番茄灰霉菌拮抗细菌的筛选鉴定及评价.pdf

第43 卷 第1 期 浙 江 师 范 大 学 学 报 自 然 科 学 版 Vol 43 No 1 2020 年2 月 JournalofZhejiangNormalUniversity Nat Sci Feb 2020 DOI 10 16218 j issn 1001 5051 2020 01 011 番 茄 灰 霉 菌 拮 抗 细 菌 的 筛 选 鉴 定 及 评 价 叶 涛 1 刘 敏 1 任 哲 昕 2 詹 旭 芳 2 金 一 禾 1 王 长 春 1 1 浙 江 师 范 大 学 化 学 与 生 命 科 学 学 院 浙 江 金 华 321004 2 浙 江 师 范 大 学 行 知 学 院 浙 江 金 华 321004 摘 要 为 分 离 鉴 定 一 些 对 番 茄 灰 霉 菌 具 有 拮 抗 作 用 且 适 合 当 地 生 境 的 生 防 细 菌 以 金 华 连 续10 年 的 番 茄 种 植 保 护 地 土 壤 为 材 料 分 离 细 菌 并 以 灰 霉 菌 为 靶 标 菌 对 其 拮 抗 效 果 进 行 检 验 对 候 选 菌 株 进 行 格 兰 氏 染 色 将 其16SrDNA 序 列 与GenBank 中 已 知 标 准 菌 株 的16SrDNA 序 列 比 对 利 用Neighbor joining 方 法 构 建 进 化 树 通 过 菌 株 发 酵 液 灌 根 番 茄 后48h 离 体 叶 片 挑 战 接 种 番 茄 灰 霉 菌 以 及 温 室 盆 栽 接 种 实 验 明 确 其 防 治 效 果 结 果 显 示 分 离 获 得5 株 疑 似 芽 孢 杆 菌 其 中1 株 JH 2 对 番 茄 灰 霉 病 菌 具 有 较 高 抗 性 鉴 定 为 芽 孢 杆 菌 属 Bacillussp 与 标 准 菌 株AB735995 1 解 淀 粉 酶 芽 孢 杆 菌 Bacillusamyloliquefaciens 聚 于 同 一 分 支 同 源 性 高 达99 菌 株JH 2 发 酵 液 处 理 的 番 茄 叶 片 病 斑 面 积 为 对 照 处 理 的77 防 治 效 果 为22 3 菌 株JH 2 处 理 后 对 番 茄 灰 霉 的 防 治 效 果 为38 9 以 上 结 果 表 明 解 淀 粉 酶 芽 孢 杆 菌JH 2 灌 根 后 可 以 触 发 番 茄 植 株 系 统 抗 病 性 增 强 植 株 免 疫 能 力 关 键 词 分 离 芽 孢 杆 菌 番 茄 灰 霉 菌 防 治 效 果 中 图 分 类 号 S476 文 献 标 识 码 A 文 章 编 号 1001 5051 2020 01 0060 06 Isolation identification screeningandevaluationofantagonistic bacteriumagainst B o t r y t i s c i n e r e a l YETao 1 LIUMin 1 RENZhexin 2 ZHANXunfang 2 JINGYihe 1 WANGChangchun 1 1 CollegeofChemistryandLifeSciences ZhejiangNormalUniversity Jinhua321004 China 2 XingzhiCollege ZhejiangNormalUniversity Jinhua321004 China Abstract InordertoisolateandidentifysomebiocontrolbacteriaantagonistictoBotrytiscinerealandsuitable forlocalhabitats thesoiloftomatoplantingprotectionareafor10consecutiveyearsinJinhuawasusedasma terialtoisolatebacteria TheantagonisticeffectofBotrytiscinerealwastested