草莓病毒病、脱毒技术及病毒检测研究进展.pdf

果 树 资 源 學 報 2020 1 4 66 7 1 草 莓 病 毒 病 脱 毒 技 术 及 病毒检测研究进展 霍 辰 思 樊 新 萍 刘 伟 山西农业大学果树研究所 山 西 太 原 030031 收 稿 日 期 2020 03 24 基 金 项 目 脱毒草莓立体设施集约化育苗技术研发 项 目 编 号 晋 财 农 2017 48 1 第 一 作 者 简 介 霍 辰 思 1988 女 硕 士 研 究 实 习 员 主要从事草莓栽培育种的研究 电 话 1 3 5 4 6 3 0 2 2 6 8 通 讯 作 者 樊 新 萍 197 3 女 博 士 研 究 员 主要从事草莓栽培育种的研究 电 话 1 3 8 3 4 8 3 6 8 0 7 摘 要 针对草莓主要病毒病及其为害特点 草莓脱毒主要技术及病毒检测技术进行综述 介 绍 了 近年来草莓脱毒苗繁育技术 以期对草莓生产提供理论指导作用 关 键 词 草 莓 病 毒 病 脱 毒 技 术 病 毒 检 测 文 章 编 号 2096 8108 2020 04 0066 06 中 图 分 类 号 S668 4 文 献 标 识 码 A Re s e a r c h Ad v a n c e in De t o x i f ic a t io n T e c h n iq u e a n d V ir u s De t e c t io n o f S t r a w b e r r y V ir u s Dis e a s e H UO Ch ens i FAN Xi np i ng LIU Wei Fr u i t Tr ee Res ear chIns t i t u t e o fSh anx iAg r i cu l t u r alUni v er s i t y Tai y u an 030031 Ch i na Ab s t r a c t Th e i nj u r i o u s ch ar act er i s t i cs o fs t r aw ber r y v i r u s di s eas e mai n t ech no l o g i es o fs t r aw ber r y det o x i f i cat i o n andv i r u s det ect i o n t ech ni q u es w er e s u mmar i z edi n t h i s r es ear ch Th e br eedi ngt ech ni q u eo fv i r u s f r ee s t r aw ber r y w as i nt r o du ced i n o r der t op r o v i de t h eo r et i cal g u i dance o fs t r aw ber r y p r o du ct i o n Ke y w o r d s s t r aw ber r y v i r u s di s eas e det o x i f i cat i o n t ech no l o g y v i r u s det ect i o n 草 莓 Ro s aceae Fr a g a r i a 在 园 艺 学 上 属 浆 果 类 果 树 多 年 生 蔷 薇 科 草 本 植 物 1 其 资 源 类 型 多 样 适 应 强 栽 培 面 积 广 是 一 种 重 要 的 经 济 作 物 果 肉 香 甜 多 汁 含 有 大 量 微 量 元 素 和 维 生 素 营 养 价 值 极 高 素 有 水 果 皇 后 之 美 称 是一种深受大众喜 爱 的 水 果 多 以 无 性 繁 殖 为 主 其 繁 殖 方 式 有 匍 匐 茎 繁 殖 新 茎 分 株 繁 殖 和 离 体 繁 殖 然 而 通 过 传 统 繁 殖 方 法 并 不 能 有 效 脱 除 病 毒 很多农业企业只注 重 产 量 对生产中出现的病毒病并没有得到有效重 视 由 于 多 年 连 作 种 性 退 化 严 重 草莓病毒病严重 影 响 产 量 其主要表现为植株生长缓慢 叶 片 皱 缩 见 斑 驳 果 实 畸 形 品 质 变 差 2 目 前 草 莓 斑 驳 病 毒 草 莓 轻 型 黄 边 病 毒 草 莓 镶 脉 病 毒 草 莓 皱 缩 病 毒和草莓潜隐环斑病毒是栽培生产上广泛侵染草莓 的 几 