%66.52a73.58b75.82b79.12b95.54c注：同列字母相同表示在0.05水平上差异不显著，下同。表2 世高对茄链格孢菌的防效试验浓度/(mg/L)CK151050接种直径/cm0.50.50.50.50.5处理后48 h直径/cm2.901.281.000.980.75防治效果/%55.75a65.52b66.09b74.14c处理后72 h直径/cm4.481.901.201.201.03防治效果/%57.59a72.84b73.21b76.93c表3 敌力脱对茄链格孢的防效试验浓度/(mg/L)CK151050100500接种直径/cm0.50.50.50.50.50.50.5处理后48 h直径/cm2.721.170.950.830.680.520.50防治效果/%57.11a65.54b69.36bc74.87c96.32d100.00d处理后72 h直径/cm4.021.321.151.000.720.580.50防治效果/%67.25a71.40b75.12c82.18d89.64de100.00e150他处理比较差异显著，故克菌星50 mg/L时对茄链格孢有较好的防效。（5）施加乐对茄链格孢菌的抑制效果如表5。试验结果表明，同一时间，处理浓度增大，菌落直径减小，防治效果增大。如处理后48 h，10、50 mg/L处理的菌落直径分别为1.00、0.83 cm，而防治效果分别为64.28%、70.24%。同一处理，时间延长，其防治效果也增大。在处理后48 h和处理后72 h，只有试验浓度为500 mg/L的处理与其他处理在0.05水平上达到差异显著，因此，施加乐500 mg/L对茄链格孢菌有良好的防效，其防治效果可达89.90%。（6）唑菌胺酯对茄链格孢菌的抑制效果如表6。表4 克菌星对茄链格孢菌的防效试验浓度/(mg/L)CK141050100接种直径/cm0.50.50.50.50.50.5处理后48 h直径/cm2.270.900.830.650.530.50防治效果/%66.91a69.36a76.10a92.65b100.00b处理后72 h直径/cm4.021.401.120.830.550.52防治效果/%65.17a72.23ab79.27b92.54c97.51c表5 施加乐对茄链格孢菌的防效试验浓度/(mg/L)CK151050100500接种直径/cm0.50.50.50.50.50.50.5处理后48 h直径/cm2.801.201.131.000.830.680.55防治效果/%57.14a59.52a64.28ab70.24bc75.59c89.28d处理后72 h直径/cm3.961.381.301.100.930.720.57防治效果/%65.04a67.17a71.80ab76.43bc81.90c89.90d表6 唑菌胺酯对茄链格孢菌的防效试验浓度/(mg/L)CK151050100接种直径/cm0.50.50.50.50.50.5处理后48 h直径/cm2.801.401.020.950.720.67防治效果/%50.00a63.69a66.07b74.41b76.19c处理后72 h直径/cm3.961.731.231.120.920.80防治效果/%55.38a68.85b71.80c76.85d79.79e同一处理，处理时间延长，防治效果增大。如5 mg/L，处理后48 h和处理后72 h的防治效果分别为63.69%、68.85%。同一时间，处理浓度增长，防治效果增大。如处理后48 h，10、50 mg/L处理的防治效果分别为66.07%、74.41%。在处理后48h和处理后72h，50mg/L和100 mg/L处理的防治效果在0.05水平上达到差异显著，因此，100 mg/L为最优浓度，但唑菌胺酯整体试验浓度对茄链格孢菌的效果一般，浓度为100 mg/L王 芳等：7种杀菌剂对番茄早疫病的防效试验 151中国农学通报 http:/www.casb.org.cn时，防治效果才达到79.9%。（7）扑海因对茄链格孢菌的防效如表7。试验表明，随处理浓度增加，防治效果增大，在处理后48 h和处理后72 h，50 mg/L的处理在0.05水平与其他药剂浓度处理的防治效果达到显著差异水平。随处理时间延长，同一处理的防治效果增加，但差异不大。因此，扑海因50 mg/L对茄链格孢菌有较好的防效，其防治效果可达100%。2.2.2 7种杀菌剂对茄链格孢菌防效的比较 药后48 h，用DPS数据处理系统计算7种杀菌剂的毒力回归方程如表8。结果表明，大生的EC50值最大，以大生为标准试剂，毒力指数为1。世高的EC50值最小，为0.28 mg/L，毒力指数最大，为18.46，效果最好；其次为施加乐，EC50值为0.82 mg/L，毒力指数为6.30；唑菌胺酯和克菌星也有较好的抑制效果，毒力指数分别为3.98、3.36；扑海因和敌力脱的抑制效果较差，毒力指数分别为2.49、1.84。药后72 h，用DPS数据处理系统计算7种杀菌剂的毒力回归方程如表9所示。结果表明，大生的效果最差，EC50值最大为3.83 mg/L，以大生为标准药剂，毒力指数为1。