Thecandidatestrainswere stainedwithGram sstaining andtheir16SrDNAsequenceswerecomparedwiththoseoftheknownstandard strainsinGenBank Neighbor joiningmethodwasusedtoconstructevolutionarytree 48hoursafterroottoma towasirrigatedwithstrainfermentationbroth thecontroleffectwasconfirmedbychallenginginoculationof graymoldfromisolatedleavesandpotcultureingreenhouse TheresultsshowedthatfivesuspectedBacillus strainswereisolatedandoneofthem JH 2 washighlyresistanttoBotrytiscinereal identifiedasBacillus 收 文 日 期 2018 12 19 修 订 日 期 2019 03 04 基 金 项 目 浙 江 省 自 然 科 学 基 金 资 助 项 目 LY20C140002 国 家 自 然 科 学 基 金 资 助 项 目 31071643 作 者 简 介 叶 涛 1993 男 浙 江 金 华 人 硕 士 研 究 生 研 究 方 向 植 物 病 理 学 通 信 作 者 王 长 春 E mail wcc sp andstandardbacteriaBacillusamyloliquefaciensstrainAB735995 1clusteredinthesamebranchwith 99 homology tomatoleaflesionareatreatedwithJH 2fermentationbrothwas77 ofthecontroltreatment andthecontroleffectwas22 3 ThecontroleffectofstrainJH 2ontomatograymoldwas38 9 There sultsshowedthatBacillusamyloliquefaciensJH 2couldtriggerafterrootirrigation improvetomatoplantsys temdiseaseresistance enhancetheimmunityofplants Keywords isolation Bacillus Botrytiscinereal controleffect 由 半 知 菌 亚 门 灰 葡 萄 孢 Botrytis cinerea Pers 引 起 的 灰 霉 病 是 一 种 世 界 性 病 害 病 菌 通 过 侵 染 果 蔬 的 根 茎 叶 花 和 果 实 形 成 软 腐 倒 伏 花 腐 和 果 腐 等 病 害 每 年 造 成 近 十 亿 欧 元 的 损 失 1 4 近 年 来 伴 随 着 蔬 菜 种 植 面 积 的 不 断 扩 大 灰 霉 病 发 展 成 危 害 最 为 严 重 的 病 害 之 一 因 灰 霉 菌 变 异 快 容 易 对 很 多 杀 菌 剂 产 生 抗 药 性 5 辽 宁 省 番 茄 灰 霉 病 菌 对 腐 霉 利 的 抗 药 性 呈 现 加 重 的 趋 势 EC 50 值 平 均 为3 99mg L 抗 性 频 率 达 到 83 48 6 北 京 地 区 番 茄 灰 霉 病 菌 对 多 菌 灵 乙 霉 威 腐 霉 利 与 异 菌 脲 产 生 抗 性 菌 株 的 频 率 分 别 为98 80 97 59 91 57 和92 77 3 番 茄 灰 霉 病 的 防 治 主 要 靠 化 学 药 剂 但 灰 霉 病 菌 生 理 小 种 变 异 频 繁 而 新 型 杀 菌 剂 的 研 制 周 期 又 长 实 际 生 产 过 程 中 只 有 通 过 加 大 药 剂 用 量 和 缩 短 施 