种 病 毒 53 草 莓 同 马 铃 薯 甘 薯 山 药 等 无 性 繁 殖 植 物 一 样 一 旦 感 染 病 毒 就 会 传 染 给 后 代 随 着 无 性 繁 殖 系 数 不 断 扩 大 病毒传播速度也逐渐加快 草 毒 植 株 本 身 对 病 毒 并 没 有 免 疫 能 力 目 前 尚 没 有 特 效 方 法 或 外 用 药 剂 可 以 治 愈 病 毒 病 获 得 草 莓 无 病 毒 苗 的 有 效 方 法 仍 是 通 过 组 培 脱 毒 得 到 无 病 毒 原 种 植 株 然 后 将 无 病 毒 苗 进 行 扩 繁 从 而 达 到 满 足 市 场 的 需 求 量 4 目 前 在草莓病毒脱除方面 热 处 理 结 合 茎尖培养脱毒法国内外普遍采用的一种方法 5 6 但这种方法存在操作时技术难度大 培 养 周 期 耗 时 长 脱 毒 环 境 要 求 高 脱毒苗成活率低等问题 本 文 通 过 对 草 莓 病 毒 病 的 研 究 现 状 脱 毒 技 术 及 病 毒 检 测 鉴 定 等 方 面 的 研 究 进 行 综 述 以 期 对 草 莓 生 产 起 到 指 导 作 用 1 草莓主要病毒病类型 1 1 草 莓 斑 驳 病 毒 s t r a w b e r r y m o t t l e v i r u s S Mo V 草 莓 斑 驳 病 毒 又 叫 草 莓 轻 型 皱 缩 病 毒 属 伴 生 豇 豆 病 毒 科 S e c o v i r i d a e S a d w a v i r u s 病 毒 属 2 病 毒 粒 子 形 状 为 球 形 通 常 存 在 于 植 株 叶 片 的 表 层 韧皮部以及薄壁细胞里 1938 年 第 1 次 在英格兰凤梨草莓上发现该病毒 存 在 范 畴 广 该 6 6 病 毒 属 典 型 的 半 持 久 类 蚜 虫 传 染 其 传 播 途 径 以 草 莓 钉 毛 蚜 为 主 托 马 斯 毛 管 蚜 花 毛 管 蚜 棉 蚜 等 蚜 虫 皆 可 传 播 通过嫁接和机械接种进行传染 不 能 通 过 草 莓 种 子 传 染 植株间相互触碰也不会被传染 感 染 该 病 毒 草 莓 的 主 要 症 状 为 叶 脉 透 明 水 渍 化 脉 序 杂 乱 叶 片 褪 绿 见 斑 驳 植 株 矮 化 病 症 随 季 节 变 化 其 表 现 略 有 不 同 或 无 症 状 但随着侵染时间延长 也 会 导 致 植 株 生 长 势 减 弱 产 量 降 低 1 2 草 莓 镶 脉 病 毒 s t r a w b e r r y v e i n b a n d v i r u s S V BV 草 莓 镶 脉 病 毒 属 花 椰 菜 花 叶 病 毒 科 Ca u l i m o v i r i d a e 花 椰 菜 病 毒 属 Ca u l i m o v i r u s 2 病 毒 粒 子 体 积 较 大 呈 球 型 没 有 包 膜 通常于细胞质里进 行 复 制 依 附 于 叶 片 表 面 植 株 表 皮 跟 木 质 部 连 接 的 维 管 束 以 及 细 胞 质 英 国 科 学 家 于 1952 年 从 美 国 巴 西 等 地 引 进 的 草 莓 品 种 Fai r f ax 上 首 次 发 现 该 病 毒 随 后 在 全 球 范 围 广 泛 传 播 它 属 于 半 持 久 性 蚜 传 病 毒 同 草 莓 斑 驳 病 毒 类 似 主要通过草莓钉 毛 蚜 进 行 传 播 鉴于其在传播媒介里不能进行复制 所 以 无 法 通 过 汁 液 传 染 也不能通过种子及花粉传 染 研 究 发 现 弗 吉 尼 亚 草 莓 丛 林 草 莓 智 利 草 莓 等被该病毒侵染后植株症状为叶脉发黄 叶 片 边 缘 呈 不 规 则 黄 色 新 叶 细 弱 畸 形 等 由 于 该 病 毒 来 源 复 杂 不 同 地 域 坏 境 下 SVBV 基 因 组 分 子 存 在 差 异 这 也 导 致 危 害 特 点 传 播 媒 介 各 不 相 同 1 3 草 莓 皱 缩 病 毒 s t r a w b e r r y c r i n k l e v i r u s S CV 草 莓 皱 缩 病 毒 属 弹 状 病 毒 科 Rh a b d o v i r i d a e 细 胞 质 弹 状 病 毒 属 Cy t o r h a b d o v i r u s 2 病 毒 学 家 普 遍 认 为 草 莓 潜 A 和 潜 B 病 