生防菌混合接种对葡萄灰霉病菌的防治效果.pdf

36 2 265 271 中国生物防治学报 Chinese Journal of Biological Control 2020 年 4 月 收稿日期 2019 06 27 基金项目 葡萄产业技术体系岗位科学家项目 CARS 29 bc 国家重点研发计划 2018YFD0201300 作者简介 王红丽 女 在读研究生 E mail 1148461017 通信作者 博士 教授 E mail wangqi DOI 10 16409 ki 2095 039x 2020 02 01 生防菌混合接种对葡萄灰霉病菌的防治效果 王红丽 1 善文辉 1 胡海瑶 1 李 燕 1 王 琦 1 王 坤 2 卞凤娥 2 1 中国农业大学植物病理学实验室 北京 100193 2 君顶酒庄有限公司 蓬莱 265600 摘要 本研究以葡萄灰霉病菌 Botrytis cinerea 为靶标菌 通过抑菌圈试验 分生孢子萌发抑制试验 离体 果实接种试验 将枯草芽胞杆菌 Bacillus subtilis GLB191 和短小芽胞杆菌 Bacillus pumilus GLB197 生防菌 株单独或混合接种 初步探究了单菌株和两菌株混合对葡萄灰霉病菌的抑制效果 试验结果表明 各处理 抑菌圈大小达 30 mm 以上 灰霉孢子萌发抑制率达 94 以上 其中两菌株混合 500 倍稀释液对孢子萌发抑 制率高于单菌株处理 离体果实接种试验表明 两菌株混合处理病斑抑制率高达 70 89 高于单菌株 GLB191 和 GLB197 的病斑抑制率 55 48 和 52 91 田间防效试验表明 两菌株混合防效与化学药剂无 显著差异 防效为 70 02 因此 两菌株混合接种可更有效地防治葡萄灰霉病的发生 关 键 词 葡萄灰霉病 芽胞杆菌 混合接种 抑菌作用 田间防效 中图分类号 S476 文献标识码 A 文章编号 1005 9261 2020 02 0265 07 Control Effect of Mixed Inoculation of Different Biocontrol Strains on Botrytis cinerea WANG Hongli 1 SHAN Wenhui 1 HU Haiyao 1 LI Yan 1 WANG Qi 1 WANG Kun 2 BIAN Fenge 2 1 Laboratory of Plant Pathology China Agricultural University Beijing 100193 China 2 Chateau Junding Co Ltd Penglai 265600 China Abstract Inhibition effect of Bacillus subtilis GLB191 and B pumilus GLB197 single strain and mixed strains against B cinerea was investigated by inhibition zone test inhibition test of conidia germination and in vitro inoculation on fruit The results showed that the inhibition zone size of each treatment was more than 30 mm and the inhibition rate of spore germination was more than 94 The mixture of the two strains with 500 times dilution inhibited the spore germination higher than single strain In vitro inoculation on fruit test showed that the lesion inhibition rate of the mixed strains treatment was up to 70 89 higher than that of the single strain GLB191 and GLB197 which was 55 48 and 52 91 respectively Field trials indicated that control efficiency of the mixed strains was no significant difference with chemical agents with the efficacy of 70 02 Therefore