药 周 期 来 进 行 防 治 以 至 于 形 成 大 药 量 到 高 抗 性 再 从 高 抗 性 到 大 药 量 的 恶 性 循 环 对 环 境 造 成 严 重 污 染 6 生 物 防 治 特 别 是 生 防 细 菌 具 有 安 全 无 污 染 不 产 生 抗 药 性 等 特 点 成 为 当 今 病 害 防 治 的 新 星 木 霉 7 放 线 菌 8 和 芽 孢 杆 菌 等 对 番 茄 灰 霉 病 有 较 好 防 治 效 果 解 淀 粉 芽 孢 杆 菌fqhm 13 的 发 酵 上 清 液 对 番 茄 灰 霉 病 防 治 效 果 可 达78 1 9 解 淀 粉 芽 孢 杆 菌B15 菌 株 发 酵 液 中 的 抑 菌 混 合 物 质 伊 枯 草 菌 素A iturinA 和 芬 芥 素 fengycin 通 过 诱 导 灰 霉 菌 丝 发 生 细 胞 凋 亡 的 形 式 来 抑 制 灰 葡 萄 孢 菌 丝 的 生 长 10 枯 草 芽 孢 杆 菌PTS 394 通 过 激 活 一 系 列 防 卫 相 关 基 因 来 诱 导 番 茄 产 生 对 灰 霉 病 的 系 统 抗 性 11 贝 莱 斯 芽 孢 杆 菌5YN8 可 以 抑 制 灰 霉 孢 子 萌 发 和 菌 丝 生 长 并 在 植 物 体 内 诱 导 基 础 免 疫 反 应 12 尽 管 有 许 多 利 用 芽 孢 杆 菌 防 治 番 茄 灰 霉 病 的 报 道 且 防 治 机 理 研 究 也 取 得 重 要 进 展 但 在 实 际 应 用 过 程 中 生 防 菌 会 受 环 境 因 素 等 多 方 面 影 响 导 致 防 治 效 率 普 遍 不 高 因 此 开 展 生 防 菌 分 离 扩 大 菌 质 资 源 寻 找 适 合 当 地 生 境 的 生 防 菌 依 然 是 目 前 生 物 防 治 工 作 的 重 点 研 究 以 番 茄 灰 霉 病 菌 为 靶 标 菌 采 用 平 板 对 峙 法 对 特 定 生 境 土 壤 中 分 离 出 的 细 菌 进 行 拮 抗 实 验 筛 选 出 对 灰 霉 病 菌 具 有 良 好 拮 抗 作 用 的 细 菌 通 过 形 态 特 征 分 析 革 兰 氏 染 色 16SrDNA 序 列 分 析 方 法 对 细 菌 进 行 初 步 的 鉴 定 并 检 测 其 防 治 效 果 以 期 丰 富 生 物 防 治 番 茄 灰 霉 病 的 生 物 资 源 为 开 发 新 型 农 用 杀 菌 剂 提 供 材 料 1 材 料 与 方 法 1 1 实 验 菌 株 及 培 养 基 供 试 病 原 菌 灰 葡 萄 孢 菌 Botrytis cinereal Pers 从 金 华 番 茄 种 植 保 护 地 中 番 茄 病 株 上 分 离 获 得 由 浙 江 师 范 大 学 化 学 与 生 命 科 学 学 院 植 物 学 实 验 室 保 藏 供 试 细 菌 菌 株 分 离 自 金 华 地 区 连 续 多 年 种 植 番 茄 的 保 护 地 土 壤 由 浙 江 师 范 大 学 化 学 与 生 命 科 学 学 院 植 物 学 实 验 室 保 藏 配 制 PDA 培 养 基 LB 培 养 基 肉 汁 胨 培 养 基 备 用 13 1 2 菌 株 的 活 化 及 发 酵 液 的 制 备 将 供 试 细 菌 及 番 茄 灰 霉 菌 分 别 接 种 至 肉 汁 胨 培 养 基 与PDA 培 养 基 斜 面 上 经 复 壮 及 重 新 分 离 后 供 试 细 菌 分 别 接 种 于 装 有50mLLB 液 体 培 养 基 的 三 角 瓶 中 28 200r min 振 荡 培 养36h 收 集 培 养 液 离 心 10000r min 4 上 清 液 用 0 22 m 微 孔 滤 膜 过 滤 除 菌 制 成 发 酵 液 后 备 用 1 3 菌 株 的 筛 选 在 超 净 工 作 台 中 将 番 茄 灰 霉 孢 子 悬 浮 液 10 6 个 mL 加 入 到 冷 却 至50 左 右 的PDA 培 养 基 中 V 悬 浮 液 V 培 养 基 1 30 将 混 有 灰 霉 孢 子 