毒 与 SCV 同 属 一 类 病 毒 现 如 今 大 范 畴 存 在 于 国 内 外 还 有 着 株 系 分 化 的 情 况 病毒粒子形状呈子弹状 通 常 依 附 在 植 株 表 皮 导管跟筛管周围的软体组织细胞里 该 病 毒 的 传 播 媒 介 通 常 是 草 莓 钉 毛 蚜 传 染 性 持 久 可 以 在 昆 虫 的 体 内 完 成 复 制 还 可 以 通 过 接 种 及 嫁 接 的 形 式 传 播 植 株 彼 此 触 碰 不 会 发 生 传 染 种 子 跟 花 粉 同 样 不 会 传 播 病 毒 在生产上主要危害丛林草 莓 受 其 侵 染 后 花 瓣 变 形 缺 瓣 植 株 叶 片 畸 形 叶 脉 边缘出现大面积不规则褪绿斑及坏死斑 叶 脉 由 绿 色 变 为 水 渍 透 明 状 幼叶生长大小不均 皱 缩 扭 曲 小 叶 黄 化 植 株 矮 化 果 实 畸 形 严重制约草莓产量 1 4 草 莓 潜 环 斑 病 毒 s t r a w b e r r y l a t e n t r i n g s p o t v i r u s S LRS V 草 莓 潜 环 斑 病 毒 属 豇 豆 花 叶 病 毒 科 S e c o v i r i d a e 线虫传多面体病毒属 Ne p o v i r u s 2 通 常 存 在 于 欧 洲 美 国 及 俄 罗 斯 等 国 家 中 国 目 前 尚 未 发 现 该 病 毒 病毒粒子形状尚不确定 有 文 献 报 道 其 粒 子 形 态 为 球 型 主要以长剑线虫为媒介传播 主 要 感 染 种 球 苗 木 以 及 块 茎 植 株 受 到 病 毒 侵 染 后 主 要 表 现 为 叶 片 畸 形 褪 绿 黄 化 植 株 矮 小 果 实 品 质 下 降 危 害 严 重 时 可 绝 产 1 5 草 莓 轻 型 黄 边 病 毒 s t r a w b e r r y m i l d y e l l o w e d g e v i r u s S MY EV 草莓轻型黄边病毒属甲型线性病毒科 Al p h a f l e x i v i r i d a e 暂 定 为 马 铃 薯 病 毒 属 Po t e x v i r u s 2 苏 代 发 2 在 文 献 中 阐 述 在 1992 年 时 这 种 病 毒 首 次 发 现 于 美 国 加 州 之 后 澳 大 利 亚 欧 洲 和 日 本 等 地 相 继 发 现 此 病 毒 现 如 今 在 国 内 外 广 泛 传 播 病 毒 粒 子 呈 线 性 属 单 链 正 义 RNA 该 病 毒 传 播 媒 介 通 常 是 草 莓 钉 毛 蚜 不 能 在 其 他 传 播 媒 介 中 繁 殖 这种病毒单独侵染危害小 通 常 是 跟 其 他 多 种 病 毒 共 同 侵 袭 植 株 受病毒复合侵染后表现 嫩 叶 绿 色 褪 除 出 现 黄 色 斑 点 老 叶 出 现 坏 死 条 斑 叶 片 大 面 积 枯 死 植 株 变 矮 果 实 畸 形 果 品 变 差 极 大 程 度 影 响 草 莓 产 量 2 草 莓 脱 毒 技 术 2 1 草莓茎尖培养脱毒 植物茎尖分生组织由不断分裂的细胞组成 由 于 其 生 长 旺 盛 细 胞 分 裂 快 且 在 1 0 mm 范 围 内 受 病 毒 浸 染 小 因 此 生 产 上 广 泛 使 用 的 方 法 仍 是 草 莓 茎 尖 脱 毒 13 Bel k eng r en andM i l l er 最 早 应 用 组 培 法 获 得 了 草 莓 无 病 毒 苗 法 国 学 者 M o r el 14 证 明 已感染病毒的植株通过茎尖分生组织培养 可 以 恢 复 成 无 病 毒 植 株 茎尖大小直接影响着脱毒效果 由于病毒广泛存在于无维管束的分生区域内 需 依 靠 胞 间 连 丝 进 行 传 递 茎尖分生区域的细胞分裂 生 长 速 度 较 快 病毒的传递速度较茎尖分生细胞慢 所 以 生 长 点 病 毒 含 量 最 低 15 然 而 组 培 中 剥 取 茎 尖 大 小 直 接 影 响 其 脱 毒 率 茎尖越小脱毒率越高 而 成 活 率 却 有 所 降 低 且 剥 取 范 围 越 小 操 作 难 度 越 大 因 此 掌 握 合 适 的 剥 取 范 围 对 脱 毒 率 和 成 活 率 至 关 重 要 沈 磊 童 尧 明 51 等切取草莓茎尖分生组织 0 2 0 4 mm 进 行 组 培 出 苗 率 为 83 90 