mixed inoculation of the two strains can be applied in grape grey mold control Key words Botrytis cinerea Bacillus mixed inoculation inhibitory effect field efficacy 由植物病原真菌灰葡萄孢 Botrytis cinerea 引起的葡萄灰霉病是危害葡萄果实的重要病害之一 影响 着酿酒葡萄和鲜食葡萄果实的品质和产量 1 目前主要以化学药剂防治为主 由于田间病害防治过程中 存在连年使用同种杀菌剂问题 导致葡萄灰霉病菌产生抗药性 据国内外报道灰霉病菌对多菌灵 腐霉 利 异菌脲等杀菌剂已经产生不同程度的抗药性 2 3 因此 生物防治越来越受到人们的重视 近几年已 筛选出多种对葡萄灰霉病菌有拮抗作用的生防菌 生防细菌包括内生菌隐球菌 Cryptococcus 水拉恩式 菌 Rahnella aquatilis 和变形斑沙雷菌 Serratia proteamaculans 4 多粘类芽胞杆菌 Paenibacillus 266 中 国 生 物 防 治 学 报 第 36 卷 polymyxa 5 枯草芽胞杆菌 B subtilis 和解淀粉芽胞杆菌 Bacillus amyloliquefaciens 7 等 其中芽胞杆菌研 究较多 生防酵母包括毕赤酵母 Pichia pastoris 8 清酒假丝酵母 Candida sake 9 和葡萄果实附生的膜醭 假丝酵母 Candida membranifaciens 10 等 这些对葡萄灰霉病菌具有良好抑菌效果的生防菌株是生物防治 措施中的关键因素 传统的生物防治以单株生防菌为研究对象 采用生防菌混合防治已成为新的研究热点 单株菌剂在病 害防治过程中存在定殖能力弱 防病机制单一 田间防效低 不稳定等问题 11 在田间条件下 已有研究 报道了生防芽胞杆菌混合或与其他生防菌混合比单株生防菌具有优势 如枯草芽胞杆菌 D 放线菌 Actinomyces 317 和木霉菌 Trichoderma 等生防菌混合对黄瓜枯萎病防治有协同增效作用 12 枯草芽胞杆菌 B001 短短芽胞杆菌 Brevibacillus brevis B011 和侧孢芽胞杆菌 Bacillus laterosporus 2 Q 9 两两混合能提高 对烟草青枯病的防效 13 几株生防根际促生芽胞杆菌混合能提高对黄瓜和番茄病害的防治和促生能力 14 有关生防菌混合防治葡萄灰霉病的文献较少 本研究探索了枯草芽胞杆菌 GLB191 和短小芽胞杆菌 B pumilus GLB197 两菌株混合对葡萄灰霉病原菌的抑制作用 并初步研究了两菌株混合接种对葡萄灰霉病的 田间防效 这为开发混合生防菌剂提供了重要的科学依据 1 材料与方法 1 1 供试材料 病原菌 灰葡萄孢菌 B cinerea 由中国农业大学植物病理学实验室从蓬莱君顶酒庄采集的葡萄病果实 中分离保存 芽胞杆菌 枯草芽胞杆菌 B subtilis GLB191 和短小芽胞杆菌 B pumilus GLB197 由中国农业大学植物 病理学实验室从健康葡萄叶片中分离保存 LB 培养基 胰蛋白胨 10 g 酵母提取物 5 g 氯化钠 10 g 加水定容至 1 L 后分装 液体培养基不加 琼脂粉 固体培养基加入 1 5 W V 琼脂粉 121 灭菌 20 min 马铃薯葡萄糖培养基 马铃薯 200 g 葡萄糖 20 g 加水定容至 1 L 后分装 液体培养基 PDB 不加 琼脂粉 固体培养基 PDA 加入 1 5 W V 琼脂粉 121 灭菌 20 min 接种葡萄果实 红提葡萄 购自市场 将单粒葡萄果实人工分离 留有果蒂 选取大小 形状 成熟 度一致的健康果粒于 2 的次氯酸钠溶液中消毒 2 min 然后用无菌水冲洗 3 次 晾干后分组处理 1 2 枯草芽胞杆菌 GLB191 和短小芽胞杆菌 GLB197 单菌株及两菌株混合对葡萄灰霉菌的抑制作用 1 2 1 相容性测定 参考 Barbosa 等 15 的测定方法 在 LB 固体培养基平板上一半划线接种菌株 GLB191 同时在其另一半垂直划线接种菌株 GLB197 每个处理重复 3 次 将平板放置在 37 的生化培养箱中培 养 24 h 后观察和记录两菌株之间的相容性反应 两菌株之间不产生抑菌条带的为相容 反之为不相容 1 2 2 菌株发酵液制备 分别挑取活化菌株 GLB191 和 GLB197 的单菌落接种到装有 5 mL 的 LB 液体培 养基中 37 200 r min 振荡培养 12 h 制成种子液 将两菌株的种子液按 1 的接种比例分别接种于 100 mL 的 LB 液体培养基中 37 