的PDA 培 养 基 摇 晃 均 匀 后 倒 入 培 养 皿 中 用 镊 子 夹 取 灭 过 菌 的 圆 形 滤 纸 片 直 径5mm 放 置 在 培 养 皿 的 正 中 央 将 供 试 菌 株 的 发 酵 液 0 22 m 微 孔 滤 膜 过 滤 后 滴 加 到 滤 纸 片 上 晾 干 后 继 续 滴 加 发 酵 液 反 复3 次 空 白 对 照 滴 加 等 量PD 培 养 基 将 上 述 培 养 皿 放 置 于37 培 养 箱 中 培 养4 5d 测 量 抑 菌 圈 直 径 并 记 录 1 6 第1 期 叶 涛 等 番 茄 灰 霉 菌 拮 抗 细 菌 的 筛 选 鉴 定 及 评 价 1 4 鉴 定 1 4 1 形 态 鉴 定 与 格 兰 氏 染 色 鉴 定 菌 落 形 态 将 待 鉴 定 菌 株 接 种 于LB 固 体 培 养 基 培 养24h 观 察 其 菌 落 形 态 菌 株 利 用 革 兰 氏 染 色 进 行 初 步 鉴 定 14 15 1 4 2 16SrDNA 基 因 扩 增 及 序 列 分 析 根 据 细 菌 基 因 组 提 取 方 法 16 提 取 候 选 菌 株 基 因 组DNA PCR 反 应 体 系 为20 L 其 中 包 括 2 Primer STAR Max Premix 混 合 反 应 缓 冲 液 10 L 购 自TaKaRa 公 司 上 下 游 引 物 为 细 菌 通 用 引 物27F 和1495R 各1 L DNA 模 板 为1 L 无 菌 水7 L 扩 增 程 序 设 定 94 下 预 变 性 4min 94 变 性1min 56 退 火1min 72 延 伸1min 经 过30 个 循 环 72 延 伸5min 95 灭 活10min 16 3min 结 束 后 在PCR 产 物 中 加0 3 L 的2 TaqMasterMix 购 自TaKaRa 公 司 给 扩 增 片 段 两 头 加A 碱 基 以 连 接T 载 体 反 应 条 件 为 72 加A10min 结 束 后 用1 琼 脂 糖 电 泳 检 测PCR 扩 增 产 物 用DNA 纯 化 试 剂 盒 购 自Anxgell 回 收 目 标 片 段 与pGEM TEasy 载 体 购 自Promega 公 司 连 接 经 筛 选 得 到 的 阳 性 克 隆 送 杭 州 擎 科 梓 熙 生 物 技 术 有 限 公 司 测 序 将PCR 产 物 核 苷 酸 序 列 通 过GenBank 中 的 Bankit 界 面 提 交 至GenBank 数 据 库 Blast 进 行 序 列 比 对 以 搜 索 得 到 的 同 源 序 列 为 依 据 下 载 其 同 属 近 缘 菌 种 的16SrDNA 序 列 运 用MEGA6 程 序 构 建 系 统 发 育 树 采 用 邻 接 法 Neighbor Joining 系 统 树 的 检 验 用Bootstrap 1000 次 重 复 1 5 JH 2 菌 株 发 酵 液 对 番 茄 灰 霉 病 的 防 治 效 果 利 用 实 验 检 测 方 法 11 对 番 茄 离 体 叶 片 灰 霉 病 菌 致 病 性 及 盆 栽 防 治 效 果 分 析 实 验 受 试 番 茄 品 种 为Heinz1706 接 种 后 培 养3d 观 察 记 录 结 果 以 叶 片 上 最 长 的 病 斑 为 长 mm 最 宽 的 病 斑 为 宽 mm 病 斑 面 积 及 发 病 程 度 计 算 公 式 如 下 病 斑 面 积 长 宽 4 发 病 程 度 病 斑 面 积 整 个 叶 面 积 100 病 情 指 数 分 级 标 准 0 级 无 病 斑 1 级 病 斑 占 整 个 叶 面 积 的5 以 下 3 级 病 斑 占 整 个 叶 面 积 的 5 15 5 级 病 斑 占 整 个 叶 面 积 的 15 25 7 级 病 斑 占 整 个 叶 面 积 的 25 50 9 级 病 斑 占 整 个 叶 面 积 的50 及 以 上 病 情 指 数 及 相 对 防 治 效 果 计 算 公 式 如 下 病 情 指 数 各 级 病 叶 数 该 病 