脱 毒 率 高 达 100 高 山 林 16 把切取的草莓芽冲洗 后 通 过 高 温 短时间快速热处理 用 茎 尖 培 养 法 获 得 无 病 毒 草 莓 苗 高 遐 虹 17 在 试 验 中 采 用 二 次 脱 毒 方 法 即 第 1 次不剥离茎芽的苞叶 直 接 切 割 茎 尖 7 6 霍 辰 思 等 草 莓 病 毒 病 脱毒技术及病毒检测研究进展 进 行 组 培 脱 毒 将 培 养 2 个月后的组培苗从瓶中取 出 再 次 切 取 0 4 0 6mm 的 茎 尖 进 行 第 2 次 脱 毒 培 养 获 得 分 化 率 和 脱 毒 率 分 别 为 7 9 2 和 84 5 的 草 莓 脱 毒 苗 何 欢 乐 18 等 研 究 表 明 取 大 约 0 5 mm 茎 尖 进 行 二 次 脱 毒 培 养 脱 毒 率 高 达 100 但 成 活 率 却 大 大 降 低 为 26 综 合 前 期 研 究 表 明 采 用 茎 尖 脱 毒 茎 尖 大 小 通 常 控 制 在 0 2 0 4 mm 左 右 脱 毒 率 最 高 若 热 处 理 时 间 过 长 会 阻 碍 茎 尖 正 常 生 长 导 致 存 活 率 下 降 综 上 所 述 传 统茎尖培养及二次脱毒茎尖培养技术虽是获得无毒 苗 的 有 效 手 段 但 存 在 操 作 复 杂 耗 时 长 工 作 效 率 低 的 问 题 因 此 摸 索 出 一 套 高 效 快 捷 简 便 的 脱 毒 方 法 至 关 重 要 2 2 热 处 理 脱 病 毒 自 然 界 大 多 数 的 病 毒 粒 子 都 有 不 耐 高 温 特 性 热处理脱毒就是利用高温能使病毒粒子失活 达 到 灭 活 效 果 21 热 处 理 包 括 热 水 处 理 和 热 气 处 理 目 前脱毒效果较好的方法是利用恒温或变温的热空气 处 理 带 病 植 株 剪取热处理后长出的新芽进行嫁接 或 进 行 组 织 培 养 得到无病毒的草莓原种植株 肖 君 泽 19 通 过 37 38 恒 温 或 35 38 变 温 处 理 草 莓 茎 尖 有 效 降 低 热 处 理 后 植 株 死 亡 率 廖 俊 杰 20 等 将 育 苗 钵 培 养 的 草 莓 苗 于 38 恒 温 箱 处 理 15 d 后 并 没 有 脱 除 病 毒 处 理 90 d 后 脱 毒 率 仅 为 66 刘 健 21 在 文 献 中 表 述 茎 尖 在 40 与 42 水 浴 处 理 的 脱 毒 率 均 可 达 100 综 合 考 虑 成 活 率 与 脱 毒 率 热 处 理 温 度 以 40 为 好 2 3 化 学 试 剂 脱 毒 化学疗法脱毒就是利用化学试剂在植物体内可 以 延 迟 或 是 抑 制 病 毒 复 制 从而使植物摆脱病毒的 一 种 外 界 干 预 法 该方法对茎尖大小要求不高 无 需特定范围的茎尖也能得到较好的脱毒效果 对 于 化学药剂处理脱毒的机制尚未有很深入的研究 目 前 植 物脱毒的化学试剂主要有三氮唑核苷 病 毒 唑 5 二 氢 尿 嘧 啶 DH T 放 线 菌 素 碱 性 孔 雀 绿 及 环 乙 酰 胺 等 其中病毒唑是应用最广的化学试剂 1953 1954 年 D No r r i s 最 早 将 孔 雀 绿 用 于 马 铃 薯 无 病 毒 苗 培 育 脱 掉 了 马 铃 薯 X 病 毒 获 得 了 马 铃 薯 无 病 毒 苗 廖 俊 杰 20 等 采 用 培 养 基 化 学 疗 法 和 田 间 化 学 疗 法 进 行 对 比 试 验 在 培 养 基 中 加 入 化 学 试 剂 后 切 取 适 当 茎 尖 进 行 组 培 获 得 比 对 照 田 间 化 学 疗 法 高 7 0 的 脱 病 毒 率 秦 梅 22 在 甘 薯 脱 毒 培 养 基 中 加 入 10 mg L 的 三 氮 唑 核 苷 后 脱 毒 率 可 达 到 7 6 Cas s el l s 23 等 将 病 毒 唑 加 入 培 养 基 中 通 过 组 培 可 脱 除 马 铃 薯 多 种 病 毒 通 过 化 学 疗 法 虽 然 能 得 到 脱 病 毒 植 株 但 是 会 有 轻 度 药 害 现 象 发 生 有研究表明其毒性会遗留在新生植株内 随 后 进 入 人 体 与现在提倡的绿色环保无公害作物相驳 出 于 安 全 实 效 性 考 虑 很难在生产中推广应用 2 4 热处理与茎尖培养相结合脱毒 利 用 传 统 的 热 处 理 脱 毒 由 于 茎 尖 在 高 温 