200 r min 振荡培养 72 h 分别制成浓度为 10 10 CFU mL 的单菌株发 酵液 单菌株发酵液按照 1 1 的量进行混合 即得两菌株发酵液的混合液 1 2 3 灰霉菌分生孢子悬浮液制备 将灰霉菌于马铃薯葡萄糖固体培养基上培养 5 d 在长满灰霉菌落的 平板中加入 5 mL 马铃薯葡萄糖液体培养基进行冲洗和振荡 用四层无菌纱布过滤菌丝得孢子悬浮液母液 然后向孢子悬浮液母液中加入马铃薯葡萄糖液体培养基 稀释孢子悬浮液浓度至 10 5 孢子 mL 1 2 4 菌株对灰霉菌菌丝生长和孢子萌发的影响 采用抑菌圈法中的打孔法 16 测定菌株 GLB191 GLB197 和 GLB191 GLB197 发酵液对葡萄灰霉菌丝生长和形态的影响 取 10 5 孢子 mL 灰霉菌分生孢子悬浮液 100 L 滴加于马铃薯葡萄糖固体培养基上 涂布均匀 再用 6 mm 无菌打孔器在平板中心打一个孔 将孔 中琼脂去除 分别加入 50 L 不同稀释倍数的处理液 即菌株 GLB191 GLB197 和 GLB191 GLB197 发 酵液的原液 10 倍 100 倍和 500 倍稀释液 以加入无菌水的平板为对照 25 生化培养箱中培养 5 d 后观察统计 每组 3 个平板 重复 3 次 采用十字交叉法测定抑菌圈的直径大小 挑取抑菌圈边缘的菌丝 于光学显微镜 N90i Nikon 下观察菌丝的形态变化 第 2 期 王红丽等 生防菌混合接种对葡萄灰霉病菌的防治效果 267 分生孢子萌发抑制试验 在含有 10 5 孢子 mL 灰霉菌分生孢子悬浮液的试管中 分别加入菌株 GLB191 GLB197 和 GLB191 GLB197 发酵液的原液 10 倍 100 倍和 500 倍稀释液 充分混匀后 将各处理的孢子悬浮液置于培养箱 22 黑暗培养 8 h 观察孢子的萌发情况 每个浓度处理设置 3 个 重复 每个重复计数 3 个视野区域共约 100 个孢子 于光学显微镜下 N90i Nikon 观察孢子萌发情况 计算各处理的孢子萌发抑制率 孢子萌发抑制率 对照组孢子萌发率 处理组孢子萌发率 对 照组孢子萌发率 100 1 3 离体果实接种试验 采用刺伤法 17 测定菌株发酵液对葡萄果实灰霉病防效 用无菌接种针在红提葡萄果实中间位置刺出一 个深度为 2 mm 直径为 1 5 mm 的伤口 然后在每个果实的伤口处分别接入 2 10 5 孢子 mL 灰霉菌孢子悬 浮液 2 L 室温放置 30 min 晾干果实 再分别接入菌株 GLB191 GLB197 和 GLB191 GLB197 发酵液 的原液 4 L 每个处理设置 3 个重复 共接种 30 颗果实 以接入相同体积的无菌水为对照 然后将各处 理的果实分别置于塑料保鲜盒中 喷雾保湿 置于 22 气候培养箱 培养 9 d 后 采用十字交叉法统计 病斑直径 并计算各处理的病斑抑制率 病斑抑制率 对照组病斑直径 处理组病斑直径 对照 组病斑直径 100 1 4 生防菌混合接种对葡萄灰霉病的田间试验 2018 年在山东蓬莱君顶酒庄进行田间试验 葡萄品种为霞多丽 砧木是 SO4 7 年树龄 株行距为 1 0 m 2 0 m 南北行向 试验期间葡萄进行常规栽培管理 即正常的施肥 浇灌等 共设 3 个处理 分别为空 白对照 清水 化学药剂 40 嘧霉胺悬浮剂 1000 倍液 50 腐霉利可湿性粉剂 2000 倍液 50 啶酰 菌胺水分散粒剂 1500 倍液 和 GLB191 GLB197 混合发酵液 10 10 CFU mL 菌数 500 倍液 采用喷雾 法施药 一次喷药量为 400 mL 株 从葡萄末花期开始喷药 以后每隔 10 d 喷雾防治一次 在葡萄果实采 收前共喷施 9 次 喷施时间为 5 28 6 7 6 17 7 7 7 17 7 27 7 29 8 10 8 20 化学药剂处理组中 的每种药剂仅喷施 3 次 每个处理 6 株葡萄树 3 次重复 随机区组设计 调查每株全部果穗 记录病果 穗的级数 分别在发病初期 果实成熟期 果实采收期调查葡萄果穗灰霉病的病情指数及计算相对防效 葡萄果穗灰霉病病情分级标准 0 级 果穗无病 1 级 果穗发病面积占整果穗面积的 5 以下 3 级 果穗发病面积占整果穗面积的 6 10 5 级 果穗发病面积占整果穗面积的 11 25 7 级 果穗发 病面积占整果穗面积的 26 50 9 级 果穗发病面积占整果穗面积的 50 以上 病情指数 各级 病果穗数 相对级数值 调查总果穗数 9 100 防治效果 对照病情指数 处理病情指数 对照病情指数 100 1 5 数据统计与分析 使用 Excel 进行数据的整理分析 使用 SPSS 软件 IBM SPSS Statistics 22 USA 中的 Duncan s 新复 