级 数 调 查 总 叶 数 最 高 级 数 100 相 对 防 治 效 果 对 照 病 情 指 数 处 理 病 情 指 数 对 照 病 情 指 数 100 2 结 果 与 分 析 2 1 拮 抗 菌 株 的 筛 选 进 一 步 对 实 验 室 前 期 得 到 的5 株 细 菌 进 行 拮 抗 筛 选 发 现 其 对 番 茄 灰 霉 菌 都 具 有 较 强 的 拮 抗 活 性 抑 菌 圈 直 径 均 大 于14mm 其 中JH 2 菌 株 抑 菌 圈 直 径 最 大 为16mm 见 图1 a 灰 霉 孢 子 培 养 基 b 发 酵 液 与 灰 霉 对 峙 模 式 图 PD 为 马 铃 薯 液 体 培 养 基 c JH 1 与 灰 霉 对 峙 培 养 基 d JH 4 与 灰 霉 对 峙 培 养 基 e HQ 3 与 灰 霉 对 峙 培 养 基 f HQ 2 与 灰 霉 对 峙 培 养 基 g JH 2 与 灰 霉 对 峙 培 养 基 图1 菌 株 发 酵 液 对 番 茄 灰 霉 的 拮 抗 作 用 2 6 浙 江 师 范 大 学 学 报 自 然 科 学 版 2020 年 2 2 拮 抗 细 菌JH 2 菌 株 的 鉴 定 2 2 1 形 态 及 格 兰 氏 染 色 菌 株 在PDA 平 板 上 生 长 菌 落 呈 花 瓣 形 不 透 明 表 面 褶 皱 乳 白 边 缘 整 齐 见 图2a 格 兰 氏 染 色 结 果 表 明 该 菌 为 格 兰 氏 阳 性 见 图2b 综 合JH 2 菌 株 的 形 态 特 征 和 格 兰 氏 染 色 初 步 鉴 定 为 芽 孢 杆 菌 属 14 图2 JH 2 形 态 特 征 及 革 兰 氏 染 色 图3 JH 2PCR 扩 增 电 泳 图 2 2 2 拮 抗 细 菌 的16SrDNA 的 序 列 分 析 JH 2 菌 株 的16S rDNA 经 测 序 后 序 列 长 1460bp 见 图3 通 过GenBank 得 到 序 列 登 录 号 为MK203823 在NCBI 中Blast 比 对 分 析 下 载 同 源 性 高 的 同 属 菌 种 利 用MEGA6 程 序 构 建 系 统 发 育 树 见 图4 采 用 邻 接 法 Neighbor Join ing 系 统 树 的 检 验 用Bootstrap1000 次 重 复 发 现 菌 株JH 2 与 来 源 于 一 个 玉 米 种 植 田 的 解 淀 粉 芽 孢 杆 菌 AB735995 1 同 源 性 几 乎 完 全 相 同 确 证JH 2 为 解 淀 粉 芽 孢 杆 菌 图4 JH 2 菌 株16SrDNA 序 列 的 系 统 发 育 树 2 3 拮 抗 细 菌JH 2 灌 根 后 对 番 茄 灰 霉 病 防 治 效 果 接 种3d 后 对 照 叶 片 出 现 大 面 积 的 坏 死 病 斑 而 菌 株JH 2 处 理 后 的 叶 片 呈 现 较 少 的 坏 死 区 域 见 图5a 菌 株JH 2 处 理 的 番 茄 叶 片 病 斑 面 积 为 对 照 处 理 的77 病 斑 占 叶 片 面 积 比 例 为 64 38 无 菌 水 对 照 叶 片 病 斑 占 叶 面 积 的 比 例 为 83 17 见 图5b 通 过 计 算 得 出 菌 株JH 2 诱 发 的 番 茄 抗 病 性 对 灰 霉 的 防 治 效 果 达22 3 根 据 病 情 指 数 分 级 标 准 见 图6 盆 栽 番 茄 灰 霉 病 发 病 指 数 调 查 显 示 见 表1 无 菌 水 对 照 处 理 番 茄 灰 霉 病 病 情 指 数 为37 8 而 菌 株JH 2 处 理 的 发 病 指 数 为23 1 菌 株JH 2 处 理 的 防 治 效 果 为38 9 实 验 表 明 菌 株JH 2 通 过 灌 根 处 理 也 可 诱 导 番 茄 对 灰 霉 病 的 抗 性 表1 不 同 处 理 下 病 情 指 数 统 计 表 叶 片 数0 级 1 级 3 级 5 级 7 级 9 级 病 情 指 数 JH 2 灌 根 50 20 16 4 2 3 5 23 1 无 菌 水 