高 湿 环 境 下 处 理 时 间 过 长 植 株 易 枯 死 容 易 受 红 蜘 蛛 蚜 虫 等 昆 虫 危 害 且 不 同 病 毒 对 高 温 的 耐 受 性 不 同 单纯依靠热处理并不能有效脱除病毒 而 热 处 理与茎尖培养相结合比常规脱毒效果更好 目 前 该 技 术 在 生 产 上 普 遍 使 用 王 际 轩 24 将 生 长 旺 盛 的 草 莓 盆 栽 苗 于 38 40 温 度 下 热 处 理 42d 选 取 热 处理后大小合适的茎尖进行组织培养 脱 毒 率 能 达 到 7 0 左 右 何 欢 乐 46 在 草 莓 茎 尖 培 养 脱 毒 效 果 研究中采用改良热处理茎尖培养法 先 将 草 莓 匍 匐 茎 于 40 水 浴 处 理 4 h 后 剥 取 0 5 0 6mm 左 右 的 茎 尖 进 行 培 养 获 得 47 37 茎 尖 成 活 率 刘 健 21 在 试 验 中 设 计 40 和 42 两 个 温 度 梯 度 处 理 后 的 茎 尖 脱 毒 率 均 可 达 到 100 但 鉴 于 时 间 长 短 对 茎 尖 有 影 响 力 一 般 采 用 40 处 理 4h 为 宜 李 志 强 25 等 以 草 莓 品 种 红 颜 章 姬 为 试 材 筛 选出茎尖诱导培养最佳培养基配方为 M S 6 BA 0 5 mg L NAA 0 02mg L 并 建 立 其 组 培 快 繁 体 系 顾 地 周 26 采 用 均 匀 设 计 法 将 已 感 染 了 斑 驳 病毒和皱缩病毒的草莓试管苗在试管内诱导匍匐茎 再 将 带 有 匍 匐 茎 的 试 管 苗 直 接 进 行 56 高 温 处 理 后 切 取 1 mm 的 茎 尖 在 LS 6 BA 1 00 mg L GA31 90 mg L KT 1 00 mg L 培 养 基 进 行 培 养 通过病毒检测和栽培观察可知 脱 毒 率 高 达 100 2 5 超 低 温 脱 毒 超低温脱毒是一种新型高效脱毒技术 较 传 统 脱 毒 法 而 言 其 脱 毒 效 率 更 高 且 对 茎 尖 大 小 无 要 求 超低温冷冻疗法是兼植物种质资源保护与脱毒 双 重 作 用 的 一 种 脱 毒 方 法 其 作 用 原 理 是 27 利 用 茎尖分生组织细胞与分化细胞结构上的差异进行脱 毒 由于茎尖分生组织细胞体积较小 液 泡 小 和 较 大 核 质 体 积 比 等 特 点 脱 水 更 容 易 在 液 氮 环 境 中 不 易 被 冻 死 而茎尖分化细胞体积较大 含 有 较 大 的 液 泡 和 较 小 的 核 质 比 脱 水 处 理 较 难 在 超 低 温 环 境 下 易 被 冻 死 此 外 茎尖分生组织病毒含量少 而 分 化 组 织 往 往 是 病 毒 富 集 区 因 此 当 液 氮 处 理 分 生 组 织 后 受伤死亡的细胞大部分都是分化细胞 而 保 留 下 来 的 不 含 病 毒 分 生 组 织 可 通 过 组 织 培 养 获 得 无 8 6 果 树 资 源 學 報 2020 1 4 病 毒 植 株 27 Br i s o n 等 1997 首 次 运 用 超 低 温 脱 毒 法 脱 除 李 痘 包 病 毒 Plu m p o x v i r u s PPV 获 得 李 无 病 毒 植 株 此 后 超低温冷冻疗法开始普遍应 用 于 植 物 脱 毒 目 前 超 低 温 脱 毒 技 术 已 经 在 百 合 28 甘 薯 29 马 铃 薯 30 黄 瓜 31 葡 萄 29 柑 橘 32 33 香 蕉 31 樱 桃 34 猕 猴 桃 35 等 植 物 脱 除 病 毒 上 广 泛 应 用 对 于 草 莓 研 究 报 到 较 少 罗 娅 37 优 化 超 低 温 脱 除 体 系 草 莓 的 茎 尖 存 活 率 为 69 多 种 草 莓 病 毒 被 脱 除 脱 除 率 高 达 100 盛 宏 亚 38 以 携 带 草 莓 斑 驳 病 毒 SM o V 红 颜 为 供 试 材 料 建 立 预 防 红 颜 草 莓 的 茎 尖 玻 璃 化 超 低 温 脱 毒 体 系 利 用 RT PCR 技 术 检 测 草 莓 斑 驳 病 毒 的 脱 毒 效 果 脱 毒 率 为 100 陈 曦 39 以 福 莓 1 号 为 试 材 利用茎尖超低温冷冻脱毒技术将外植体低温锻 炼 2 周 后 茎 尖 在 预 培 养 基 上 暗 培 养 3 d 1 2 浓 度 PVS2 溶 液 及 全 浓 度 PVS2 