世高的毒力指数最大，效果最好，为29.46；另外施加乐的药效也比较显著，毒力指数达27.36；其次，唑菌胺酯也有较好的抑制效果，毒力指数为15.32；克菌星的抑制效果一般，毒力指数为7.37；扑海因和敌力脱的抑制效果较差，毒力指数分别为2.20、1.91。表7 扑海因对茄链格孢菌的防效试验浓度/(mg/L)CK151050接种直径/cm0.50.50.50.50.5处理后48 h直径/cm2.801.480.780.700.50防治效果/%47.03a72.02b75.00b100c处理后72 h直径/cm3.961.820.830.700.50防治效果/%54.13a78.95b82.32b100c表8 7种杀菌剂处理48 h后的毒力指数药剂名称世高施加乐唑菌胺酯克菌星扑海因敌力脱大生毒力回归方程Y=5.16+0.29lnXY=5.03+0.38lnXY=5.05+0.35lnXY=4.65+1.86lnXY=4.08+2.91lnXY=4.29+1.58lnXY=4.58+0.59lnX相关系数R0.970.930.950.780.870.830.81EC50/(mg/L)0.280.821.301.542.082.805.17毒力指数18.466.303.983.362.491.841.00表9 7种杀菌剂处理72 h后的毒力指数药剂名称世高施加乐唑菌胺酯克菌星扑海因敌力脱大生毒力回归方程Y=5.27+0.31lnXY=5.27+0.33lnXY=5.19+0.33lnXY=5.22+0.77lnXY=4.32+2.81lnXY=4.57+1.41lnXY=4.62+0.65lnX相关系数R0.920.960.980.960.890.780.82EC50/(mg/L)0.130.140.250.521.742.013.83毒力指数29.4627.3615.327.372.201.911.003 结论试验对番茄早疫病的病原菌进行分离和鉴定，根据番茄病叶上的病状以及显微镜下的孢子形态，判断该致病病原菌为茄链格孢，并对病原菌进行7种药剂的防效试验。防效试验结果表明，药后48 h，7种杀菌剂的防治效果均随着试验浓度的增加而增大。其中，在7种杀菌剂中，世高的毒力指数最大，EC50值为0.28 mg/L，对茄链格孢的抑制效果最好。施加乐的毒力指数为6.30，对茄链格孢菌的抑制效果较好；其次是唑菌胺酯和克菌星，毒力指数分别为3.98、3.36，对茄链格孢菌的抑制效果良好；扑海因和敌力脱的毒力指数相对较低，分别为2.49、1.91，对茄链格孢菌的抑制效果一般；大生的毒力指数最低，对茄链格孢菌的抑制效果最差。药后72 h，7种杀菌剂的防治效果均随着试验浓度的增大而增加。7种杀菌剂中，世高的毒力指数最大达29.46，EC50值为0.13 mg/L，对茄链格孢菌的抑制效果最好；施加乐的毒力达27.36，也对茄链格孢菌具有152很好的防效；其次，唑菌胺酯的毒力指数为15.32，EC50值为0.25，对茄链格孢菌具有较好的防效；克菌星的毒力指数也可达到7.37，对茄链格孢菌具有一定的防效；而扑海因和敌力脱的毒力指数偏低，对茄链格孢菌抑制效果不佳；大生的毒力指数最低，对茄链格孢菌的防效最差。综上所述，7种杀菌剂中，世高的毒力指数最大对茄链格孢的防效最好；其次是施加乐、唑菌胺酯和克菌星，均对茄链格孢具有良好的防效；而扑海因和敌力脱的毒力指数均偏低，对茄链格孢菌的抑制效果较差；大生的毒力指数最低，对茄链格孢的抑制效果最差。4 讨论（1）试验结果表明，7种杀菌剂对番茄早疫病的有效抑制中浓度由高到低依次是世高、施加乐、唑菌胺酯、克菌星、扑海因、敌力脱、大生。其中大生的毒力指数最低，抑制效果最差；与王春明等20的研究结果相符。（2）不同杀菌剂对番茄早疫病菌抑制效果不同，甚至存在显著差异。不同杀菌剂对番茄早疫病菌的抑制作用方式不同，或抑制真菌菌丝、芽管及吸器的生长，或阻碍菌丝的有丝分裂，或干扰核酸合成21-22。如大生作为保护性杀菌剂，主要影响芽管的正常生长23-24。生产上因根据各杀菌剂的作用特点，合理搭配杀菌剂和安排杀菌时间。（3）试验所采用的均是广谱性杀菌剂，若要针对番茄早疫病茄链格孢菌进行试验，需要对各杀菌剂的作用特点及目标菌的生长特性选择杀菌剂进行试验。参考文献1 赵美佳,绉通,汤泽君,等.番茄营养成分以及国内外加工现状J.食品研究与开发,2016,37(10):215.2 张伟玉,李建科,杨静慧等.耐贮藏转基因番茄产业化趋势与分析J.保鲜与加工,2003(2):15.3 赵虎基,乐锦华.番茄耐贮性转基因技术及其在新疆的应用前景J.石河子大学学报,1998(2):74-80.4 武满琴.番茄早疫病的发生和防治J.土肥植保,2015,32(7):124.5 赖传雄,袁高庆.农业植物病理学M.北京:科学出版社,2008:282.6 郭明娟.番茄早疫病的发生与防治J.农民致富之友,2016,20(9):129.7 邵玉琴,吕佩珂.番茄早疫病的发生、流行与生态因子关系的研究J.内蒙古大学学报,1993,24(2):210-211.8 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