灌 根 50 20 9 1 3 5 12 37 8 3 6 第1 期 叶 涛 等 番 茄 灰 霉 菌 拮 抗 细 菌 的 筛 选 鉴 定 及 评 价 图5 JH 2 对 番 茄 灰 霉 的 离 体 叶 片 防 效 图6 病 情 指 数 分 级 标 准 3 讨 论 随 着 人 们 对 食 品 安 全 认 识 的 提 高 和 对 健 康 的 关 注 生 物 农 药 越 来 越 受 到 重 视 从 不 同 生 境 和 作 物 中 分 离 潜 在 的 微 生 物 种 质 资 源 是 开 发 生 物 农 药 的 主 要 手 段 研 究 表 明 从 寄 主 与 病 原 菌 共 存 的 土 壤 中 筛 选 到 理 想 生 防 菌 株 的 可 能 性 较 大 推 测 拮 抗 菌 株 与 病 原 菌 之 间 除 具 有 竞 争 拮 抗 关 系 外 还 具 有 共 存 相 随 关 系 17 芽 孢 杆 菌 是 非 常 重 要 的 一 类 生 防 菌 应 用 十 分 广 泛 部 分 菌 株 在 国 内 外 均 有 商 品 化 的 制 剂 用 于 防 治 多 种 植 物 病 害 及 作 为 饲 料 添 加 剂 增 加 动 物 免 疫 能 力 18 19 芽 孢 杆 菌 可 以 分 泌 抗 菌 肽 19 脂 肽 类 20 和 水 解 酶 类 物 质 21 等 物 质 来 抑 制 病 原 物 生 长 也 可 以 通 过 产 生 活 性 小 分 子 物 质 激 活 水 杨 酸 信 号 通 路 而 引 起 系 统 获 得 抗 性 SAR 22 其 中 解 淀 粉 芽 孢 杆 菌 能 够 通 过 非 核 糖 体 途 径 合 成 具 有 抗 真 菌 活 性 的 环 状 脂 肽 芽 孢 菌 霉 素 bacillomycinD 和fengycin 23 也 能 通 过 聚 酮 合 酶 合 成 具 有 抗 白 叶 枯 菌 活 性 的 聚 酮 化 合 物 地 非 西 丁 Difficidin 和 芽 孢 菌 溶 素 bacilysin 24 本 研 究 从 番 茄 多 年 种 植 保 护 地 土 壤 中 分 离 得 到 了 一 株 对 番 茄 灰 霉 菌 具 有 较 强 拮 抗 作 用 的 菌 株JH 2 经 形 态 学 生 化 与 分 子 手 段 鉴 定 明 确 该 菌 株 为 解 淀 粉 芽 孢 杆 菌 在 对 峙 实 验 中 JH 2 发 酵 液 对 番 茄 灰 霉 菌 有 较 强 的 抑 制 效 果 由 于2 种 微 生 物 没 有 直 接 接 触 说 明 分 离 菌 株 可 能 分 泌 了 抗 菌 肽 脂 肽 类 或 其 他 挥 发 性 物 质 对 灰 霉 菌 产 孢 孢 子 萌 发 与 菌 丝 的 生 长 产 生 抑 制 作 用 已 有 研 究 表 明 一 些 芽 孢 杆 菌 产 生 的 挥 发 物 可 以 使 菌 丝 细 胞 内 发 生 较 为 强 烈 的 程 序 性 细 胞 坏 死 与 活 性 氧 的 积 累 导 致 菌 丝 生 长 受 到 抑 制 10 挥 发 物 也 可 以 使 菌 丝 的 形 态 结 构 发 生 改 变 菌 丝 消 融 细 胞 膜 破 裂 与 原 生 质 体 渗 漏 最 终 产 孢 结 构 异 常 而 导 致 孢 子 产 生 受 到 抑 制 25 因 此 需 要 在 今 后 进 一 步 明 确JH 2 是 通 过 何 种 方 式 抑 制 灰 霉 菌 生 长 此 外 在 番 茄 上 施 加 发 酵 上 清 液 后 增 强 了 番 茄 对 灰 霉 病 的 抗 性 表 明JH 2 除 了 可 以 产 生 直 接 抑 制 真 菌 生 长 的 物 质 外 可 能 还 会 分 泌 一 些 具 有 诱 导 抗 性 的 活 性 物 质 诱 导 抗 性 主 要 分 为 ISR 与SAR2 种 前 者 是 由 茉 莉 酸 JA 途 径 介 导 后 者 则 依 赖 于 水 杨 酸 SA 信 号 途 径 芽 孢 杆 菌 可 以 产 生 某 种 或 某 些 挥 发 性 物 质 诱 导 其 产 生 ISR 26 它 的 代 谢 产 物 也 会 使 一 些SA 