极差法对试验数据进行差异显著性分析 P 0 05 2 结果与分析 2 1 枯草芽胞杆菌 GLB191 和短小芽胞杆菌 GLB197 单菌株及两菌株混合对葡萄灰霉菌的抑制作用 2 1 1 相容性测定 通过两菌株平板拮抗试验 菌株 GLB191 和菌株 GLB197 之间没有抑菌圈产生 图 1 并且两菌株之间生长互不影响 因此 两菌株之间无拮抗作用具有相容性 发酵液可以混合使用 2 1 2 菌株发酵液对灰霉病菌菌丝的抑制作用 通过抑菌圈试验 不同浓度的发酵液处理对灰霉病菌菌丝 生长有不同程度的抑制作用 图 2A 两菌株混合发酵液和菌株 GLB191 发酵液处理在不同浓度下对灰 霉菌菌丝生长都有明显的抑制作用 抑菌圈大小均达到 30 mm 以上 其中单菌株 GLB197 发酵液处理在不 同浓度下的抑菌作用变化较大 随着稀释倍数的增大抑菌作用明显减弱 抑菌圈大小存在显著性差异 P 0 05 图 2B 菌株发酵液不仅抑制病原菌的菌丝生长 而且能够显著改变菌丝的形态 使其畸形扭 曲 对照组的菌丝粗壮 均匀一致 经过菌株发酵液处理后的菌丝膨大扭曲 粗细不均匀 图 3 整体 而言 两菌株发酵液混合处理与单菌株相比 500 倍稀释液对灰霉菌菌丝生长具有更强的抑制作用 菌丝 畸形扭曲程度较大 268 中 国 生 物 防 治 学 报 第 36 卷 图 1 菌株之间相容性的平板拮抗试验 Fig 1 Compatibility between bacterial antagonists in agar plates GL B1 91 原液 GLB1 91 10 倍 GLB19 1 100 倍 GLB19 1 500 倍 GL B1 97 原液 GLB1 97 10 倍 GLB19 7 100 倍 GLB19 7 500 倍 GLB19 1 G L B197 原液 GLB19 1 GLB197 10 倍 GLB19 1 GLB19 7 10 0 倍 GLB19 1 GLB19 7 50 0 倍 抑菌圈大小 Inhi bit io n zone mm 注 图上不同小写字母表示 0 05 水平差异显著 下同 Note Date with the different lowercase letters in the figure indicated significant difference at 0 05 level The same below 图 2 菌株发酵液对葡萄灰霉菌菌丝生长的抑制作用 Fig 2 The inhibition of bacterial strain fermentation broth against B cinerea CK GLB191 GLB197GLB197GLB191 20 m 图 3 菌株发酵液对葡萄灰霉菌菌丝形态的影响 Fig 3 The growth of the mycelium of B cinerea treated with bacterial strain fermentation broth 2 1 3 菌株对灰霉病菌分生孢子萌发的影响 菌株 GLB191 GLB197 和 GLB191 GLB197 发酵液在不同 浓度下对孢子萌发的抑制率不同 菌株发酵液的原液和 10 倍稀释液对孢子萌发抑制率较高 抑制率达 94 第 2 期 王红丽等 生防菌混合接种对葡萄灰霉病菌的防治效果 269 以上 100 倍稀释液对孢子的萌发抑制率达到 38 49 500 倍稀释液对孢子萌发抑制率达 10 18 从测定结果来看 随着发酵液稀释倍数的增大对灰霉病菌的分生孢子萌发的抑制作用减弱 图 4 其中 两菌株发酵液的混合液 500 倍稀释液与单菌株相比 对灰霉菌分生孢子萌发的抑制作用具有显著差异 100倍 500倍 10倍原液 GLB191 GLB197 GLB197 GLB191 CK A 20 m 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 GL B1 91 原液 GLB1 91 10 倍 G L B191 10 0 倍 G L B191 50 0 倍 GL B1 97 原液 GLB1 97 10 倍 G L B197 10 0 倍 G L B197 50 0 倍 GLB19 1 GLB19 7 原液 GLB1 91 GL B1 97 10 倍 G L B191 G L B197 10 0 倍 G L B191 G L B197 50 0 倍 孢子萌发抑制率 Co ni dia g e mi nati on rate aa c g a ab d g a b e f B 图 4 菌株发酵液对灰霉菌孢子萌发的抑制作用 Fig 4 The inhibition of bacterial