溶 液 冰 上 冷 处 理 2 次 液 氮 冷 冻 1 h 后 在 39 的水浴中快速化冻 2mi n 卸 载 后 茎 尖 先 暗 培 养 3 d 后 转 入 正 常 光 照 培 养 再 生 培 养 成 活 率 约 30 病 毒 脱 除 率 为 100 3 草莓无病毒苗鉴定与繁殖 3 1 草莓病毒病检测方法 采用上述脱毒技术获得的草莓苗并不一定能够 完 全 脱 毒 因此需要对脱毒后的草莓苗进行病毒检 测 无病毒苗的鉴定主要有生物学鉴定 血 清 学 检 测 法 电 镜 检 测 法 等 47 目 前 分 子 PCR 技 术 也 被 广 泛 应 用 到 草 莓 病 毒 检 测 中 40 生 物 学 鉴 定 法 又 称 指 示 植 物 检 测 法 是最早应用于植物病毒检测的 方 法 目 前 仍 被 广 泛 应 用 47 该 检 测 方 法 可 以 直 接 观 察 到 检 测 结 果 无 需 特 定 仪 器 设 备 操 作 简 单 易 掌 握 不 过 检 测 时 间 耗 时 长 受外界环境因素影响大 容 易 出现检测结果的假阳性 降 低 其 检 测 的 灵 敏 度 48 血 清 学 病 毒 检 测 法 应 用 较 早 该 方 法 利 用 抗 原 与 抗体的特异性反应 来 鉴 定 植 物 是 否 携 带 病 毒 49 常 见 的 血 清 学 检 测 方 法 有 沉 淀 反 应 凝 聚 反 应 VBA 酶 联 免 疫 的 吸 附 法 ELISA 免 疫 荧 光 技 术 IFA 斑 点 免 疫 测 定 法 DIBA 以 及 免 疫 胶 体 金 技 术 GICT 49 等 这 些 方 法 具 有 较 高 的 检 测 灵 敏 性 能 够 快 速 的 检 测 到 草 莓 病 毒 操作也相对简易 方 便 但由于其检测时常依赖血清的品质 可 被 鉴 定 的 病 毒 种 类 受 到 限 制 目前仅有少部分果树病毒 的 抗 血 清 可 被 利 用 草 莓 病 毒 检 测 中 只 有 草 莓 轻 型 黄 斑 病 毒 和 草 莓 皱 缩 病 毒 抗 血 清 制 备 成 功 50 电 子 显 微 镜 技 术 在 生 物 学 细 胞 学 病毒学等多个生命 科 学 领 域 发 挥 重 要 作 用 不 仅 能 够 直 观 准 确 的 观 察 到 植 物 表 面 特 征 还 可 以 对 病 毒 机 理 进 行 深 入 的 内 在 挖 掘 由 于 设 备 价 格 昂 贵 对 实 验 人 员 操 作 技 术 要 求 高 并 没 有 广 泛 应 用 到 植 物 检 测 实 际 工 作 中 但电子显微技术作为辅助检测技术 在 分 子 生 物 学 领 域 发 挥 着 不 可 磨 灭 的 作 用 41 分 子 生 物 学 检 测 法 以 核 酸 分 子 杂 交 为 基 础 成 为 当 前 病 毒 检 测 最 主 要 方 法 因其检测时灵敏度高 特 异 性 强 不 受 季 节 外 界 环 境 影 响 采样后可随时进行大批量检测 发挥着血清学检测法及传统病毒检测法无法比拟的 优 势 目 前 反转录聚合酶链式反应 RT PCR 检 测 法 以 RNA 分子转录为基础的 NASBA 检 测 法 核酸杂交技术和基因芯片技术等是分子生物学检测 的 常 用 手 段 3 3 2 草莓脱毒苗繁育技术 草莓脱毒苗较传统繁殖方式有较大优势 其 在 植 物 学 性 状 果 实 品 质 丰产性等各项指标均优于普 通 繁 殖 苗 大 量 研 究 表 明 栽 培 无 病 毒 的 草 莓 苗 能 够 提 高 草 莓 的 质 量 草莓果实着色正常 果 形 整 齐 畸 形 果 率 降 低 19 这 些 都 为 草 莓 优 质 商 品 化 生 产 提 供 有 力 保 障 在现代化草莓种苗扩繁基地 脱 毒 苗 的 组 织 培 养 为 种 苗 生 产 发 挥 关 键 性 作 用 52 在 脱毒快繁过程中不仅要提高组培苗的增殖率和成活 率 还 要 求 对 培 养 基 浓 度 培养容器种类及凝固剂种 类 等 进 行 优 化 筛 选 在 保 证 种 苗 生 产 质 量 的 基 础 上 达 到 降 低 生 产 成 本 找 到 节 能 环 保 高 效 的 繁 育 技 术 张 恒 42 等 用 蛭 石 IBA 溶 液 作 为 草 莓 大 苗 沙 盘 生 根 培 养 基 利用保鲜膜对沙盘进行保湿 可 保 障 草莓继代培养的大苗在沙盘里生根 将 该 技 术 应 用 于 草 莓 脱 毒 苗 的 扩 繁 可 节 