信 号 途 径 中 的 关 键 酶 活 性 提 高 和 诱 导PR1a 和NPR1 的 表 达 说 明 具 有 激 活SAR 抗 性 的 能 力 11 贝 莱 斯 芽 孢 杆 菌5YN8 除 了 具 有 诱 导SAR 抗 性 能 力 外 还 具 有 诱 导 系 统 性 抗 性 的 能 力 12 这 表 明 不 同 生 防 菌 的 抗 性 机 制 具 有 多 样 性 和 部 分 重 叠 性 因 此 将 不 同 抗 性 机 制 的 生 防 菌 混 合 使 用 可 能 对 提 高 抗 性 具 有 重 要 作 用 JH 2 在 番 茄 上 的 这 种 诱 导 抗 性 究 竟 属 于ISR 或SAR 需 要 通 过 分 子 生 物 学 的 方 法 进 一 步 鉴 定 此 外 也 需 要 对JH 2 分 泌 4 6 浙 江 师 范 大 学 学 报 自 然 科 学 版 2020 年 的 活 性 物 质 进 行 分 离 与 纯 化 以 进 一 步 明 确 该 菌 株 的 诱 导 抗 性 机 制 总 之 实 验 中 分 离 获 得 的 一 株 解 淀 粉 芽 孢 杆 菌 具 有 直 接 抑 制 番 茄 灰 霉 菌 生 长 的 作 用 同 时 也 具 有 诱 导 植 物 产 生 系 统 性 抗 性 的 能 力 参 考 文 献 1 赵 杨 苗 则 彦 李 颖 等 番 茄 灰 霉 病 防 治 研 究 进 展 J 中 国 植 保 导 刊 2014 34 7 21 29 2 纪 军 建 张 小 风 王 文 桥 等 番 茄 灰 霉 病 防 治 研 究 进 展 J 中 国 农 学 通 报 2012 28 31 109 113 3 乔 广 行 严 红 么 奕 清 等 北 京 地 区 番 茄 灰 霉 病 菌 的 多 重 抗 药 性 检 测 J 植 物 保 护 2011 37 5 176 180 4 RALPHD JANAL VANK etal Thetop10fungalpathogensinmolecularplantpathology J MolPlantPathol 2012 doi 10 1111 j 1364 3703 2012 00822 x 5 OLIVEIRAMS AMIRIA ZUNIGAAI etal SourcesofprimaryinoculumofBotrytiscinereaandtheirimpactonfungicideresistancedevelop mentincommercialstrawberryfields J PlantDis 2017 101 10 1761 1768 6 杜 颖 付 丹 妮 邹 益 泽 等 2017 年 辽 宁 省 番 茄 灰 霉 病 菌 对 腐 霉 利 的 抗 药 性 现 状 及 机 制 研 究 J 中 国 蔬 菜 2018 1 58 65 7 ELADY BiocontrolTrichodemaharzianumT39preparationforbiocontrolofplantdiseasescontrolofBotrytiscsclerotiorumandCladosporium fulvum J BiocontrolSciTechn 2000 10 4 499 507 8 石 玉 莹 宋 海 慧 苗 爽 等 番 茄 灰 霉 病 和 叶 霉 病 拮 抗 细 菌WXCDD51 的 筛 选 鉴 定 及 其 生 防 促 生 作 用 J 园 艺 学 报 2017 44 10 1925 1936 9 王 亚 杰 高 宇 陈 晓 萌 等 解 淀 粉 芽 胞 杆 菌 防 治 番 茄 果 实 灰 霉 病 及 其 抑 菌 物 质 分 析 J 园 艺 学 报 2018 45 7 1296 1304 10 潘 虹 余 金 玮 鋆 张 晓 蒙 等 解 淀 粉 芽 孢 杆 菌B15 抑 菌 物 质 对 葡 萄 灰 霉 病 灰 葡 萄 孢 的 抑 菌 机 理 J 微 生 物 学 报 2018 58 7 1245 1254 11 乔 俊 卿 张 心 宁 梁 雪 杰 等 枯 草 芽 孢 杆 菌PTS 394 诱 导 番 