strain fermentation broth against the germination of conidia of B cinerea 2 2 离体果实接种防效 单菌株发酵液和两菌株发酵液混合处理组显著降低了葡萄灰霉病的发生程度 对照组中的葡萄果实呈 现典型的灰霉病症状 接种点处出现菌丝和孢子 四周呈现大面积坏死性病斑 菌株发酵液处理组的葡萄 果实 灰霉病的发生程度明显降低 葡萄果实仅在接种点处出现少量菌丝和孢子 尚未出现严重的坏死性 病斑 病斑面积和坏死程度明显轻于对照组 图 5A 菌株 GLB191 GLB197 和 GLB191 GLB197 发 酵液处理对葡萄果实灰霉病的病斑抑制率分别为 55 48 52 91 70 89 可见两菌株发酵液混合和单 菌株发酵液处理相比 病斑抑制率存在显著差异 P 0 05 两菌株发酵液混合处理组病斑抑制率最高 图 5B 因此 两菌株混合防治葡萄灰霉病相对于单菌株具有更强的生防潜力 2 3 生防菌混合对葡萄灰霉病的田间防效 由表 1 可知 利用两菌株发酵液混合对葡萄果实灰霉发病初期防效为 54 32 高于化学药剂的防效 37 04 在葡萄果实成熟期和采收期 两菌株发酵液混合处理的防效为 55 02 和 70 20 与化学药剂的 防效 48 57 和 71 78 相比差异不显著 P 0 05 为了减少化学药剂的使用 建议使用菌株 GLB191 GLB197 发酵液混合防治葡萄灰霉病的发生 表 1 两菌株发酵液混合防治葡萄灰霉病的效果 Table 1 Effect of mixed fermentation broth of two strains on controlling grey mould of grape 2018 07 12 2018 08 03 2018 08 25 处理 Treatment 病情指数 Disease index 防治效果 Control effect 病情指数 Disease index 防治效果 Control effect 病情指数 Disease index 防治效果 Control effect 对照 CK 0 81 0 08 a 2 80 0 26 a 7 62 1 10 a 化学药剂 Chemistry 0 51 0 12 b 37 04 b 1 44 0 10 b 48 57 a 2 15 0 57 b 71 78 a GLB191 GLB197 0 37 0 07 c 54 32 a 1 26 0 21 b 55 02 a 2 27 0 45 b 70 20 a 注 表中数据为平均值 标准误 表中不同字母表示 0 05 水平下差异显著 分别在第 4 次 第 7 次和第 9 次用药后的第 5 天进行病害调查 Note Data in the table were mean SE different lowercase letters followed data in the same column indicated significant difference at 0 05 level Disease survey was carried out on the fifth day after the fourth seventh and ninth spraying 270 中 国 生 物 防 治 学 报 第 36 卷 GLB191 GLB197 GLB197 GLB191 CK 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 GLB191 GLB197 GLB191 GLB197 a a b A B 图 5 菌株发酵液对葡萄灰霉病防效 Fig 5 grey mold on table grapes control by bacterial strain fermentation broth 3 讨论 目前 在实验室条件下已筛选出大量对植物病原菌具有很强拮抗活性的芽胞杆菌 针对葡萄灰霉病原 菌的生防芽胞杆菌如解淀粉芽胞杆菌 B15 无菌发酵液能使葡萄灰霉菌的菌丝畸形 菌丝体粗大 尖端肿胀 等 18 植物内生枯草芽胞杆菌 Em7 发酵液对葡萄灰霉菌的菌丝生长和孢子萌发的抑制效果随着稀释倍数 的增加而减弱 19 本试验中 测定了单菌株 GLB191 和 GLB197 对葡萄灰霉病菌都有抑制作用 并且两菌 株混合后对灰霉菌丝生长以及形态和孢子萌发具有很强的抑制作用 随着处理液浓度的稀释 对灰霉菌分 生孢子萌发的抑制作用减弱 其中含有菌株 GLB191 的处理对灰霉病原菌的抑制作用较强 推测可能与芽 胞杆菌菌株本身抑菌作用 以及菌株产生抗生素等因素有关 20 21 关于两菌株混合后对葡萄灰霉病菌具有 