约 大 量 成 本 谢 文 申 43 以 脱 毒 野 薄 荷 试 管 苗 为 外 植 体 用 30 g L 食 用 白 糖 代 替 蔗 糖 用 凉 开 水 代 替 蒸 馏 水 配 置 浅 层 液 体 培 养 基 比普通固体培养基节约成本 57 44 张 春 芬 44 为降低草莓脱毒组培苗的生产成本 用 白 砂 糖 替 换 蔗 糖 卡 拉 胶 替 换 琼 脂 粉 总 成 本 降 为 原 来 的 32 5 采 用 带 塑 料 瓶 盖 的 玻 璃 瓶 可 大 大 节 省 劳 动 力 提 高 生 产 效 率 另 外 随 着 生 物 技 术 发 展 脱 毒草莓苗的培育更倾向于集生物工程 病 毒 学 检 测 和快繁农艺技术为一体的栽培模式 应 将 这 一 高 新 技 术 系 统 化 高 效 化 实用化的应用到草莓生产中 4 展 望 近 年 来 随着绿色生态种植农业的蓬勃发展 草 莓 种 植 面 积 逐 年 增 加 由 于 其 生 长 周 期 短 采 摘 方 9 6 霍 辰 思 等 草 莓 病 毒 病 脱毒技术及病毒检测研究进展 便 草莓生态园自助采摘模式已成为深受市场青睐 的 一 项 新 型 产 业 脱毒草莓苗在生产上的应用 极 大 提 高 了 种 植 者 积 极 性 而草莓病毒病严重制约草 莓 高 产 优 质 进 程 重 茬 种 植 造 成 草 莓 品 种 单 一 种 性 退 化 为了满足市场上草莓周年供应 建 立 完 善 的 种 苗 繁 育 体 系 标 准 化 草 莓 病 毒 检 测 中 心 40 从 源 头 上 管 控 草 莓 病 毒 引进脱毒成功的草莓品种尤为 重 要 由于草莓病毒病多为复合型病毒感染 单 一 应用传统的脱毒方法并不能达到良好的脱毒效果 生 产 上 应 该 采 取 多 种 脱 毒 方 法 混 合 使 用 随 着 基 因 工 程 的 发 展 生物技术的广泛应用为草莓脱毒及无 病 毒 苗 鉴 定 开 辟 了 新 的 途 径 目 前 草 莓 脱 毒 苗 繁 育 体 系 虽 然 有 了 一 定 的 发 展 但 是 组 培 快 繁 技 术 成 本 高 操 作 环 节 严 谨 难 度 大 资 源 浪 费 严 重 需 进 一 步 探 索 符 合 生 产 实 际 节 能 环 保 高 效 的 繁 育 体 系 促 进 草 莓 业 健 康 发 展 参 考 文 献 1 张 玉 星 果 树 栽 培 学 各 论 M 北 京 中国农业出版社 2005 2 苏 代 发 童 江 云 杨 俊 誉 等 草莓病毒病及其研究进展 J 云 南 大 学 学 报 自 然 科 学 版 2019 41 6 1221 1237 3 陈 宗 玲 律 宝 春 徐 全 明 等 草莓病毒及其检测技术研究 进 展 J 种 子 世 界 2016 3 17 19 4 谭 永 军 王 际 轩 魏 永 祥 等 草莓脱病毒及无病毒苗繁育 J 上 海 蔬 菜 2016 3 7 2 7 4 5 陈 怀 勐 高 丽 路 河 等 红颜草莓茎尖组培脱毒苗技 术 研 究 J 北 京 农 业 2011 3 3 4 6 高 慧 卿 樊 兰 瑛 王 秀 红 等 茎尖培养及热处理技术在百 合脱毒中的应用研究 J 山西农业大学学报 自 然 科 学 版 2010 30 6 529 532 7 St eng er D C M u l l i n R H M o r r i s T J Ch ar act er i z at i o n anddet ect i o n o ft h e s t r aw ber r y necr o t i c s h o cki s o l at e o f t o baccos t r eakv i r u s J Ph y t o p at h o l o g y 1987 7 7 9 1330 1337 8 周 厚 成 何 水 涛 草莓病毒病研究进展 J 果 树 学 报 2003 20 5 421 426 9 周 厚 成 草 莓 镶 脉 病 毒 SVBV CP 基因的克隆及草莓遗 传转化体系的建立 D 杨 凌 西北农林科技大学硕士论 文 2005 10 贾 寿 山 陈 莉 郭 春 丽 等 草莓病毒病概述 C 草 莓 研 究 进 展 2015 394 400 11 肖 敏 草 莓 镶 脉 病 毒 PCR 检测体系优化及草莓病毒 脱 除 方 法 研 究 D 沈 阳 沈 阳 农 业 大 学 2005 12 张 志 恒 王 强 草莓安全生产技术手册 