茄 对 灰 霉 病 的 系 统 抗 性 J 中 国 生 物 防 治 学 报 2017 33 2 219 225 12 JIANGCH LIAOMJ WANGHK etal Bacillusvelezensis apotentialandefficientbiocontrolagentincontrolofpeppergraymoldcaused byBotrytiscinerea J BiolControl 2018 126 147 157 13 方 中 达 植 病 研 究 方 法 M 3 版 北 京 中 国 农 业 出 版 社 1998 14 东 秀 珠 蔡 妙 英 常 见 细 菌 系 统 鉴 定 手 册 M 北 京 科 学 出 版 社 2001 15 HOLTJG KRIEGNR SNEATHPHA etal Bergey smanualofdeterminativebacteriology M 9thed Philadelphia LippincottWilliams andWilkins 1994 16 张 飞 鹏 枯 草 芽 孢 杆 菌X2 菌 株 的 筛 选 与 应 用 D 哈 尔 滨 黑 龙 江 八 一 农 垦 大 学 2011 17 张 斌 乔 俊 卿 梁 雪 杰 等 番 茄 枯 萎 病 菌 和 青 枯 病 菌 拮 抗 细 菌 的 评 价 J 植 物 保 护 学 报 2015 42 3 353 361 18 石 水 琴 蒋 雯 袁 林 等 4 株 芽 孢 杆 菌 的 分 离 鉴 定 与 生 物 学 特 性 分 析 J 江 苏 农 业 科 学 2018 46 2 112 115 19 赵 新 林 赵 思 峰 枯 草 芽 孢 杆 菌 对 植 物 病 害 生 物 防 治 的 作 用 机 理 J 湖 北 农 业 科 学 2011 50 15 167 172 20 薛 鹏 琦 刘 芳 乔 俊 卿 等 油 菜 菌 核 病 生 防 芽 孢 杆 菌 的 分 离 鉴 定 及 其 脂 肽 化 合 物 分 析 J 植 物 保 护 学 报 2011 38 2 127 132 21 林 福 呈 李 德 葆 枯 草 芽 孢 杆 菌 Bacillussubtilis S9 对 植 物 病 原 真 菌 的 溶 菌 作 用 J 植 物 病 理 学 报 2003 33 2 174 177 22 姜 莉 莉 陈 彦 闯 辛 明 秀 枯 草 芽 孢 杆 菌 在 防 治 植 物 病 害 上 的 应 用 及 研 究 进 展 J 安 徽 农 学 通 报 2009 15 7 37 39 23 KOUMOUTSIA CHENXH HENNEA etal Structuralandfunctionalcharacterizationofgeneclustersdirectingnonribosomalsynthesisof bioactivecycliclipopeptidesinBacillusamyloliquefaciensstrainFZB42 J JBacteriol 2004 186 4 1084 1096 24 WUL WUH CHENL etal DifficidinandbacilysinfromBacillusamyloliquefaciensFZB42haveantibacterialactivityagainstXanthomonas oryzaericepathogens J SciRep UK 2015 5 5 1 9 25 邓 建 良 刘 红 彦 刘 玉 霞 等 解 淀 粉 芽 孢 杆 菌YN 1 抑 制 植 物 病 原 真 菌 活 性 物 质 鉴 定 J 植 物 病 理 学 报 2010 40 2 202 209 26 RYUCM FARAGMA HUCH etal BacterialvolatilespromotegrowthinArabidopsis J PNAS 2003 100 8 4927 4932 责 任 编 辑 徐 玲 玲 5 6 第1 期 叶 涛 等 番 茄 灰 霉 菌 拮 抗 细 菌 的 筛 选 鉴 定 及 评 价