较好的抑制作用机理还需进一步研究 实践证明 活体生物菌剂在田间条件下的定殖能力是生物防治效果的关键因素 22 研究表明 使用 混合菌剂则可拓宽适应范围 有利于抵抗不良的环境条件 同时提高生防效果 23 如混合木霉菌可湿性 粉剂对葡萄灰霉病的防治效果较好 24 Exiguobacterium indicum D1 8 和蜡样芽胞杆菌 Bacillus cereus D1 17 混合防治番茄猝倒病较单菌株相比发病率减少了 27 25 混合两株具有亲和性的拮抗细菌能够提 高对蔬菜枯萎病的防治效果 26 解淀粉芽胞杆菌 Fy11 和 Zy44 混合与单菌株相比显著降低辣椒疫霉发生 的严重度 27 本研究中 离体果实接种试验显示两菌株混合处理对葡萄果实灰霉病抑制效果高于单菌株 处理 田间防效试验表明两菌株混合对田间葡萄灰霉病的防治与化学药剂防效相当 推测可能与两菌株 混合能提高菌株定殖能力和抵抗不良环境等因素有关 类似的研究结果如荧光假单胞杆菌 Pseudomonas fluorescens PTA CT2 与枯草芽胞杆菌 PTA 271 或成团泛菌 Pantoea agglomerans PTA AF2 混合与单菌株 相比 促进了葡萄白藜芦醇和葡萄素的积累 提高葡萄植株对灰霉病的抗性 28 巨大芽胞杆菌 Bacillus megaterium Y 30 和解淀粉芽胞杆菌 CM3 混合防治草莓炭疽病的效果比化学防治提高了 23 63 29 本研 究关于两株生防菌的混合使用还需要进行大量的田间试验 进一步确定两菌株在田间条件下稳定的防效 和定殖情况 为混合菌剂的研制开发提供重要的理论依据 因此 这两株生防菌具有开发为混合生防菌 剂的潜力 以减少化学药剂的使用量 参 考 文 献 1 Ky I Lorrain B Jourdes M et al Assessment of grey mould Botrytis cinerea impact on phenolic and sensory quality of Bordeaux grapes musts and wines for two consecutive vintages J Grape and Wine Research 2012 18 215 226 2 严红 燕继晔 王忠跃 等 葡萄灰霉病菌对 3 种杀菌剂的多重抗药性检测 J 果树学报 2012 29 4 625 629 3 Walker A S Ravigne V Rieux A et al Fungal adaptation to contemporary fungicide applications the case of Botrytis cinerea populations from 第 2 期 王红丽等 生防菌混合接种对葡萄灰霉病菌的防治效果 271 Champagne vineyards France J Molecular Ecology 2017 26 1919 1935 4 郑婷 张培安 张克坤 等 葡萄伤流液中内生菌分离鉴定与抗病功能分析 J 园艺学报 2018 45 11 2106 2120 5 Santiagoa R Huili irb C Cotteta L et al Microbiological characterization for a new wild strain of Paenibacillus polymyxa with antifungal activity against Botrytis cinerea J Biological Control 2016 103 251 260 6 Rotolo C de Miccolis Angelini R M Dongiovanni C et al Use of biocontrol agents and botanicals in integrated management of Botrytis cinerea in table grape vineyards J Pest Management Science 2017 74 3 715 725 7 Boubakri H Hadj Brahim A Schmitt C et al Biocontrol potential of chenodeoxycholic acid CDCA and endophytic Bacillus subtilis strains against the most destructive grapevine pathogens J Crop and Horticultural Science 2015 4 43 261 274 8 罗琳 周泠璇 刘娅 毕赤酵母 G5 拮抗葡萄灰霉病机理初探 