M 北 京 中 国 农 业 出 版 社 2008 13 汤 玲 贺 欢 孔 芬 等 草莓组织培养研究综述 J 甘肃甘农业科技肃农业科技 2017 9 4 68 7 1 14 M o r elG M Pr o du ci ngv i r u s f r ee cy mbi di u ms J A mer i can Or ch i dSo ci et y Bu l l et i n 1960 29 495 497 15 金 美 芳 曹 智 蔡 俊 杰 等 花草莓的组织培养与快繁 技 术 研 究 J 广 西 植 物 2017 37 11 1395 1405 16 高 山 林 草莓改良热处理分生组织脱毒技术及脱毒苗应 用 J 江 苏 农 业 科 学 1999 3 63 64 17 高 遐 虹 李 梅 提高草莓茎尖组织培养脱毒效率研究 J 中 国 果 树 1994 14 2 5 6 18 何 欢 乐 阳 静 蔡 润 等 草莓茎尖培养脱毒效果研 究 J 北 方 园 艺 2005 5 7 9 81 19 肖 君 泽 黄 益 姜 放 军 等 草莓病毒病及其脱毒与检 测技术研究进展 J 江 西 农 业 学 报 2010 22 8 88 90 20 廖 俊 杰 洪 建 原 邓 明 等 草莓热处理脱病毒的研究 J 北 方 果 树 1991 4 7 11 21 刘 健 刘 向 蕾 胡 繁 荣 等 草莓热处理结合茎尖培养 脱 毒 效 果 的 研 究 J 浙 江 农 业 科 学 2009 6 1088 1090 22 秦 梅 张 燕 徐 美 恩 等 甘薯茎尖脱毒及组培快繁 技 术 J 安 徽 农 业 科 学 2014 32 24 25 44 23 张 婧 颖 马铃薯脱毒方法与多重 RT PCR 病 毒 检 测 技 术 的 研 究 D 吉 林 吉 林 农 业 大 学 2016 24 王 际 轩 草莓的病毒病及无病毒苗繁殖 J 北 方 果 树 2011 2 44 47 25 李 志 强 王 晶 丁 国 亮 等 草莓热处理结合茎尖脱毒 技 术 研 究 J 北 方 园 艺 2012 5 125 127 26 顾 地 周 朱 俊 义 冯 颖 等 草莓试管内诱导匍匐茎和 高温处理结合茎尖培养脱毒技术研究 J 西 北 农 林 科 技 大 学 学 报 自 然 科 学 版 2010 38 11 89 94 27 邱 静 汤 浩 茹 曹 会 娟 等 园艺植物茎尖冷冻疗法脱 毒 的 技 术 研 究 J 植 物 生 理 学 报 2014 50 1 1 6 28 靳 慧 洁 东方百合病毒检测与茎尖超低温脱毒研究 D 福 建 福 建 农 林 大 学 2009 29 WangQ M aw as s iM l iP et al El i mi nat i o n o fg r ap e v i ne v i r u s A GVA by cr y o p r es er v at i o n o fi n v i t r o g r o w n s h o o t t i p s o fV it i s v i nif er aL J Pl ant Sci 2003 165 321 327 30 白 建 明 陈 晓 玲 卢 新 雄 等 超低温保存法去除马铃薯 X 病毒和马铃薯纺锤块茎类病毒 J 分 子 植 物 育 种 2010 8 3 605 611 31 H el l i o t B Pani s B et al Cr y o p r es er v at i o n f o r t h e el i m i nat i o n o fcu cu mber mo s ai c andbanana s t r eakv i r u s es f r o m banana M u s a s p p J Pl ant Cel lRep o r t s 2002 20 12 1117 1122 32 王 子 成 邓 秀 新 玻璃化法超低温保存柑橘茎尖及植株 再 生 J 园 艺 学 报 2001 28 4 301 306 33 丁 芳 柑橘黄龙病菌及与其混合发病的分子特性及超 低 温 研 究 D 武 汉 华 中 农 业 大 学 2006 0 7 果 树 资 源 學 報 2020 1 4 34 Ni i noT Tas h i r oK Su z u k iM 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