J 生物技术通报 2017 33 9 210 215 9 Garrido C C Usall J Torres R et al Effective control of Botrytis bunch rot in commercial vineyards by large scale application of Candida sake CPA 1 J Biological Control 2017 62 161 173 10 Kasfi K Taheri P Jafarpour B et al Identification of epiphytic yeasts and bacteria with potential for biocontrol of grey mold disease on table grapes caused by Botrytis cinerea J Agricultural Research 2018 1 16 1 16 11 陈志谊 芽孢杆菌类生物杀菌剂的研发与应用 J 中国生物防治学报 2015 5 31 723 732 12 尹淑丽 张丽萍 张根伟 等 生防菌防治黄瓜枯萎病的协同作用研究 J 北方园艺 2012 7 151 155 13 吕建林 刘二明 柏连阳 等 烟草青枯病生防菌混合接种对其定殖及防效的影响 J 中国生物防治 2010 26 2 200 205 14 Liu K McInroy J A Hu C et al Mixtures of plant growth promoting rhizobacteria enhance biological control of multiple plant diseases and plant growth promotion in the presence of pathogens J Plant Disease 2018 102 1 67 72 15 Barbosa L O Lima J S Magalhaes V C et al Compatibility and combination of selected bacterial antagonists in the biocontrol of sisal bole rot disease J Biological Control 2018 63 595 605 16 谭才邓 朱美娟 杜淑霞 等 抑菌试验中抑菌圈法的比较研究 J 食品工业 2016 11 37 122 125 17 Sanzani S M De Girolamo A Schena L et al Control of penicillium expansum and patulin accumulation on apples by quercetin and umbelliferone J European Food Research and Technology 2009 228 381 389 18 潘虹余 金玮鋆 张晓蒙 等 解淀粉芽孢杆菌 B15 抑菌物质对葡萄灰霉病灰葡萄孢的抑菌机理 J 微生物学报 2018 7 58 1245 1254 19 伏波 姚娟妮 高小宁 等 植物内生枯草芽孢杆菌 Em7 菌株对葡萄灰霉病菌的抑菌活性 J 农药学学报 2016 18 4 465 471 20 魏宝东 车芙蓉 马岩松 芽孢杆菌 Bacillus 发酵滤液对灰霉葡萄孢菌的作用 J 辽宁农业科学 2004 3 5 7 21 Toral L Rodr guez M B jar V et al Antifungal activity of lipopeptides from Bacillus XT1 CECT 8661 against Botrytis cinerea J Frontiers in Microbiology 2018 9 1 12 22 Bloemberg G V Lugtenberg B J J Molecular basis of plant growth promotion and biocontrol by rhizobacteria J Current Opinion in Plant Biology 2001 4 4 343 350 23 Mao W Lumsden R D Lewis J A et al Seed treatment using pre infiltration and biocontrol agents to reduce damping off of corn caused by 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